Geri Dön

Insan b2-adrenerjık reseptöründe oluşturulan bazı mutasyonların reseptör-yeşil floresan protein füzyonu ile hücre içi dağılımının incelenmesi

Visualing intracellular distribution of wild type and mutant b2-afrenergic receptor by means of green flourescent protein fusion

PDF İndir

  1. Tez No: 233776
  2. Yazar: OLGA ALTUNTAŞ
  3. Danışmanlar: PROF.DR. HASAN ONGUN ONARAN
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: b2-Adrenerjik Reseptör, Hücre içi Protein Trafiği, Mutasyon, Protein-Protein Füzyonu, Yeşil Floresan Protein, b2-Adrenergic Receptor, Green Fluorescent Protein, Intracellular Protein Trafficking, Point Mutation, Protein-Protein Fusion, Mutation
  7. Yıl: 2007
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Ankara Üniversitesi
  10. Enstitü: Biyoteknoloji Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

Hücreler arasında nörotransmiterler, hormonlar, otakoidler gibi kimyasal mediyatörler ile iletilen sinyallerin büyük bir bölümü G proteinlerine kenetli reseptörlerle (GPCR) algılanır. Tıpta kullanılan ilaçların %70'inin hedefini oluşturan bu reseptörlerin sinyal iletme mekanizmalarının ayrıntıları güncelliğini koruyan sıcak araştırma alanlarından biridir. Bu çalışmada bu reseptörlerin moleküler aktivasyon mekanizmasının daha iyi anlaşılmasına katkısı olabilecek bir konstitütif aktivatör mutasyon (insan b2-reseptöründe F282L), yaban tip reseptör ve CAM mutantıyla karşılaştırmalı olarak incelenmiştir. Çalışmada, heterolog transfeksiyon için HEK 293 hücreleri ve bu reseptörlerin prototipik bir örneği olan insan b2-adrenoseptörü deneysel model olarak kullanılmıştır. F282L mutantının, ligand bağlama sinyal iletme gibi özelliklerinin yanı sıra hücre içi dağılımı ve trafiğini incelemek üzere yeşil floresan protein ve onun bir variyantı olan dendra proteini ile yaban tip ya da mutant reseptörlerin birleşik (füzyon) proteinleri elde edilmiş ve bu tür çalışmalara teknolojik altyapı oluşturmak üzere bu birleşik proteinleri eksprese eden kalıcı hücre klonları elde edilmiştir. Bu çalışma, fotokonversiyon özelliği gösteren dendra-reseptör füzyonunun elde edildiği, bu füzyon proteininin fonksiyonel olduğunun gösterildiği ve bu araç kullanılarak reseptörün hücre zarındaki tek yönlü hareketinin gözlenebildiği ilk çalışmadır. Çalışmada elde edilen bulgular şöyle özetlenebilir: 1) Reseptörün ligand bağlanma bölgesine yakın bir noktada VI. transmembran heliks üzerinde bulunan F282L mutasyonu b2-adrenoseptörü (Gs ve adenilat siklaza kenetlenmek bakımından) konstitütif olarak aktive etmektedir. 2) F282L-mutantının konstitütif aktivite özellikleri ve ligand bağlama paterni agonist ile bağlı reseptörü taklit ettiği düşünülen CAM mutantından farklı bulunmuştur. 3) F282L-b2-adrenoseptör mutantının hücresel dağılımı yine CAM mutantınınkinden (ya da yaban tipinkinden) farklı bulunmuştur. 4) Tüm reseptör türlerinin hücre zarında en az iki farklı difüzif havuz oluşturdukları saptanmıştır. Bu bulgular b-adrenoseptörün farklı moleküler aktivasyon mekanizmalarının olabileceğine ve reseptörün birden fazla aktif durumunun varlığına işaret etmektedir. F282L mutantının gözlenen bu özellikleri tezin son bölümünde bir kuramsal denge modeli çerçevesinde açiklanmıştır.

Özet (Çeviri)

A large part of the signals transferred between cells by neurotransmitters, hormones, autacoids are perceived by means of G protein coupled receptors (GPCR). One of the hottest areas of modern therapeutics is studying the signaling mechanisms of these receptors, which constitute the main target of drugs used in medicine (70% of all available therapeutics target the GPCR). In the present study, a relatively unknown constitutive activating mutation (F282L in human b2-receptor) was investigated on a comparative basis (with wild type receptor and CAM mutant) to contribute a better understanding of the molecular activation mechanisms of GPCR. HEK 293 cells were used for heterologue transfection and human b2-adrenoceptors (as a prototypical example of GPCR) were used as the experimental model. Ligand binding and signaling properties of F282L mutant, compared to wild type and CAM receptor were investigated in purified membrane preparations or in intact cells. In order to investigate intracellular distribution or trafficking of F282L mutant compared to wild type and CAM mutant, fluorescent protein (GFP or dendra) fusions with the relevant receptors types were obtained. Cell clones that stably express these fusion proteins were also obtained as a experimential tool. In this respect, the present study is the first one in the literature where a receptor-dendra fusion was constructed, expressed, and shown to be functional and photoconvertible. The latter property of the fusion protein allows one to investigate unidirectional motion of the receptor in plasmalemma. Results of the present study can be summarized as follows: 1) F282L mutation in human ß2-adrenoceptor in transmembrane helix VI at a position close to the ligand binding site lead to the constitutive activity of b2-adrenoceptor (in terms of activating Gs and adenylyl cyclase), 2) Constitutive activity and ligand binding patterns of the F282L mutant were different from that of CAM mutant, which has been considered to be imitating agonist- bound receptor. 3) Cellular distribution of F282L-b2-adrenoceptor was found to be different from that of CAM mutant. 4) For all kinds of b2-AR investigated here, two different diffusive pools (fast and slow) were observed in the cellular membrane. These findings indicate that the molecular activation mechanism of b2-adrenoceptor may not be unique and that b2-adrenoceptor may possess more than one active state. Such properties of F282L mutant were explained in the last part of this dissertation in a framework of an equilibrium model.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    445330

    İn-vitro ortamda farklı kaynaklardan elde edilen mezenkimal kök hücrelerde adrenerjik reseptörlerin gösterilmesi ve reseptör blokajının farklılaşmaya etkisi

    Investigation of adrenergic receptors in mesenchymal stem cells obtained from different sources in vitro and influence of receptor block on differentiation

    ERKAN MAYTALMAN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    Eczacılık ve FarmakolojiÇukurova Üniversitesi

    Tıbbi Farmakoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. FAZİLET AKSU

  2. Tez No

    833397

    Deneysel iskemi reperfüzyon hasarında deksmedetomidin ve levobupivakainin etkileri

    Effects of dexmedetomidine and levobupivacane on experimental ischemia reperfusion injury

    HALİL İBRAHİM TURNA

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Anestezi ve ReanimasyonSağlık Bilimleri Üniversitesi

    Anesteziyoloji ve Reanimasyon Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. SEVGİ KESİCİ

  3. Tez No

    5735

    Gliburidin tip-II diabetik sıçanlarda kardiak performans üzerine etkisi

    Başlık çevirisi yok

    AYÇA ÖZÜARI

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1989

    Eczacılık ve FarmakolojiAnkara Üniversitesi

    Farmakoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MELİH ALTAN

  4. Tez No

    663650

    İnsan sağlığı açısından önem taşıyan folik asit, riboflavin ve piridoksin vitaminlerinin tayinleri için elektrokimyasal sensör geliştirilmesi

    Development of an electrochemical sensor for the determination of folic acid, riboflavin and pyridoxine vitamins important for the human health

    EBRAR DOKUR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    KimyaYıldız Teknik Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. YÜCEL ŞAHİN

    DR. ÖZGE GÖRDÜK

  5. Tez No

    573089

    Kırmızı pul biberlerde Aflatoksin (B1, B2, G1, G2) varlığının araştırılması

    Investigation of the presence of Aflatoxin (B1, B2, G1, G2) in red chili powder

    ASİYE DAYAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    Besin Hijyeni ve TeknolojisiVan Yüzüncü Yıl Üniversitesi

    Besin Hijyeni ve Teknolojisi Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. YAKUP CAN SANCAK

Geri Dön