Geri Dön

İnsan lökosit myeloperoksidazının saflaştırılması

Purification of myeloperoxidase from human leucocytes

PDF İndir

  1. Tez No: 243212
  2. Yazar: LEYLA BİLGE DEVECİOĞLU
  3. Danışmanlar: PROF. DR. NAİME CANORUÇ
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2009
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Dicle Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 61

Özet

Myeloperoksidaz (MPO), (oksidoraductaz, EC 1.11.1.7) memeli nötrofillerinin granüllerinde yer alan bir enzim olup, fagosite edilmiş bakterilerin öldürülmesinde önemli rol oynamaktadır.Buffy coattan ficoll gradiyeniti ile, EDTA'lı antikoagülanli kandan, sitratlı antikoagülanlı at kanından lökosit elde edilerek, buffy coattan CaCl2 kullanarak lökositleri yıkamasıyla, native fare 32DcI3 hücrelerinden ve lökoferez sonrası lökositlerden myeloperoksidaz (MPO) enzimi izole edilmiştir.Bu çalışmada insan myeloperoksidaz enzimini (MPO), lökosit solübilizasyonu, Con A Sepharose 4B affinite jel kromotografisi, amonyum sülfat çöktürmesi, Sephacryl S300 HR jel kromotografisi ve CM Sefhadex G 25 İyon Değiştirici kromotografi aşamaları ile saflaştırılmıştır. Bu yöntem ile H2O2 substratı kullanılarak insan myeloperoksidaz enzimi 71,45 kez saflaştırılmış ve spesifik aktivitesi 1192,574 u/mg protein olarak bulunmuştur. Sodyum Dodesil Sülfat Poliakrilamid Jel Elektroforezi ile saflık derecesi kontrol edilmiş. Saflaştırılmış enzimin Michaelis-Menten ve Lineweaver-Burk grafikleri çizilerek 37 oC'de 50mM KPO4 , %0,5 CETAB tamponunda (pH: 5,4) H2O2 substratı için Km değeri 0,369 µmol ve Vm değeri 1,077 µmol/dk/mg protein olarak saptanmıştır.

Özet (Çeviri)

Myeloperoxidase (MPO), (transmitter H2O2 oxidoreductase, EC 1.11.1.7) is an enzyme found in mammalian neutrophil granules, play an important part in killing these bacteriums fagosited.Myeloperoxidase (MPO), enzym has been isolated from leukophoresis preparations and native mouse 32Dc13 cells and using CaCl2 from buffy coats by washing up leucocyte. Leucocyte has been obtained form horse blood containing anticoagulated with citrate, anticoagulated boold with EDTA and buffy coats on a ficoll density gradient.At that study; human Myeloperoxidase (MPO) enzyme has been purified with rank of CM Sefhadex İon Exchange, Sefhacryl S300 HR Gel filtration chromatography, Con A Sepharose 4B affinity gel chromatography and adjust to 80% ammonium sulfate by the addition of dry ammonium sulfate. In our study human myeloperoxidase had a specific activity of 1192,574 units per milligram protein when H2O2 used as a substrate with a purification fold of 71,45. The purity was controlled by using SDS-PAGE. The purified enzyme had a Km value of 0,369 µmol, which was calculated from Michaelis-Menten and Lineweaver-Burk plots, by using H2O2 as a substrate at the assay conditions of 370C in 50 mM KPO4 buffer (pH:5,4) containing 0,5% CETAB.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    798206

    Böbrek transplantasyonu yapılacak PRA (panel reaktif antikor) pozitif hastalarda HLA haplotipleri ile immünofenotip ilişkisinin araştırılması

    Invesgation of the relationship between PRA positive patients with HLA haplotypes and immunophenotypes in renal transplant patients

    BELEMİR NERMİN ANIL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    BiyomühendislikHacettepe Üniversitesi

    Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. İBRAHİM VARGEL

  2. Tez No

    761655

    Böbrek nakli alıcı ve alıcı adaylarınınhla tipleri ve immünolojik duyarlılık ile ilişkisi

    Relation between HLA TYPES and immunological susceptibility of kidney transplant recipients and recipient candidates

    PIRIL BÜYÜKAŞIK

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    İç HastalıklarıBaşkent Üniversitesi

    İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. UĞUR HACI MUŞABAK

  3. Tez No

    412445

    İnsan lökosit antijeni (HLA)-B27 pozitif ve B27 negatif ankilozan spondilit tanılı hastalarda mefv gen mutasyonlarının araştırılması

    Investigation of mutations in mefv gene among human leukocyte antigen (HLA)-b27 positive and B27 negative in ankylosing spondylitis patients

    SELİN TAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    GenetikTrakya Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. HİLMİ TOZKIR

  4. Tez No

    393023

    Investigation of class I and II anti-human leukocyte antigen antibodies in systemic lupus erythematosus and scleroderma patients

    Sistemik lupus eritematozus ve skleroderma hastalarında anti-insan lökosit antijen antikorlarının incelenmesi

    METİN YAZAR

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2015

    Allerji ve İmmünolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AYÇA SAYI YAZGAN

  5. Tez No

    225652

    Epsteın-Barr Virus ile enfekte B Lenfositlerde İnsan Lökosit Antijen-G ekspresyonunun araştırılması

    Investigation of Human Leukocyte Antigen-G molecules expressing on B Lymphocytes infected with Epstein-Barr Virus

    CELALETTİN ÖZTUĞ ÖNAL

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2008

    Allerji ve İmmünolojiGazi Üniversitesi

    İmmünoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. BİLKAY BAŞTÜRK

Geri Dön