Nohut bitkisinde (Cicer arietinum L.) Agrobacterium aracılı gen transferinin etkinleştirilmesi için vakum infiltrasyonu ve sonikasyonun birlikte kullanımının araştırılması
An investigation on the combination of sonication and vacuum infiltration to enhance Agrobacterium mediated transformation in chickpea (Cicer arietinum L.)
- Tez No: 274984
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. MİKAİL AKBULUT
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biyoteknoloji, Biology, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Nohut, Transformasyon, Agrobacterium, Sonikasyon, Chickpea, Transformation, Agrobacterium, Sonication
- Yıl: 2010
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Erciyes Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 124
Özet
Bu çalışmanın amacı yaygın olarak yetiştirilen nohut kültivarlarımızdan biri olan Beyaz Nohut için güvenilir, tekrarlanabilir bir rejenerasyon ve transformasyon sistemi geliştirmektir. Doku kültürü çalışmalarında MS tuzları ve Gamborg vitaminlerini içeren modifiye MS ortamı (MS-Gamborg) kullanılmıştır. MS-Gamborg ortamı 0.25-0.5 g/L kazein ve 1 g/L glutamin ile desteklenmiş ve çoklu sürgün oluşturmak için çeşitli büyüme düzenleyicileri (BAP, Kn, TDZ, zeatin, IAA, giberillik asit) eklenmiştir. Çoklu sürgün oluşturmak amacıyla plumula ve radikula kısımları kesilmiş 4-5 gün çimlendirilen fidelerden elde edilen eksenler kullanılmıştır. Tüm çalışmalar boyunca en fazla sürgün sayısı 10 µM BAP kullanılan (ortalama 4.2 sürgün) MS-Gamborg ortamında elde edilmiştir. 0.5 mg/L Kn, 0.5 mg/L BAP ve 0.2 mg/L IAA uygulaması ile en düşük sürgün sayısı (ortalama 1.5 sürgün) elde edilmiştir. Agrobacterium temelli transformasyonun etkinliğini artırmak için sonikasyon, sonikasyon-vakum infiltrasyonu, agroinfiltrasyon, ve ayrıca yaralama?agroinfiltrasyon kombinasyonları gibi parametreler test edilmiştir. Sonikasyonla birlikte vakum infiltrasyonu kombinasyonunun en etkili uygulama olduğu tespit edilmiştir. En iyi stabil transformasyon bulguları banyo tipi sonikatörle 5 sn ara ile 20 ve 30 sn sonikasyon uygulaması ile elde edilmiştir. Ayrıca ara vermeden 40 sn yapılan sonikasyon uygulaması ile selektif ortamda yaşayan çok sayıda sürgün elde edilmiştir. 1 dk'dan 20 dk'ya kadar uygulanan sonikasyon süreleri içinde en etkili stabil transformasyon bulguları 1 ve 5 dk yapılan sonikasyon ile elde edilmiştir. Aday transformant bitkicikler 2-3 seleksiyon döngüsü sonucunda seçilmiştir ve PZR ile moleküler analizleri yapılmıştır.
Özet (Çeviri)
Main purpose of this study was to develop an efficient and reproducible regeneration and transformation system for a local chickpea cultivar. A modified tissue culture medium (MS-Gamborg) was used throughout the regeneration and transformation studies. MS-Gamborg medium was fortified with casein (0.25 g/L) and L-glutamin (1 g/L). Various plant growth regulators (BAP, TDZ, zeatin, IAA, and giberellicasit) were used for multiple shoot inductions. Plumuls and radiculs of 4 or 5 day germinated seedlings were removed and used as an explant for multiple shoot induction. Maximum shoot inductions were observed when 10 µM BAP (4.2) was used as a sole growth regulators. Multiple shoot induction was the lowest when MS-Gamborg medium was supplied with 0.5 mg/L Kn, 0.5 mg/L BAP and 0.2 mg/L IAA. The impact of several parameters, such as sonication, sonication-vacuum infiltration, agroinfiltration and Agrobacterium mediated transformation with wounding of explant tissue were tested to increase the efficiency of Agrobacterium mediated transformation. Combination of vacuum infiltration with sonication had remarkable effect on the efficiency of Agrobacterium mediated transformation of local chickpea cultivar. The best stable transformation results were obtained from bath type sonicator with the parameters of 20 and 30 s sonications with 5 s intervals. Continuous 40 second sonication resulted in many living plantlets in selective medium. Among the 1 to 20 min of sonication durations, 1 and 5 min of sonication gave the best results. Putative transformants were selected in 2-3 cycles of selection and analyzed by polymerase chain reaction (PCR).
Benzer Tezler
- Kuraklıkla ilişkili MİR408 geninin nohut (Cicer arietinum L.) bitkisine Agrobacterium tumefaciens aracılığıyla aktarılması
Transformation of chickpea (Cicer arietinum L.)with drought gene related MİR408 gene using Agrobacterium tumefaciens as vector
MORTAZA HAJYZADEH
Doktora
Türkçe
2014
BiyoteknolojiAnkara ÜniversitesiTarla Bitkileri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. KHALID MAHMOOD KHAWAR BHATTI
DOÇ. DR. TURGAY ÜNVER
- Gümüş nanopartiküllerin nohut (Cicer arietinum L.) bitkisinde bazı fizyolojik ve biyokimyasal özelliklere etkisi
Some physiological and biochemical properties of silver nanoparticles impact on chickpea (Cicer arietinum L.) plants
SEFA EKİNCİ
Yüksek Lisans
Türkçe
2015
BiyolojiAksaray ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. FAZİLET ÖZLEM ÇEKİÇ
- In vitro koşullarda siyah ve beyaz nohut (Cicer arietinum L.) genotiplerinde tuz stresinin çimlenme ve büyüme üzerine etkileri
Effects of salt stress on germination and growth of black and white chickpea (Cicer arietinum L.) genotypes under In vitro conditions
FATMA AKIN
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
BiyoteknolojiNecmettin Erbakan ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MUHAMMAD ASIM
- Nohut (Cicer arietinum L.), bakla (Vicia faba L.) ve bezelye (Pisum sativum L.)'de besin elementlerinin verim ve verim unsurları üzerine etkisi
The effect of plant nutrients on the yield and yield components on the chickpea (Cicer arietinum L.), bean (Vicia faba L.) and pea (Pisum sativum L.)
SEVGİ SAYLAK
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
ZiraatDicle ÜniversitesiTarla Bitkileri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BEHİYE TUBA BİÇER
- Farklı dozlarda uygulanan azotlu gübre formları ve bakteri aşılamasının nohutta (Cicer arietinum L.) nodül oluşumu ve bitki gelişimi üzerine etkisi
The effects of nitrogen fertilizer forms applied at different doses and bacterial inoculation on nodulation and plant growth of chickpea (Cicer arietinum L.)
MUSTAFA GÖZÜTOK
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
ZiraatErciyes ÜniversitesiToprak Bilimi ve Bitki Besleme Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ OĞUZHAN UZUN