Diş pulpası kök hücrelerinin in vitro epitelyal ve fibroblastik hücrelere farklılaşması
In vitro epithelial and fibroblastic differentiation of dental pulp stem cells
- Tez No: 255494
- Danışmanlar: PROF. DR. ERDAL KARAÖZ, PROF. DR. S. İSMET DELİLOĞLU GÜRHAN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Diş Hekimliği, Histoloji ve Embriyoloji, Biotechnology, Dentistry, Histology and Embryology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2009
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ege Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 130
Özet
Hücresel tedavi ve doku/organ mühendisliği uygulamaları için diş pulpası kaynaklı kök hücreler (DP-KH) önemli bir potansiyele sahiptir. Bu çalışmanın amacı, önceki çalışmalarda nörojenik, adipojenik, miyojenik, odontojenik/osteojenik farklılaşmaları gösterilen iDP-MKH'lerin fibroblastik ve epitelyal hücre dizilerine farklılaşma potansiyelinin belirlenmesidir.Bu araştırmada, lokal anestezi altında çekilen gömük yirmi yaş dişleri (n=5) kullanılmıştır. Açığa çıkarılmış olan pulpa dokusu kollajenaz ile sindirilme işleminden geçirilerek ayrıştırılan hücreler uygun besi ortamında kültüre alınmıştır. Her pasaj sonrası (P1'den P5'e kadar) akış sitometri cihazında ve immunohistokimyasal (İHK) yöntemler ile immunofenotipleme çalışmaları gerçekleştirilmiştir. Bu çalışmalar sonucunda, iDP-MKH'lerin hematopoetik hücre belirteçlerini (CD14, CD34, CD45, CD117, HLA-DR gibi) eksprese etmedikleri, buna karşın MKH belirteçleri CD13, CD44 ve CD90 için yüksek düzeylerde pozitif oldukları tespit edilmiştir. Ayrıca, iDP-MKH'lerin vimentin, fibronektin, ? -düz kas aktin, beta-tubulin, osteokalsin, osteonektin ve embriyonik kök hücre belirteci SSEA-4 eksprese ettikleri gözlenmiştir. Bununla birlikte, iDP-MKH'lerin in vitro koşullarda osteojenik ve adipojenik hücre serilerine farklılaşabildikleri görülmüştür. Osteojenik farklılaşmış hücreler osteokalsin, ostenektin ve BMP4 için kuvvetli pozitif immun reaksiyon göstermiş ve adipositlere farklılaşan iDP-MKH'lerin sitoplazmalarında yağ vakuolleri tespit edilmiştir.Epitelyal farklılaşması EGF, HGF, KGF ve IGF-2 büyüme faktörleri ile uyarılan iDP-MKH'lerin kübik morfolojik farklılaşma ve epitelyal hücre belirteçleri (sitokeratin 18 ve 19) için kuvvetli immun-reaksiyon gösterdikleri buna karşılık nestin ekspresyonlarının azaldığı tespit edilmiştir. Ayrıca, epitel-benzeri hücrelerde vimentin ekspresyonunda artış gözlenmiştir. Fibroblastik farklılaşması bFGF+TGFß ve EGF+ TGFß ile uyarılan iDP-MKH'lerde, fibronektin, fibroblast yüzey proteini, vimentin ve tenaskin-C için kuvvetli pozitif buna karşılık CD105 ve tip II kollajen için negatif immun-reaksiyon tespit edilmiştir. Nestin ekspresyonlarında ise belirgin bir azalma gözlenmiştir. Epitelyal ve fibroblastik farklılaşma gruplarının tümünde, telomeraz aktivitelerinde gerçekleşen azalma ve üremedeki yavaşlık farklılaşan iDP-MKH'lerin somatik hücre karakteristiğine sahip olduğunu göstermiş ve iDP-MKH'lerin in vitro epitelyal ve fibroblastik farklılaşmasını desteklemiştir.Sonuç olarak, bu çalışmada elde edilen veriler iDP-MKH'lerin epitelyal ve fibroblastik farklılaşmalarının in vitro koşullarda uygun uyaranlarla yönlendirilebileceğini ve bu hücrelerin hücre tabanlı klinik tedaviler ve doku mühendisliği uygulamaları için uygun alternatif bir kaynak olabileceğini göstermektedir.
Özet (Çeviri)
Mesenchymal stem cells derived from human dental pulp have considerable potential for cell therapies and tissue engineering. The aim of the present study is to determine fibroblastic and epithelial differentiation capacities of hDPSCs which have the ability to differentiate into neurogenic, adipogenic, myogenic, odontogenic/osteogenic cell lines according to the previous studies.In this study, normal human impacted third molars (n=5) extracted under local anesthesia were used. The pulp tissues were digested in collagenase and cells were cultured in appropriate media. For all passages (P1-P5), immunophenotypic assays were performed with immunohistochemical methods (IHC and IF) and flow cytometry. DPSCs expressed mesenchymal cell markers (CD13, CD44 and CD90) in high levels but did not express the hematopoietic cell markers (CD14, CD34, CD45, CD117, HLA-DR). DPSCs also expressed vimentin, fibronectin, ?-smooth muscle actin, beta-tubulin, osteocalcin, osteonectin and embryonic stem cell marker SSEA-4. Furthermore, DPSCs were directionally differentiated to osteogenic and adipogenic cell lineages. After induction, osteocalcin, osteonectin and BMP4 were expressed by osteogenic differentiated cells and oil vacuols were detected in the ctyoplasm of adipogenic differentiated cells.To induce epithelial differentiation, DPSCs were cultured using EGF, HGF, KGF and IGF-2 growth factors. Differentiated cells were further characterized both morphologically and functionally by their capacity to express markers with specificity for epithelial lineage. Epithelial-like cells expressed cytokeratin 18 and 19 but did not express nestin. Also, vimentin expression was in high levels compared with untreated DPSCs. The treatment with bFGF+TGFß and EGF+ TGFß on cultured DPSCs to induce fibroblastic differentiation was resulted increase in fibronectin, fibroblast surface protein, vimentin and tenascin-C (Tn-C) contents by 2 and 4 weeks while decreasing nestin expressions. In addition, CD105 and type II collagen negative fibroblast-like cells were detected. Increased telomerase activity and proliferation in both epithelial and fibroblastic differentiation groups showed that differentiated cells have the characteristics of somatic cells and supported fibroblastic and epithelial differentiation of hDPSCs.In conclusion, DPSCs can be induced to differentiate towards epithelial and fibroblastic lineage and may serve a suitable source for cell-based clinical therapies and tissue engineering.
Benzer Tezler
- Parkinson tedavisi için nöral farklılaşmış diş pulpası kök hücreleri-enjekte edilebilir polimer modeli: in-vitro çalışmalar
A model of neural differentiated dental pulp stem cells-injectable polymer gel for treatment of parkinson's disease: In-vitro studies
MERVE ÇAPKIN YURTSEVER
Doktora
Türkçe
2016
BiyomühendislikHacettepe ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MENEMŞE GÜMÜŞDERELİOĞLU
- Kitosan/biyomimetik bor nano hidroksiapatit doku iskelesinin diş pulpa-dentin kompleksinin rejenerasyonunda kullanılması
Pulp–dentin complex regeneration by boron doped biomimetic nano hydroxyapatite coated chitosan scaffolds
FARZIN ASGHARI SANA
Doktora
Türkçe
2016
Diş HekimliğiHacettepe ÜniversitesiNanoteknoloji ve Nanotıp Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ARLİN SERPUHİ KİREMİTCİ
- İnflamatuar medyatörlerin in vitro ortamda diş pulpası kaynaklı kök hücrelerinin farklılaşma potansiyeli üzerine etkisi
The effect of the inflammatory mediators on the differentiation potential of the dental pulp stem cells in-vitro
SEMA SÖNMEZ
Doktora
Türkçe
2017
Diş HekimliğiMarmara ÜniversitesiEndodonti Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HESNA SAZAK ÖVEÇOĞLU
- Bioactive agent loaded hydrogel systems for dental tissue engineering applications
Diş doku mühendisliği uygulamalarına yönelik biyoaktif ajan yüklü hidrojel sistemleri
DENİZ HAZAL ATİLA
Doktora
İngilizce
2021
BiyomühendislikOrta Doğu Teknik ÜniversitesiMühendislik Bilimleri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AYŞEN TEZCANER
PROF. DR. VASIF NEJAT HASIRCI
- MTA, Dycal ve Emdogain' in jerm halindeki 20 yaş dişlerinden alınmış kök hücreler üzerindeki çoğaltma ve farklılaştırma etkilerinin değerlendirilmesi
Effect of Dycal, MTA and Emdogain on proliferation and differentiation of human tooth germ stem cells
ESRA PAMUKÇU GÜVEN