Limbal kök hücrelerin in vitro koşullarda üretilmesi ve karakterizasyonu oküler yüzey kök hücre tanımlanmasında yeni bir boya: ?Mitotracker deep red?
Characterization and in vitro proliferation of limbal stem cells a new dye for identification of ocular surface stem cells: Mitotracker deep red
- Tez No: 260514
- Danışmanlar: PROF. DR. İSMET DURAK
- Tez Türü: Tıpta Uzmanlık
- Konular: Göz Hastalıkları, Eye Diseases
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2010
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
- Enstitü: Tıp Fakültesi
- Ana Bilim Dalı: Göz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 63
Özet
Günümüzde, limbal ve konjunktival epitelyal kök hücrelerin izole edilmesinde flow sitometrik yöntemlerin kullanılması giderek yaygınlaşmaktadır. Bu flow sitometrik yöntemlerin önde gelenlerinden bir tanesi, DNA'ya bağlanan bir boya olan Hoechst 33342 boyası kullanılarak, kök hücrelerin ayrıştırılmasıdır. Oküler yüzey kök hücreleri, sahip oldukları Adenozin trifosfat kaset bağlayıcı taşıyıcısının G2 alt tipi (ABCG2) sayesinde, bu boyayı hücre dışına atabilmektedirler. Bu hücre dışına atım kapasiteleri kullanılarak, diğer hücrelerden ayrıştırılabilen kök hücreler, literatürde yan popülasyon olarak adlandırılmaktadır. Kök hücrelerdeki ABCG2 taşıyıcısı tarafından, Hoechst 33342 boyasının hücre dışına atılımı sayesinde, bu boyanın hücre içinde birikmesi ve DNA'nın içine girmesi önlenmektedir. Hoechst 33342 boyası ultraviyole lazer (UV) ile uyarılmaktadır. Kök hücrelerin ayrıştırılmasında kullanılan bu yöntemde, Hoechst 33342 ile uzamış inkübasyon ve UV kullanılması gerekmektedir. Bu iki özellik de yöntemin en önemli dezavantajlarından olup, hücrelerde DNA hasarına yol açabilmektedir.Bu çalışmada, oküler yüzey epiteli kök hücre seçilmesinde, bir ABC taşıyıcısı ile taşınan ve 633 nm'de uyarılan ?Mitotracker deep red? (MTDR) boyasını, Hoechst 33342 boyasına alternatif yeni bir boya olarak tanımladık. Bu boya, DNA yerine mitokondride birikmekte, uygulaması çok kısa bir inkübasyon süresine ihtiyaç duymakta ve genişletilmiş bir YP seçilmesine olanak sağlamaktadır. Bu boyanın kullanımında, gerek UV lazer ihtiyacının olmaması, gerekse boyanın DNA'da birikmemesi nedeniyle hücrelerde meydana gelebilecek DNA hasarı riski azalmaktadır. Bu özellikleri sayesinde, öncül hücreler ile ileride yapılacak klinik uygulamalarda, genetik materyal hasarına bağlı oluşabilecek istenmeyen etkilerden korunmada önem taşıyacaktır.
Özet (Çeviri)
In recent years, flow cytometric techniques are used more widely for isolating limbal and conjunctival epithelial stem cells. Hoechst 33342 is one of the dye for this purpose. Limbal and conjunctival epithelial stem cells transport out (efflux) the DNA binding dye Hoechst 33342 by using their G2 subtype Adenosine triphosphate Binding Cassette transporter (ABCG2) and are isolated by flow cytometry as side population (SP) cells. Transport prevents the dye from accumulating in the cell and intercalating with DNA. Unfortunately, SP sorting requires prolonged incubation with Hoechst 33342 and excitation with a UV laser, features that may lead to DNA damage.We have now identified a new ABCG2 substratum, Mitotracker deep red (MTDR) that can be used for SP cell isolation, instead of Hoechst 33342. MTDR is excited at 633 nm, accumulates in the mitochondria, not DNA, it?s application requires very short incubation and allows the collection of an expanded SP. These properties will prevent genetic material damage in clinical uses of stem cells in the future.Consistent with the stem cell phenotype, these low Mitotracker deep red dye staining (MTDR low ) cells incorporate a high proportion of cells in the quiescent, G0 state. Clonal studies on feeder 3T3 cells demonstrate that the clonal efficiency of these cells, essential to initiate to growth limbal stem cells for ocular reconstruction is affected by their cell cycle status. Understanding intracellular and extracellular control mechanisms of ocular surface stem cells will potencially improves the usage of these cells for ocular reconstruction.
Benzer Tezler
- Limbal doku türevli hücrelerin ın vitro çoğaltılmasında doku iskelesi olarak fonksiyonelleştirilmiş kollajen film kullanımının değerlendirilmesi
Evaluation of functionalised collagen film as A scaffold for in vitro expansion of limbal tissue-derived cells
MEHMET GÜRDAL
- Investigation of effects of Brimonidine tartrate loaded LMSC cells on in vitro injury model of neuron cells
Brimonidin tartarat yüklü LMSC hücrelerinin nöron hücrelerinin in vitro yaralanma modeli üzerindeki etkilerinin araştırılması
GÜLSÜM DENİZ
Yüksek Lisans
İngilizce
2022
Göz HastalıklarıKoç ÜniversitesiNörobilim Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AFSUN ŞAHİN
- Oküler yüzey rekonstrüksiyonunda kullanılmak üzere insan kaynaklı fibrin kaplama varlığında limbal eksplant kültür
Limbal explant culture with human derived fibrin coating for ocular surface reconstruction
GAMZE DERELİ CAN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2017
Göz HastalıklarıSağlık BakanlığıGöz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. NURULLAH ÇAĞIL
- Adipoz kök hücreden farklılaştırılmış kondrositlerin aljinat temelli mikrokürelerde enkapsülasyonu
Encapsulation of chondrogenically differentiated adipose derived stem cells in alginate based microspheres
MURAT PARLAK
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
BiyomühendislikKırıkkale ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MUSTAFA TÜRK
- The in vitro effect of mesenchymal stem cell-conditioned medium onoxidative stress-related retinal damage
Mezenkimal kök hücre koşullandirilmiş besiyerinin oksidatif stres kaynakli retina hasarindaki in vitro etkisi
AYŞE DİLARA AYDEMİR
Doktora
İngilizce
2024
Moleküler TıpKoç ÜniversitesiSinir Bilimi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. CELAL MURAT HASANREİSOĞLU