Geri Dön

Maya karbonik anhidrazının ekspresyonu, saflaştırılması, elektroforetik ve kinetik özelliklerinin incelenmesi

Expression and purification of yeast carbonic anhydrase and investigation of its electrophoretic and kinetic properties

PDF İndir

  1. Tez No: 237531
  2. Yazar: SEMRA IŞIK
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. FERAY KÖÇKAR, PROF. DR. OKTAY ARSLAN
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2008
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Balıkesir Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 113

Özet

Karbonik anhidraz (CA, EC 4.2.1.1) CO2 molekülünün hidratasyonunu ve HCO3- iyonunun dehidratasyonunu katalizleyen, Zn2+ iyonu içeren bir metaloenzimdir. Bütün bilinen CA'lar ?, ß, ?, ? ve ?-CA olmak üzere beş CA gen ailesi olarak sınıflandırılmıştır. Maya CA enziminin de ait olduğu ß-CA sınıfının izoformları, yüksek bitkilerde ve siyanobakterileri de içeren alglerde yaygındır. ß-CA'lar genellikle 2-6 monomerden oluşan oligomerlerdir.Bu çalışmada, bazı klinik sülfonamitlerin Maya CA üzerinde inhibisyon etkileri araştırılmıştır. Bu amaçla maya genomik DNA'sı izole edilerek PCR'a dayalı teknik ile NCE103 geni çoğaltılmıştır. Bu gen pGEM-T vektörüne ve daha sonra pET21a ekspresyon vektörüne klonlanmıştır. Maya CA enziminin ekspresyonu E.coli BL21(DE3) içerisinde gerçekleştirilmiştir. Hücre ekstraktından Maya CA enzimi Jel Filtrasyon Kromatografisi ile saflaştırılmış ve enzimin saflığı Sodyum Dodesil Sülfat Poliakrilamit Jel Elektroforezi (SDS-PAGE) ile tespit edilmiştir. Enzim aktivitesi ve inhibisyon çalışmaları Stop-Flow cihazı ile yapılmıştır. Klinik amaçlı kullanılan 15 farklı sülfonamit türevlerinin Maya CA'ya karşı inhibisyon etkileri incelenmiştir.Bu amaçla her bir bileşik için IC50 (%50 inhibisyona neden olan inhibitör konsantrasyonu) değeri saptanmıştır. Bu değerler sırasıyla; Asetazolamit için 8.27x10-8 M, Metazolamid için 8.61 x 10-6 M, Etokszolamid için 5.41 x 10-6 M, Diklorfenamid için 5.73 x 10-6 M, Dorzolamid için 7.35 x 10-6 M, Brinzolamid için 7.58 x 10-6 M, Benzolamid için 7.37 x 10-6 M, Topiramat için 7.35 x 10-6 M, Sulpirid için 8.74 x 10-6 M, İndisulam için 8.93 x 10-6 M, Zonisamid için 6.29 x 10-6 M, Valdekoksib için 1.04 x 10-5 M, Selekoksib için 7.41 x 10-6 M, Sulthiam için 1.51 x 10-5 M, Sakarin için 6.43 x 10-4 M olarak tespit edilmiştir.ANAHTAR SÖZCÜKLER : Karbonik anhidraz, ß-CA, maya CA, klonlama, ekspresyon, inhibisyon, sülfonamid

Özet (Çeviri)

Carbonic anhydrase (CA, EC 4.2.1.1) is a Zn2+ containig metalloenzyme which catalyses the reversible hydration of CO2 to the bicarbonate ion. All known CAs can be grouped in five evolutionarily unrelated CA families designated ?-, ß-, ?-, ?-, ?-CA. ß-CAs, in which yeast CA belongs, are common in higher plants and algae including cyanobacteria. ß-CAs are usually oligomers, generally formed of two to six monomers.In this study the inhibition effects of some clinical sulfonamides on yeast CA were investigated. For this purpose yeast genomic DNA was isolated and NCE103 gene was amplified by PCR based strategy. NCE103 gene was cloned into pGEM-T vector and subsequently into pET21a expression vector. The exypression of yeast CA was performed in E.coli BL21(DE3). Yeast CA was purified by Gell Filtration Chromatography. The purity of enzyme was determined by Sodium Dodesyl Sulfate Polyacrilamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE). Enzyme activity and inhibition studies were performed by Stop Flow spectrophotometer. The inhibition effects of 15 clinicaly used sulfonamides on yeast CA were investigated.Inhibition for yeast CA was calculated as IC50 value. IC50 values were determined as 8.27x10-8 M (mol/L) for Acetazolamide, 8.61 x 10-6 M for Metazolamide, 5.41 x 10-6 M for Ethoxzolamide, 5.73 x 10-6 M for Dichlorophenamide, 7.35 x 10-6 M for Dorzolamide, 7.58 x 10-6 M for Brinzolamide, 7.37 x 10-6 M for Benzolamide, 7.35 x 10-6 M for Topiramate, 8.74 x 10-6 M for Sulpiride, 8.93 x 10-6 M for İndisulam, 6.29 x 10-6 M for Zonisamide, 1.04 x 10-5 M for Valdecoxib, 7.41 x 10-6 M for Selecoxib, 1.51 x 10-5 M for Sulthiame and 6.43 x 10-4 M for Saccharin respectively.KEY WORDS: Carbonic anhydrase, ß-CA, yeast CA, clonning, expression, inhibition, sulfonamide

Benzer Tezler

  1. Tez No

    899282

    Tam ve yarı kuru kapya biber üretiminde karbonik maserasyon ön işlemi ile kurutma koşullarının optimizasyonu ve ürünlerin depolama stabilitesi üzerine etkilerinin incelenmesi

    Optimization of carbonic maceration pre-treatment and drying conditions in full and semi dried capia pepper production and examination it's effects on storage stability of the products

    MEHMET AKSU

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    Gıda MühendisliğiSüleyman Demirel Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GÜLCAN ÖZKAN

    PROF. DR. ERKAN KARACABEY

  2. Tez No

    170425

    Tulum peynirinin tat ve aroması ile toplam karbonil madde içeriği arasındaki ilişkinin belirlenmesi

    Determination of relationship between total carbonyl compound contents and aroma of tulum cheese

    ÖZGÜR ERCEYES

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2005

    Gıda MühendisliğiGaziosmanpaşa Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ.DR. METİN YILDIRIM

  3. Tez No

    647752

    Antidiyabetik ilaç formuna sahip bazı moleküllerin sentezi, karakterizasyonu, biyolojik özelliklerinin incelenmesi ve moleküler yerleştirme çalışmaları

    Synthesis, characterization, biological properties and moleculs docking studies of some molecules having antidiabetic drug forms

    SEYİT ALİ GÜNGÖR

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2020

    KimyaKahramanmaraş Sütçü İmam Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MEHMET TÜMER

    PROF. DR. ŞÜKRÜ BEYDEMİR

  4. Tez No

    216886

    Oksidatif stres uygulanmış Schizosaccharomyces pombe’de protein oksidasyonuna karşı doğal antioksidanların koruyucu etkisi

    Protective effect of natural antioxidants against protein oxidation in oxidatively stressed Schizosaccharomyces pombe

    İSMAİL HAMAD

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2007

    Biyokimyaİstanbul Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. NAZLI ARDA

  5. Tez No

    571729

    The influence of raw materials, commercial yeast and nitrogen addition on cider quality

    Elma şarabının kalitesi üzerine hammadde, ticari maya ve azot ilavesinin etkisi

    NAIDANDORJ DAMDIN

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2019

    Gıda MühendisliğiÇukurova Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. HÜSEYİN ERTEN

Geri Dön