Hepatit C virüs zarf glikoproteininin saflaştırılarak elde edilmesi
Obtaining of purified hepatitis C virus envelope glycoprotein
- Tez No: 324213
- Danışmanlar: DOÇ. DR. İ. M. ALİ ÖKTEM
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Mikrobiyoloji, Microbiology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2012
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 76
Özet
Hepatit C Virüsü (HCV) enfeksiyonu önemli bir halk sağlığı sorunudur. HCV kronikleşmeye eğilim gösterir ve ilerleyen dönemde siroz ile hepatosellüler karsinoma gibi ağır klinik tablolar gelişebilir. Virüs populasyonunun türümsü oluşumuna yatkın doğası sayesinde konak bağışık yanıtından kaçabilen varyantların seçilmesi kronik enfeksiyona gidişin göstergelerinden biridir. Zarf glikoproteinlerinin (E1 ve E2) sürekli şeçilim baskısı altında olması antikor yanıtından kaçabilen seçilmiş viral varyantların ortaya çıkmasıyla sonuçlanır. E1 proteini, hedef hücrelere virüsün bağlanması ve girişi yanı sıra konak immün yanıtının modülasyonunda da önemli rol oynar. Bu çalışmada, genotip 1b'ye ait bir HCV E1 molekülünün klonlanması ve prokaryotik sistemde ifade ettirilmesini raporladık.HCV E1 proteininin E. coli içinde ifadesi için, 1b genotipindeki bir klinik izolattan tam uzunlukta ve C-terminali kesilmiş E1 dizileri PZT yoluyla amplifiye edilmiştir. Elde edilen ürünler pQE30 vektörüne takılıp klonlandıktan sonra His-etiketlenmiş proteinler olarak E. coli içinde ifade edilmiştir. E1 proteinleri SDS-PAGE ile karakterize edildikten sonra proteinlerin immün reaktivitesi anti-HCV pozitif serum örnekleri kullanarak Western Blot (WB) analizi ile değerlendirilmiştir. Tam uzunlukta ve kesilmiş C-terminal E1 hexa-histidin-etiketli rekombinant füzyon proteinleri olarak prokaryotik sistemde başarıyla ifade edilmiştir. Rekombinant E1 proteinlerinde, HCV ile enfekte hastaların poliklonal serumLarı kullanılarak immünolojik reaksiyon belirlenmiştir.Tam uzunlukta viral zarf proteinlerinin prokaryotik ifadesi zor olabilir. Bu çalışmada Türkiye'de ilk kez, immünolojik reaktif olan tam uzunlukta ve kesilmiş E1 proteinlerin başarılı ifadesi raporlanmıştır. Bu çalışmada elde edilen rE1 proteinleri tanısal ve immünolojik ileri çalışmalarda önemli araçlardan olabilir.Anahtar kelimeler : HCV zarf proteini 1; Rekombinant proteinler; Escherichia coli
Özet (Çeviri)
Hepatitis C Virus (HCV) infection is a major public health issue. HCV has a propensity to develop chronic infections which may proceed to cirrhosis and hepatocellular carcinoma. One of the hallmarks of the chronic infection is the quasispecies nature of the viral population which favors the selection of variants that may escape the host immune responses. Envelope glycoproteins (E1 and E2) are constantly under selective pressures resulting in the selection of viral variants that can escape antibody responses. E1 protein also plays important roles in viral attachment and entry into target cells as well as in the modulation of host immune responses. In this study, we report the cloning and prokaryotic expression of a genotype 1b HCV E1 molecule.For the expression of HCV E1 protein in E. coli, full-length and C-terminally truncated E1 sequences from a clinical isolate of subtype 1b virus were amplified by PCR. Resulting fragments were cloned into pQE30 vector and subsequently expressed in E. coli as His-tagged proteins. The E1 proteins were characterized by SDS-PAGE. The immunologic reactivity of the proteins were evaluated by western blot (WB) analysis using anti-HCV positive serum samples.Full-length and C- terminally truncated E1 were successfully expressed in prokaryotic system as hexa-histidine-tagged recombinant fusion proteins. The proteins self-assembled into dimers and trimers as shown by PAGE and WB PAGE analyses. Recombinant E1 proteins were also immunologically reactive using polyclonal sera from HCV infected patients.Prokaryotic expression of full-length viral membrane proteins can be difficult. We report here the successful expression of the immunologically reactive full-length and truncated E1 proteins for the first time in Turkey. The rE1 proteins can be important tools fur further diagnostic and immunological studies.Key words : HCV envelope protein 1; Recombinant proteins; Escherichia coli
Benzer Tezler
- Isparta il merkezi kan donörlerinde GBV-C/HGV prevalansı ve HBV ve HCV ile koinfeksiyonunun araştırılması
Investigation of prevalence of GBV-C/HGV in blood donors and coinfection HBV and HCV in Isparta
SELÇUK KAYA
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2002
MikrobiyolojiSüleyman Demirel ÜniversitesiMikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. BUKET CİCİOĞLU ARIDOĞAN
- The effect of HLA DPB1 alleles on the immune response in chronic Hepatitis B
Kronik Hepatit B hastalığında HLA DPB1 allelerin hastalığın immun yanıta etkisi
NİLAY GURBET KARATAŞ
Yüksek Lisans
İngilizce
2014
Tıbbi Biyolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. GİZEM DİNLER DOĞANAY
- Hepatit e antijenine (HBeAg) özgü monoklonal antikor geliştirilmesinde alternatif yöntemler
Alternative methods for developing monoclonal antibodies against hepatitis e antigen (HBeAg)
İBRAHİM SÖĞÜT
Doktora
Türkçe
2011
Allerji ve İmmünolojiEskişehir Osmangazi ÜniversitesiTıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AYNUR BAŞALP
PROF. DR. GÜNGÖR KANBAK
- Hepatit c virüs (HCV) enfeksiyonlarında kemokinlerin rolü
The role of chemokines in hepatitis c virus (HCV) infection
ORÇUN ZORBOZAN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2013
MikrobiyolojiPamukkale ÜniversitesiTıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İLKNUR KALELİ
- HCV viral yükünün saptanmasında real time PZR temelinde bir yöntem geliştirilmesi
Development of a new method based on real time PCR for assessment of HCV viral load.
ABBAS ALİ HUSSEİNİ
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
BiyoteknolojiAnkara ÜniversitesiTemel Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MİTHAT BOZDAYİ