siRNA kullanılarak insan meme kanseri hücre dizilerinde (MCF-7) ERK geninin sessizleştirilmesi,bu sessizleştirmenin ERK proteini aktivasyonu ve hücre çoğalması üzerine etkilerinin belirlenmesi
The silencing of ERK by using siRNA in human breast cancer cell lines (MCF-7), the effects of this silencing on ERK protein activation and cell proliferation
- Tez No: 319112
- Danışmanlar: PROF. DR. HASAN VEYSİ GÜNEŞ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Tıbbi Biyoloji, Biyoloji, Moleküler Tıp, Medical Biology, Biology, Molecular Medicine
- Anahtar Kelimeler: ERK, MCF-7, NIH 3T3, RNAi, siRNA, Fibroblastlar, Genler, Hücre dizisi, Meme, Meme neoplazmları, Neoplazm hücreleri-dolaşan, Neoplazmlar, RNA, ERK, MCF-7, NIH 3T3, RNAi, siRNA, Fibroblasts, Genes, Cell line, Breast, Breast neoplasms, Neoplastic cells-circulating, Neoplasms, RNA
- Yıl: 2012
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Eskişehir Osmangazi Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
MAP (Mitogen-activated protein) kinazlar hücre dışı sinyalleri, transkripsiyon faktörlerine ileten protein ailesidir. Hücre içi sinyal yolunda görev yapan bu protein ailesinin üyelerinden ERK (extracellular signal-regulated protein kinase) büyüme faktörleri ile uyarılarak hücre büyümesi, farklılaşması ve çoğalmasını etkilerken, JNK (c-jun amino-terminal kinase) ve p38 (high osmolarity glycerol response kinase) strese bağlı uyaranlarca uyarılarak apoptotik sinyallere aracılık eder.Meme kanseri kadınlarda çok sık görülen ve ölümle sonuçlanabilen bir kanser tipidir. ERK, p38 ve JNK proteinleri meme kanserinde incelenmiş ve normal dokulara oranla aktivasyonlarında artış olduğu belirlenmiştir. ERK proteininin aktivasyonundaki 5-20 kat artışın insan meme kanserinin metastatik formunun başlangıcının belirlenmesinde önemli bir belirteç olabileceği ileri sürülmüştür. RNAi (RNA interference), gen ekspresyonunun post-transkripsiyonel olarak baskılanmasına yol açan bir sistemdir. Bu baskılama, siRNAlar (small interference RNA) (21-23 nükleotid) aracılığı ile mRNA'nın yıkımının uyarılması ile gerçekleşir.Bu çalışmada; MCF-7 insan meme kanseri hücre dizisi ve NIH 3T3 sıçan normal fibroblast hücre dizisi, erk genine özgü siRNA ile transfekte edilerek erk geninin ne kadar sessizleştirildiği ve gen ekspresyon düzeyi total RNA kullanılarak qRT-PCR'da belirlenmiştir. Ayrıca ERK, p38 ve JNK proteinlerinin aktiviteleri de ELISA yöntemi ile belirlenirken, bu sessizleştirmenin hücre çoğalmasını nasıl etkilediği XTT kiti ile ortaya konmuştur.Elde edilen sonuçlar incelendiğinde, MCF-7 insan meme kanseri hücre dizisinde ERK siRNA kullanımı sonucu en etkili sessizleştirmenin 48. saatte 100 nM konsantrasyonda (% 99,85) olduğu belirlendi. Bunların yanında bu sessizleştirmeninhücre çoğalması ve protein ekspresyonunun azalması üzerine hemen hemen tüm konsantrasyonlarda etkili olduğu gözlendi. Sonuçta siRNA uygulamasının kanser tedavisinde oldukça faydalı yardımcı bir araç olabileceği belirlendi.
Özet (Çeviri)
MAP (Mitogen-activated protein) kinases, protein family, act as transducers of extracellular signaling to elements regulating transcription. The members of this intracellular signaling pathway protein family; ERK (extracellular signal-regulated protein kinase) is activated by growth factor signals and induces cell growth, differentiation and proliferation, JNK (c-jun amino-terminal kinase) and P38 (high osmolarity glycerol response kinase) are activated by stress-related stimuli and mediate apoptotic signals.Breast cancer is seen frequently in women and can result in death. ERK, p38 and JNK proteins were investigated in breast carcinoma and elevated activation was found compared with normal tissue. It has been proposed that 5-20 fold elevation in ERK activation is an important marker in initiation of metastatic form of human breast cancer. RNAi is a system in which leads to posttranscriptional suppression of gene expression. This suppression is mediated by siRNAs (21-23 nucleotide) which induce degradation of mRNA.In this study, MCF-7 human breast cancer cell line and NIH 3T3 mouse normal fibroblast cell line were cultured. Afterwards, erk gene of MCF-7 and NIH 3T3 cells was silenced by using siRNA. After siRNA transfection, erk gene silencing was measured by qRT-PCR method on mRNA level with total RNA isolated from cells by using total RNA isolation kit. In addition to activations of ERK, p38 and JNK proteins were measured by ELISA and it has been determined how this silencing effects cell proliferation by XTT kit.When the obtained results are analyzed, it is determined that the most effective silencing occurs at the 48th hour of 100 nM concentrated (% 99,85) ERK siRNA utilization. Besides, it was observed that erk gene silencing was effective for cellproliferation reducing and protein expression reducing at almost all concentrations. As a resullt, it was determined that siRNA application might be aidful in cancer treatment.
Benzer Tezler
- Targeting bag-1S/C-raf interaction for therapeutic intervention in cancer
Bag-1S/C-raf etkileşiminin kanserde terapötik bir yaklaşım olarak kullanılmak üzere hedeflenmesi
ÖZGE TATLI
Doktora
İngilizce
2022
Biyoteknolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
PROF. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY
- HMG-Koa redüktaz inhibitörlerinin meme adenokarsinom hücre hattı MCF-7 üzerinde hücre proliferasyonu ve hücre ölüm mekanizmaları (Apoptoz ve otofaji) üzerine etkisinin incelenmesi
Evaluation of the effects of HMG-Coa Reductase İnhibitors on the cell proliferation and cell death mechanisms (Apoptosis and autophagy) of the breast adenocarcinoma cell line MCF-7
TUĞBA DEMİRCİ
Doktora
Türkçe
2010
Histoloji ve EmbriyolojiHacettepe ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SEVDA F. MÜFTÜOĞLU
- Investigation of genetical material decorated nanoparticles usability as a new generation biochemical strategy in cancer therapy
Yeni nesil biyokimyasal strateji olarak genetik materyal ile dekore edilmiş nanopartiküllerin kanser tedavisinde kullanılabilirliğinin araştırılması
GÖKNUR KARA
- Targeting and activation of antigen specific CD8+ T cells with peptide-major histocompatibility complex I tetramers
Peptit-majör histokompatibilite kompleks I tetramerleri ile antijen spesifik CD8+ T hücrelerin hedeflenmesi ve aktivasyonu
ŞAFAK CEREN USLU ŞIVGIN
Doktora
İngilizce
2025
BiyoteknolojiHacettepe ÜniversitesiTemel Onkoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. HANDE CANPINAR
- Uzun kodlamayan RNA ZEB2NAT‟ın MCF7 ve MDA-MB-231 meme kanseri hücre hatlarında EMT, metastaz ve apoptoz üzerinden etkilerinin araştırılması
Investigation of the effects of long noncoding RNA ZEB2NAT via EMT, metastasis and apoptosis in MCF7 and MDA-MB-231 breast cancer cell lines
CANAN EROĞLU
Doktora
Türkçe
2019
Tıbbi BiyolojiNecmettin Erbakan ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ERCAN KURAR