Geri Dön

Nohut bitkisinde (Cicer arietinum L.) Agrobacterium aracılı gen transferinin etkinleştirilmesi için vakum infiltrasyonu ve sonikasyonun birlikte kullanımının araştırılması

An investigation on the combination of sonication and vacuum infiltration to enhance Agrobacterium mediated transformation in chickpea (Cicer arietinum L.)

  1. Tez No: 274984
  2. Yazar: SEMA SELVİ NUR TAŞYAPAN
  3. Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. MİKAİL AKBULUT
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biyoteknoloji, Biology, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Nohut, Transformasyon, Agrobacterium, Sonikasyon, Chickpea, Transformation, Agrobacterium, Sonication
  7. Yıl: 2010
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Erciyes Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 124

Özet

Bu çalışmanın amacı yaygın olarak yetiştirilen nohut kültivarlarımızdan biri olan Beyaz Nohut için güvenilir, tekrarlanabilir bir rejenerasyon ve transformasyon sistemi geliştirmektir. Doku kültürü çalışmalarında MS tuzları ve Gamborg vitaminlerini içeren modifiye MS ortamı (MS-Gamborg) kullanılmıştır. MS-Gamborg ortamı 0.25-0.5 g/L kazein ve 1 g/L glutamin ile desteklenmiş ve çoklu sürgün oluşturmak için çeşitli büyüme düzenleyicileri (BAP, Kn, TDZ, zeatin, IAA, giberillik asit) eklenmiştir. Çoklu sürgün oluşturmak amacıyla plumula ve radikula kısımları kesilmiş 4-5 gün çimlendirilen fidelerden elde edilen eksenler kullanılmıştır. Tüm çalışmalar boyunca en fazla sürgün sayısı 10 µM BAP kullanılan (ortalama 4.2 sürgün) MS-Gamborg ortamında elde edilmiştir. 0.5 mg/L Kn, 0.5 mg/L BAP ve 0.2 mg/L IAA uygulaması ile en düşük sürgün sayısı (ortalama 1.5 sürgün) elde edilmiştir. Agrobacterium temelli transformasyonun etkinliğini artırmak için sonikasyon, sonikasyon-vakum infiltrasyonu, agroinfiltrasyon, ve ayrıca yaralama?agroinfiltrasyon kombinasyonları gibi parametreler test edilmiştir. Sonikasyonla birlikte vakum infiltrasyonu kombinasyonunun en etkili uygulama olduğu tespit edilmiştir. En iyi stabil transformasyon bulguları banyo tipi sonikatörle 5 sn ara ile 20 ve 30 sn sonikasyon uygulaması ile elde edilmiştir. Ayrıca ara vermeden 40 sn yapılan sonikasyon uygulaması ile selektif ortamda yaşayan çok sayıda sürgün elde edilmiştir. 1 dk'dan 20 dk'ya kadar uygulanan sonikasyon süreleri içinde en etkili stabil transformasyon bulguları 1 ve 5 dk yapılan sonikasyon ile elde edilmiştir. Aday transformant bitkicikler 2-3 seleksiyon döngüsü sonucunda seçilmiştir ve PZR ile moleküler analizleri yapılmıştır.

Özet (Çeviri)

Main purpose of this study was to develop an efficient and reproducible regeneration and transformation system for a local chickpea cultivar. A modified tissue culture medium (MS-Gamborg) was used throughout the regeneration and transformation studies. MS-Gamborg medium was fortified with casein (0.25 g/L) and L-glutamin (1 g/L). Various plant growth regulators (BAP, TDZ, zeatin, IAA, and giberellicasit) were used for multiple shoot inductions. Plumuls and radiculs of 4 or 5 day germinated seedlings were removed and used as an explant for multiple shoot induction. Maximum shoot inductions were observed when 10 µM BAP (4.2) was used as a sole growth regulators. Multiple shoot induction was the lowest when MS-Gamborg medium was supplied with 0.5 mg/L Kn, 0.5 mg/L BAP and 0.2 mg/L IAA. The impact of several parameters, such as sonication, sonication-vacuum infiltration, agroinfiltration and Agrobacterium mediated transformation with wounding of explant tissue were tested to increase the efficiency of Agrobacterium mediated transformation. Combination of vacuum infiltration with sonication had remarkable effect on the efficiency of Agrobacterium mediated transformation of local chickpea cultivar. The best stable transformation results were obtained from bath type sonicator with the parameters of 20 and 30 s sonications with 5 s intervals. Continuous 40 second sonication resulted in many living plantlets in selective medium. Among the 1 to 20 min of sonication durations, 1 and 5 min of sonication gave the best results. Putative transformants were selected in 2-3 cycles of selection and analyzed by polymerase chain reaction (PCR).

Benzer Tezler

  1. Kuraklıkla ilişkili MİR408 geninin nohut (Cicer arietinum L.) bitkisine Agrobacterium tumefaciens aracılığıyla aktarılması

    Transformation of chickpea (Cicer arietinum L.)with drought gene related MİR408 gene using Agrobacterium tumefaciens as vector

    MORTAZA HAJYZADEH

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    BiyoteknolojiAnkara Üniversitesi

    Tarla Bitkileri Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. KHALID MAHMOOD KHAWAR BHATTI

    DOÇ. DR. TURGAY ÜNVER

  2. Gümüş nanopartiküllerin nohut (Cicer arietinum L.) bitkisinde bazı fizyolojik ve biyokimyasal özelliklere etkisi

    Some physiological and biochemical properties of silver nanoparticles impact on chickpea (Cicer arietinum L.) plants

    SEFA EKİNCİ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    BiyolojiAksaray Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. FAZİLET ÖZLEM ÇEKİÇ

  3. In vitro koşullarda siyah ve beyaz nohut (Cicer arietinum L.) genotiplerinde tuz stresinin çimlenme ve büyüme üzerine etkileri

    Effects of salt stress on germination and growth of black and white chickpea (Cicer arietinum L.) genotypes under In vitro conditions

    FATMA AKIN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    BiyoteknolojiNecmettin Erbakan Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MUHAMMAD ASIM

  4. Nohut (Cicer arietinum L.), bakla (Vicia faba L.) ve bezelye (Pisum sativum L.)'de besin elementlerinin verim ve verim unsurları üzerine etkisi

    The effect of plant nutrients on the yield and yield components on the chickpea (Cicer arietinum L.), bean (Vicia faba L.) and pea (Pisum sativum L.)

    SEVGİ SAYLAK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    ZiraatDicle Üniversitesi

    Tarla Bitkileri Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. BEHİYE TUBA BİÇER

  5. Farklı dozlarda uygulanan azotlu gübre formları ve bakteri aşılamasının nohutta (Cicer arietinum L.) nodül oluşumu ve bitki gelişimi üzerine etkisi

    The effects of nitrogen fertilizer forms applied at different doses and bacterial inoculation on nodulation and plant growth of chickpea (Cicer arietinum L.)

    MUSTAFA GÖZÜTOK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    ZiraatErciyes Üniversitesi

    Toprak Bilimi ve Bitki Besleme Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ OĞUZHAN UZUN