Geri Dön

Tetrahymena thermophila transformasyonunda kullanılan replikatif plazmidlere tetrahymena kodon uyumlu neomisin direnç geninin aktarımı ve antibiyotik seçiciliği

Codon optimized neomycin resistance (neo4) gene in a replicative plasmid increases the transformation efficiency of conjugative Tetrahymena thermophila by electroporation

  1. Tez No: 342608
  2. Yazar: AYÇA FULYA ÜSTÜNTANIR
  3. Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. MUHİTTİN ARSLANYOLU
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Bilim ve Teknoloji, Biyoloji, Biyoteknoloji, Science and Technology, Biology, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2013
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Anadolu Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 63

Özet

Günümüzde neomisin dirençlilik geni bulunduran replikatif plasmidler ile T. thermophila'ya yapılan konjugant elektroporasyon (CET) verimliliğinin ~%1-11 aralığında olduğu bilinmektedir; ne yazık ki bu verimlilik oranı cDNA ve genomik DNA kütüphanelerini taramak için yeterli sayıda vejetatif (somatik) veya germ-hattı (kalıtsal) üretmeye yeterli gelmemektedir. Bu çalışmanın amacı; CET'in verimliliğinin kodon optimize neomisin direnç geni (neo4) ile C3 ribozomal DNA (rDNA) replikasyon orijini içeren replikatif bir plazmid ile tanımlanmasıdır. Bu çalışma ile 3.8 kb C3 rDNA replikasyon orijini pH4T2 vektöründen üretilmiş ve pNeo4 vektörünün HindIII-SalI kısmına ligasyon ile eklenerek pNeo4-ori vektörü üretilmiştir. Konjugant T. thermophila hücrelerine 15 µg pNeo4-ori'nin elektroporasyonu gerçekleştirilmiştir. Transformant hücreler ~12-24 saatlik bir beklemeden sonra SPP besiyerinde final konsantrasyonu 1 µg/ml olacak şekilde hücrelerin yarısı CdCI2 indüklenirken, diğer yarısı CdCI2'sız besiyerinde 7 gün boyunca paromomisin baskısı 100, 300 ve 600 µg/ml olacak şekilde seçilim sağlanmıştır. Sonuç olarak bu çalışma, neo4 kaseti ile C3 orijininin birlikte bulunduran pNeo4-ori vektörünün elektroporasyon ile Tetrahymena'ya transformasyonunda kullanılabileceğini göstermiştir.

Özet (Çeviri)

Today, efficiency of conjugant electrotransformation (CET) of Tetrahymena thermophila with a replicative plasmid containing a paromomycin-resistant gene is still known as ~1-11% range, which is not high enough for the efficient production of germline or vegetative transgenic strains to screen cDNA or genomic DNA library. The goal of this study is to determine the efficiency of CET by using a replicative plasmid containing a paromomycin-resistant codon optimized gene (neo4) and a C3 ribosomal DNA (rDNA) replication origin. In this study, the 3.8 kb C3 rDNA replicative origin from pH4T2 were amplified and ligated to HindIII-SalI site of pNeo4 vector to create pNeo4-ori. Conjugating cells of the ciliate T. thermophila were electroporated with 15 µg of pNeo4-ori. Transformed cells were selected with paromomycin following ~12-24 hr of growth on SPP medium. We observed resistant cells in first 2-3 days until 7th day under increasing paromomycin (100, 300 and 600 µg/ml) with CdCI2 (final concentration 1 µg/ml) or without CdCI2. These results indicate that the electroporation of T. thermophila with the pNeo4-ori constructed plasmid containing C3 replicative origin and neo4 gene cassette is duable.

Benzer Tezler

  1. DNA ile beslenen aç Tetrahymena thermophila hücrelerinde deoksiribonükleaz (DNaz) aktivitesinin gen ifadesi açısından karakterizasyonu

    Characterization of deoxyribonuclease (DNase) activity in DNA-fed starved Tetrahymena thermophila cells based on gene expression

    ERHAN ASLAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    BiyokimyaAnadolu Üniversitesi

    İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. MUHİTTİN ARSLANYOLU

  2. Tetrahymena thermophila'ya kodon uyumu yapılmış superfolder GFP (sfGFP)'nin T. thermophila'da rekombinant protein üretimi ve flüoresan özelliğinin karakterizasyonu

    Recombinant protein production of codon adapted superfolder GFP (sfGFP) in Tetrahymena thermophila and its fluorescence characterization

    GÜRKAN YILMAZ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    BiyolojiAnadolu Üniversitesi

    İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. MUHİTTİN ARSLANYOLU

  3. Tetrahymena thermophila insülin benzeri proteinlerininimmüno-afinitik tabanlı belirlenmesi, rekombinant üretimive hormonal karakterizasyonu

    Immuno-affinity based determination, recombinantproduction and hormonal characterization of tetrahymenathermophila insulin-like protein(s)

    AYÇA FULYA ÜSTÜNTANIR DEDE

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    BiyolojiEskişehir Teknik Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MUHİTTİN ARSLANYOLU

  4. İnsan gen terapötiklerinden interferon beta (hIFNβ)'nın Tetrahymena thermophila'da rekombinant üretimi ve karakterizasyonu

    Recombinant production and characterisation of human interferon beta (hIFNβ) therapeutic protein in Tetrahymena thermophila

    MURAT KAYA

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    BiyolojiAnadolu Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MUHİTTİN ARSLANYOLU

  5. Tetrahymena thermophila glutatyon S-transferaz enzim ailesinden MU alt sınıfı üyelerinden birinin rekombinant olarak üretimi ve enzimatik karakterizasyonu

    Recombinant production and enzimatic characterization of one of MU sub-class members from Tetrahymena thermophila glutatyon S-transferase enzyme family

    HANDAN AÇELYA KAPKAÇ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    BiyolojiEskişehir Teknik Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MUHİTTİN ARSLANYOLU