ATP-bağımlı proteaz lon geninin Geobacillus kaustophilus'tan klonlanması, DNA dizisinin belirlenmesi ve ekspresyon
Cloning, sequencing and expression of Geobacillus kaustophilus ATP dependent lon proteaz gene
- Tez No: 252939
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. F. İNCİ ÖZDEMİR
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2009
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gebze Yüksek Teknoloji Enstitüsü
- Enstitü: Mühendislik ve Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 86
Özet
La olarak da adlandırılan lon proteaz, ilk olarak Escherichia coli den saflaştırılmış ilk ATP-bağımlı proteazdır. Lon proteaz, diğer ATP-bağımlı proteazlarda (FtsH, ClpAP, ClpXP, HslVU ve 26S proteazom) olduğu gibi AAA+ protein süper ailesine (ATPase associated with diverse cellular activities) aittir. Lon proteazlar hücre içi proteolizisden sorumlu anahtar enzimlerdir. Mutant ve anormal proteinleri elimine ederek hücre içinde protein kalite kontrolüne ve kısa-süreli düzenleyici proteinlerin yıkımına katılarak hücresel normal şartların devamlılığının sağlanmasına katkıda bulunurlar. Lon proteaz homologları sadece bakterilerde değil, insan, maya ve bitkilerde de bulunmuştur. Bu bilgiler Lon'un çok önemli bir biyolojik rol oynadığını göstermektedir. Bununla beraber Lon proteazın proteolitik aktivitesi ve ATP-bağımlı durumda çeşitli substratları nasıl tanıyabildiği hala tam olarak açık değildir.Bu tez çalışmasında, thermofilik bir bakteri olan Geobacillus kaustophilus'un Lon proteazı ilk defa Escherichia coli `de klonlanmış ve eksprese edilmiştir. Yaklaşık 2500 bç uzunluğundaki lon geni önce bir klonlama vektörü olan pGEM-T vektöre ve daha sonra E. coli'de pGEX 6P-1 vektörüne alt-klonlama yapıldıktan sonra aktarılmıştır. Yaklaşık 87 kDa büyüklüğündeki Lon proteaz glutathione S-transferaz (GST 26 kDa) füzyon proteini ile DH5? E.coli'de eksprese edilmiştir.
Özet (Çeviri)
Lon protease (also called La) is the first isolated ATP-dependent protease in E. coli. Lon is a member of the AAA+ super family (ATPase associated with diverse cellular activities) like all other ATP-dependent proteases (FtsH, ClpAP, ClpXP, HslVU ve 26S proteazom). Lon proteases are key enzymes responsible for intracellular proteolysis, contributing to protein control and cellular homeostasis by eliminating mutant and abnormal proteins and participation in rapid turnover of short-lives regulatory proteins. Homologs of the lon protease are found not only in bacteria also in human, yeast and plants. These observations indicate that Lon may play crucial biological roles in various organisms. However how Lon protease recognises a variety of substrates in ATP dependent manner is still unclear.In this study, Geobacillus kaustophilus ATP dependent Lon protease first time cloned and expressed in E. coli. About 2500 bp lon gene first cloned into pGEM-T cloning vector then subcloned into pGEX 6P-1 in E. coli. Lon, 87 kDa molecular weight, were expressed with glutathione S-transferaz (GST 26 kDa) as a fusion protein.
Benzer Tezler
- Lon proteaz geninin çoklu kopyalarının streptomyces coelıcolor A3(2)'de homolog ifadesi ve Esherichia coli 'de heterolog ifadesi üzerine çalışmalar
Studies on expression of multiple copies of lon protease gene homologously in streptomyces coelicolor A3(2) and heterologously in Esherichia coli
HALİL YILMAZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
BiyolojiGebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SEDEF TUNCA GEDİK
DR. ÖĞR. ÜYESİ TUĞRUL DORUK
- Streptomyces coelicolor A3(2)'de Lon proteazın ikincil metabolit üretimine etkisi
Effect of Lon protease on secondary metabolite production in streptomyces coelicolor A3(2)
ZEYNEP DEMİR ÖKSÜZ
Doktora
Türkçe
2019
BiyolojiGebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SEDEF TUNCA GEDİK
- Rekombinant Geobacillus kaustophilus Lon proteininin E. coli'den saflaştırılması ve nitelendirilmesi
Purification and characterization of rekombinant Geobacillus kaustophilus Lon protein from E. coli
HATİCE ZİŞAN ASAL
Yüksek Lisans
Türkçe
2011
BiyolojiGebze Yüksek Teknoloji EnstitüsüMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. F. İNCİ ÖZDEMİR
- Kinetic characterization of Geobacillus kaustophilus ATP-dependent lon protease
Geobacillus kaustophilus ATP-bağımlı lon proteazın kinetik karakterizasyonu
LEMAN ÖZEL
Yüksek Lisans
İngilizce
2021
BiyokimyaGebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ FATMA İNCİ ÖZDEMİR
- Cloning and expression of membrane-bound FtsH protease of Geobacillus kaustophilus in escherichia coli
Membran bağlı FtsH proteazın Geobacillus kaustophilus'dan escherichia coli'de klonlaması ve ekspresyonu
SALIM SAIM RAMADHANI
Yüksek Lisans
İngilizce
2016
BiyokimyaGebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. FATMA İNCİ ÖZDEMİR