Geri Dön

Agrobacterium tumefaciens aracılığı ile gen aktarılmış arpa'da (Hordeum vulgare L.) transgen entegrasyonunun analizi

Analysis of the transgene integration in barley (Hordeum vulgare L.) following agrobacterium tumefaciens-mediated gene transfer

PDF İndir

  1. Tez No: 283146
  2. Yazar: CÜNEYT UÇARLI
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. FİLİZ GÜREL
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Genetik, Genetics
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2010
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: İstanbul Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 64

Özet

Bu tez çalışmasında, Agrobacterium tumefaciens aracılığıyla gen aktarılmış arpada (Hordeum vulgare L.) transgen entegrasyonunun analizi amaçlandı. Bu amaçla, Hordeum vulgare L. cvs Tokak 157/37 ve Golden promise olgun embriyolarına Agrabacterium aracılığıyla ß-glukoronidaz (GUS) ve neomisin fosfatransferaz II (NPT II) genleri aktarıldı. Gen aktarımından 2 gün sonra transformant embriyolarda GUS gen anlatımı histokimyasal boyama ile doku düzeyinde belirlendi. 40-45 gün sonunda antibiyotik içeren seçici besiyerinde %16.6 oranında Hordeum vulgare cv. Tokak 157/37; ve %10.3 Hordeum vulgare cv. Golden promise transformant bitkisinin canlı kaldığı tespit edildi.Transformant bitkilerde transgen varlığını belirlemek amacıyla öncelikle PZR yapıldı. Hordeum vulgare cv. Tokak 157/37 bitkilerinin %47'sinde ve Hordeum vulgare cv. Golden promise bitkilerinin %44'ünde GUS geni çoğaltıldı. NPT II geni, Tokak 157/37 bitkilerin %77'sinde; Golden promise bitkilerinin %63'ünde pozitif sonuç ortaya koydu.T-DNA entegrasyonunun analizi için PZR temelli bilinenen DNA bölgelerine komşu bilinmeyen dizilerin eldesinde kullanılan ?TAIL? PZR yapıldı. ?TAIL? PZR'de pCAMBIA2301 ikili vektörüne özgün spesifik primerler ile rastgele dejenere (RD) primerler kullanıldı. Analiz edilen 21 bitkiden 3'ünde arpa genomunda T-DNA girişi tespit edildi. Elde edilen arpa genom dizileri veritabanlarında analiz edildiğinde T-DNA'nın ß-galaktosidaz, hsp ve hbc8 gen bölgelerine girdiği belirlendi.

Özet (Çeviri)

Determination of the transgene integration in barley (Hordeum vulgare L.) following Agrobacterium mediated transformation was aimed in this thesis work. To this end, ß-glucuronidase (GUS) and neomycin phosphotransferase II (NPT II) genes were transfered to mature embryos of the Hordeum vulgare L. cvs. Tokak 157/37 and Golden promise via Agrobacterium. GUS gene expression was observed in transformant embryos at the tissue level by histochemical staining 2 days after Agrobacterium infection. After 40-45 days, 16.6% of the Hordeum vulgare cv. Tokak157/37 and 10.3% of the Hordeum vulgare cv. Golden promise transformants survived on selection medium including antibiotics.PCR was performed to identify putative transgenes in the transformed plants. 47% of the Hordeum vulgare cv. Tokak 157/37 plants and 44% of the Hordeum vulgare cv. Golden promise plants were positive for GUS. On the other hand, 77% of the Tokak 157/37 plants and 63% Golden promise plants were positive for NPT II.TAIL-PCR was used to recover of unknown DNA fragments flanking known sequences was performed for T-DNA integration analysis. Primers which are spesific for pCAMBIA2301 binary vector and arbitrarily degenerated (AD) primers were used for TAIL-PCR. T-DNA insertion was detected in 3 plants of the 21 plants analysed. When the obtained barley genome sequences were analysed by genomic databases; T-DNA has been found in ß-galactosidase, hsp, hbc8 genes.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    457400

    Arabidopsis thaliana'dan izole edilen atbor4 geninin agrobacterium tumefaciens aracılığı ile ayçiçeği (helianthus annuus l.)'ne aktarılması

    Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of atbor4 gene into sunflower (helianthus annuus l.)

    SEDAT KARADENİZ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    BiyolojiMarmara Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. İBRAHİM İLKER ÖZYİĞİT

  2. Tez No

    136189

    Pamuk (Gossypium hirsutum L. )'ta doku kültürü ve gen aktarımı çalışmaları

    Tissue culture and gene transfer studies in cotton (Gossypium hirsutum L. )

    İBRAHİM İLKER ÖZYİĞİT

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2003

    BiyolojiMarmara Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. BELMA DERMAN SEMİZ

  3. Tez No

    309439

    Application of biotechnological tools to model plant, Brachypodium distachyon

    Model bitkide, Brachypodium distachyon biyoteknolojik yöntemlerin uygulanması

    BAHAR SOĞUTMAZ ÖZDEMİR

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2009

    BiyoteknolojiSabancı Üniversitesi

    Biyoloji Bilimleri ve Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. HİKMET BUDAK

  4. Tez No

    66325

    Tütün'e (Nicotiona tabacum) aktarılan farklı genlerin ekspresyon analizlari

    Başlık çevirisi yok

    TİJEN OĞRAŞ (TALAS)

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    1997

    Biyolojiİstanbul Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. AVNİ KURU

  5. Tez No

    809401

    Erkek kısır domates bitkilerinin geliştirilmesi için SLPHD_MS1 geninin CRISPR-Cas9 aracılığı ile susturulması

    CRİSPR/Cas9 silencing of the SLPHD_MS1 gene for development of male sterile tomato plants

    GÖKHAN GÖKDEMİR

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    BiyoteknolojiOndokuz Mayıs Üniversitesi

    Tarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MUSA KAVAS

Geri Dön