Optimization of mature embryo based regeneration and genetic transformation of Turkish wheat cultivars
Türk buğday çeşitlerinin olgunlaşmış embriyo kaynaklı rejenerasyonunun ve genetik transformasyonunun optimize edilmesi
- Tez No: 269032
- Danışmanlar: PROF. DR. HÜSEYİN AVNİ ÖKTEM, PROF. DR. MERAL YÜCEL
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Buğday, olgun embriyo, rejenerasyon, oksin konsantrasyonu, partikül bombardımanı, Wheat, mature embryo, regeneration, auxin concentration, particle bombardment
- Yıl: 2010
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Bölümü
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 147
Özet
Bu çalışmanın amacı Mirzabey 2000 (Triticum durum) ve Yüreğir 89 (Triticum aestivum) buğday çeşitlerinin olgunlaşmış embriyo kaynaklı doku kültürü, transformasyon ve rejenerasyon parametrelerinin optimize edilmesidir. Farklı konsantrasyonlarda ki oksin hormonlarının ve karanlık inkübasyon periyotlarının rejenerasyon kapasitesine etkisi değerlendirilmiştir. İki farklı hormon tipi 2,4- diklorofenoksiasetik asit ve pikloram üç farklı konsantrasyonda 2, 4 ve 8 mg/l kullanılmıştır. Olgunlaşmış embriyo kaynaklı kalluslar birincil kallus oluşumu için 6 farklı indüksiyon besiyerinde 4 ve 6 hafta karanlıkta inkübe edilmişlerdir. Karanlık periyod sonrasında, ortalama taze kallus ağırlığı ve birincil kallus indüksiyon oranı belirlenmiştir. Karanlıkta 4 ve 6 hafta bekletilen Mirzabey kallusları için birincil kallus indüksiyon oranı % 91 ve % 93.25 olarak bulunmuştur. Yüreğir için birincil kallus indüksiyon oranı 6W2D besiyeri için % 92.5 ve 4W8P besiyeri için % 86.75 olarak gözlemlenmiştir. Birincil kalluslar embriyojenik kallus oluşturma besiyerinetaşınmışlardır. Embriyojenik kallus oluşumu Mirzabey çeşidi için 6W2D besiyerinde % 94.88 dir. Her iki çeşit için 2,4-D nin yüksek konsantrasyonlarında nekrosis gözlemlenmiştir. Embriyojenik kallus oluşumundan sonra kalluslar hormon içermeyen rejenerasyon besiyerine alınmışlardır. Mirzabey çeşidi için en yüksek rejenerasyon oranı (%62.31) ve kültür verimliliği (% 44.31) 4W2D besiyerinde gözlemlenmiştir. Fakat, Yüreğir çeşidi için rejenerasyon oranı (% 5) oldukça düşük olarak 6W2D besiyerinde gözlemlenmiştir.Transformasyon çalışmları Obitek Biolab Gen Transfer Sistemi kullanılarak yapılmıştır. Olgunlaşmış embriyo kaynaklı kalluslar için eski ve modifiye edilmiş yükleme üniteleri kullanılarak bombardıman basıncı ve mesafesi optimize edilmiştir. pAHC25 kaplı altın mikro parçacıkların bombardımanı sonrası histokimyasal GUS deneyi yapılmış ve mavi noktalar sayılmıştır. Modifiye edilmiş sistem kullanılarak tranformasyon verimliliği 30 bar bombardıman basıncı için 0.65 kat ve 35 bar için 5.5 kat artmıştır. Modifiye edilmiş yükleme ünitesi ileri ki transformasyon çalışmalarda kullanılabilir.
Özet (Çeviri)
The objective of this study was to optimize tissue culture, transformation and regeneration parameters of mature embryo based culture of Triticum durum cv. Mirzabey 2000 and Triticum aestivum cv. Yüreğir 89. The effects of auxin type of hormone at different concentrations and dark incubation periods on regeneration capacity were evaluated. Two different hormone types 2,4- dichlorophenoxyacetic acid and picloram were used at three different concentrations 2, 4 and 8 mg/l. Mature embryo derived calli were incubated in 6 different induction media at dark for 4 and 6 weeks for initiation of primary callus induction. After dark incubation periods, average callus fresh weight and primary callus induction rate were determined. The primary callus induction rates for 4 weeks and 6 weeks old dark adapted Mirzabey calli incubated was found to be 91 % and 93.25 % respectively. Yüreğir primary callus induction rate was 92.5 % for 6 weeks old calli in 6W2D medium and 86.75 % for 4 weeks old calli in 4W8P medium. The primary calli were transferred to embryogenic callus induction medium. The embryogenic callus formation was 94.88in 6W2D medium for Mirzabey cultivar. The necrosis was observed at high concentration of 2,4-D for both of cultivars. After embryogenic callus induction, embryogenic calli were transferred into hormone free regeneration medium. The maximum regeneration rate (62.31 %) and culture efficiency (44.13 %) were observed in 4W2D medium for Mirzabey. However, the low regeneration rate was observed for Yüreğir (5 %) in 6W2D medium.The transformation studies were performed by using Obitek Biolab Gene Transfer System. The old and the modified loading units were used for optimization of bombardment pressure and distance for mature embryo based calli transformation. After bombardment of pAHC25 coated gold particles, histochemical GUS assay was performed and blue spots were counted. The transformation efficiency increased to 0.65 fold for 30 bar bombardment pressure and 5.5 fold for 35 bar bombardment by the modified loading unit. The modified loading unit could be used for further transformation studies.
Benzer Tezler
- Ayçiçeği bitkisinde (Helianthus annuus L.) bitki regenerasyonu optimizasyonu
Optimization of plant regeneration in sunflower (Helianthus annuus L.)
MELEK BAYRAKTAROĞLU
Yüksek Lisans
Türkçe
2012
BiyoteknolojiUludağ ÜniversitesiTarla Bitkileri Ana Bilim Dalı
PROF. NAZAN DAĞÜSTÜ
- Akım sitometrisi yönteminin insan sperm hücrelerinde i) fosfolipaz C-zeta ve ızumo-1, ii) dna'sında kırık olan sperm hücrelerinin saptanması için optimize edilmesi
Optimization of flow cytometry application to detect in human spermatozoa with i) fosfolipaz C-zeta and izumo-1 II) spermatozoa having dna
ZEYNEP ÇAKAR
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
Histoloji ve EmbriyolojiAnkara ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ÖZGÜR ÇINAR
- Optimization of agrobacterium tumefaciens-mediated transformation in onion (Allium cepa L.)
Soğanlarda (Allium cepa L.) agrobacterium tumefaciens ile transformasyonunun optimizasyonu
KHAZINA AMIN
Yüksek Lisans
İngilizce
2016
BiyoteknolojiNiğde Ömer Halisdemir ÜniversitesiTarımsal Genetik Mühendisliği Ana Bilim Dalı
Assist. Prof. Dr. ALİ FUAT GÖKÇE
- Ayçiçeğinde (Helianthus annuus L.) embriyo kültürü ile generasyon atlatma ve hızlı ıslah çalışmaları
Short breeding cycle studies and generation skip in sunflower (Helianthus annuus L.) with embryo culture
MEHMET YASİN TULUM
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
BiyolojiMarmara ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. YILDIZ AYDIN
PROF. DR. AHU ALTINKUT UNCUOĞLU
- ZnO, CuO ve γ-Fe3O4 nanopartiküllerin yeşil sentezi ve buğday genotipleri üzerindeki etkilerinin doku kültüründe araştırılması
Green synthesis of ZnO, CuO and γ-Fe3O4 nanoparticules and the investigation of these nanoparticules' effects on wheat genotypes in tissue culture
ÖZGE BALPINAR NALCI
Yüksek Lisans
Türkçe
2017
BiyolojiAtatürk ÜniversitesiNanobilim ve Nanomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HAYRUNNİSA NADAROĞLU