ERK, AKT and PKA as regulatory kinases of SIK2 in FGF signaling in Müller cells
ERK, AKT ve PKA Müller hücrelerinin FGF sinyal iletiminde SIK2?nin düzenleyici kinazlarıdır
- Tez No: 297819
- Danışmanlar: PROF. DR. KUYAŞ BUĞRA BİLGE
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2011
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 93
Özet
Retinal Müller hücrelerinde FGF2'ye bağlı proliferasyon Ras/MAPK sinyal yolağı aracılığıyla gerçekleşmektedir. Sinyal aracılarının fosforilasyon/defosfarilasyonları yolağın geçici ve hızlı bir şekilde düzenlenmesinde yer alan önemli mekanizmalardan biridir. Laboratuvarımızda yapılan çalışmalar bir serin/threonin kinaz olan SIK2'nin bu düzenleyici sistemde görev aldığını önermektedir. Bu çalışmadaki amacımız FGF sinyal iletiminde SIK2'nin potansiyel üst kinazlarını belirlemektir. ERK fosforlanma motifini içermesi; bizi SIK2'nin bu ikili kinazın ERK'in substratı olma olasılığını araştırmaya yöneltmiştir. Verilerimiz in vitro şartlarda, her daim aktif ERK'in SIK2'yi fosforladığını göstermiştir. FGF'e bağlı olan ERK aktivasyonu U0126 ile engellendiği koşullarda SIK2 treonin fosforlanması ve SIK2 aktivasyonunda düşüş gözlenirken serin fosforlanması değişmemektedir. Eş-immunçökeltme çalışmaları FGF'e bağlı olarak SIK2-ERK'in in vivo olarak etkileşim içinde olduğuna işaret etmektedir. Ayrıca ERK inhibisyonu SIK2 protein seviyesinde azalmaya yol açmıştır. Bu sonuçlar ışığında, ERK'in SIK2'yi treonin fosforlayarak onu aktive eden ve kararlığını etkileyen bir kinaz olduğu önerilmektedir. SIK2'nin FGFR2 ve Gab1 ile birlikte immunçökeltme göstermesi SIK2 aktivasyonunun ERK'e bağlı olarak FGF sinyal iletimini olumsuz etkilemekte olduğunu düşündürmektedir. Çalışmanın ikinci kısmında, çeşitli hücrelerde gösterilen SIK2 aktivitesinin AKT ve PKA tarafından düzenlenme olasılığı Müller hücre bağlamında irdelenmiştir. FGF uyarımı öncesinde AKT ve PKA aktivasyonunun engellenmesi SIK2 serin fosforlanma seviyesinde azalmaya yol açmaktadır. PKA aktivatörü kullanıldığında ise SIK2 serin fosforlanması anlamlı bir şekilde artmaktadır. In vivo olarak PKA-SIK2 etkileşimi eş-immunçökeltme çalışmalarıyla doğrulanmıştır. Bulgular AKT ve PKA'in SIK2'nin engelleyici kinazları olduğunu göstermiştir.
Özet (Çeviri)
FGF2 dependent retinal Müller cell proliferation is elicited mainly via activation of Ras/MAPK pathway. Phosphorylation/dephosphorylation of intermediates is one of the key mechanisms for the transient and rapid regulation of the pathway. Studies from our laboratory suggest serine/treonine kinase SIK2 is involved in this regulatory process. In this study we focused on defining potential upstream kinases of SIK2 in Müller cells in the context of FGF signaling. Presence of ERK phosphorylation motif on SIK2 led us to explore the possibiliy of SIK2 being a substrate of this dual kinase. Through the use of constitutively active ERK we showed phosphorylation of SIK2 in vitro. When the FGF dependent activation of ERK blocked by U0126 prior to growth factor stimulation, decrease in SIK2 activity and in its threonine phosphorylation were evident, while no change was observed in serine phosphorylation. Co-immunoprecipitation studies revealed that the two proteins interact in vivo in FGF dependent manner. ERK inhibition also led to a decrease in SIK2 protein levels in our cells. Based on these results we propose that ERK acts as an activatory kinase of SIK2, targeting threonine residues and modulate SIK2 stability. Co-immunoprecipitation of SIK2 with FGFR2 and Gab1 raises the possibility that ERK dependent SIK2 activation downregulates FGF signaling through the kinasing of these proteins.In the second part whether PKA and AKT can regulate SIK2 in Müller cells as reported in other cellular contexts was analyzed. Blocking of AKT activation or inhibition of PKA prior to FGF2 induction resulted in decrease of SIK2 serine phosphorylation and its activation. SIK2 serine phosphorylation increased significantly when PKA activator was used. Co-immunoprecipitation analysis confirmed PKA/SIK2 interaction in vivo. The results indicate that AKT and PKA act as inhibitory upstream kinases of SIK2 in FGF2 signaling.
Benzer Tezler
- Tümör nekroz faktörü reseptör 1'in (NTFR1) sinyal iletim mekanizmasının araştırılması
Investigation of the signal transduction mechanism of tumor necrosis factor receptor 1 (TNFR1)
FATMA ZEHRA HAPİL
Doktora
Türkçe
2017
Tıbbi BiyolojiAkdeniz ÜniversitesiTıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. OSMAN NİDAİ ÖZEŞ
- Assessment of the effects of melatonin on the funtional deficits induced by cellular stress in obese donor derived mesenchymal STEM cells
Melatonin'in obez donor mezenkimal kök hücrelerinde hücresel strese bağlı olarak oluşan fonksiyon bozuklukları üzerindeki etkilerinin değerlendirilmesi
ECE GİZEM POLAT
Yüksek Lisans
İngilizce
2024
BiyolojiHacettepe ÜniversitesiKök Hücre Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. FATİMA SUSANNA FAUSTINA AERTS KAYA
- Understanding the interplay between anti-apoptotic BAG-1 and AKT in mTORC1-mediated autophagy in breast cancer cell lines
mTORC1 aracılı otofajide anti-apoptotik BAG-1-AKT etkileşiminin meme kanseri hücre hatlarında araştırılması
ILGIN IŞILTAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2015
Biyolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY
- Effects of kras gene LCS6 mutatıon on metastasıs pathways ın human lung cancer
İnsan akciğer kanser hücrelerinde kras geni LCS6 mutasyonun metastaz yolaği üzerine etkisi
ALI AHMED HUSSEIN AZZAWRI
- İnsan kronik myeloblastik lösemi hücre dizisi K562'de imatinibin ve silimarinin BCR-ABL1, GRB2, GAB2, AKT ve ERK gen ifadelenmelerine olan etkisinin değerlendirilmesi
The evaluation of effect of imatinib and silimarin on BCR-ABL1, GRB2, GAB2, AKT and ERK gene expression levels in human myeloid leukemia cell line K562
BURCU YAZAR ÜNTEKİN
Yüksek Lisans
Türkçe
2014
Tıbbi BiyolojiBaşkent ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ERKAN YURTCU