Geri Dön

Yerel Bacillus izolatlarından alfa amilazların klonlanması ve rekombinant amy28 alfa amilazının enzim özelliklerinin belirlenmesi

Cloning of amylases from local Bacillus isolates and determination of enzyme characteristics of recombinant amy28 alpha amylase

PDF İndir

  1. Tez No: 346341
  2. Yazar: MERVE TUZLAKOĞLU ÖZTÜRK
  3. Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. SALİHA İŞSEVER ÖZTÜRK
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: α-amilaz, Bacillus, Ligaz-bağımlı Olmayan Klonlama, Saflaştırma, Biyokimyasal Nitelendirme, α-amylase, Bacillus, Ligase-independent Cloning, Purification, Biochemical Characterization
  7. Yıl: 2013
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Gebze Yüksek Teknoloji Enstitüsü
  10. Enstitü: Mühendislik ve Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 110

Özet

Alfa Amilaz (EC 3.2.1.1) nişasta ve benzeri karbohidratlardaki alfa-1,4 glikozidik bağlarının hidrolizini katalizleyerek oligosakkarit ve glukoz oluşturan, önemli endüstriyel enzimlerden biridir. Gıda, tekstil, kağıt, deterjan ve farmasötik endüstrilerinde yaygın olarak kullanılan amilazlar, dünya enzim pazarının yaklaşık % 30'unu oluşturmaktadır. Bitki, hayvan ve mikroorganizma gibi çeşitli kaynaklardan elde edilebildiği halde endüstriyel uygulamalarda genellikle mikrobiyal olanları tercih edilir. Bu çalışmada, Türkiye'deki çeşitli kaynaklardan izole edilmiş Bacillus soylarının alfa amilaz genleri iki PCR basamağı kullanılarak ligaz bağımlı olmayan bir yöntemle klonlandı ve E. coli'de eksprese edildi. Elde edilen klonlardan, en yüksek alfa amilaz aktivitesine sahip olanı enzim saflaştırma ve nitelendirme çalışmalarına alındı. Rekombinant enzim % 22 verimle 16 kat saflaştırıldı. Saflaştırılan enzimin biyokimyasal nitelendirme çalışmaları sonucu, enzimin 70oC'ta ve pH 6.0'da optimal aktivite gösterdiği görüldü. Rekombinant alfa amilaz,pH 5.0-12.0 aralığında ve 70oC'a kadar olan sıcaklıklarda kararlılık gösterdi.2-merkapto etanolün enzimin 50oC'taki kararlılığını arttırdığı, bununla birlikte 10 mM EDTA ve PMSF, % 30 gliserol, etilen glikol ve DMSO'nun enzimi inhibe ettiği görüldü.

Özet (Çeviri)

Alpha amylase (EC 3.2.1.1) is one of the most important industrial enzymes which catalyze the hydrolysis of alpha-1,4 glycosidic bonds in starch components and related carbohydrates, yielding oligosaccharides and glucose as end products. Amylases constitute a class of industrial enzymes representing approximately 30 % of the world enzyme production. They have wide number of applications in food, textile, paper, detergent and pharmaceutical industries. Although amylases can be derived from a several sources, including plants, animals and microorganisms, microbial enzymes generally have been preferred to industrial applications. In this work, the alpha amylase genes from Bacillus strains which have been isolated from various sources in Turkey was cloned with a ligase-independent method via two-step PCR and expressed in Escherichia coli. Among the clones, higher alpha amylase producing strain was selected for enzyme purification and characterization studies. The recombinant enzyme was purified ~16 fold with 22 % yield. Biochemical characterization studies of purified enzyme showed that the enzyme had an optimal activity at 70oC and at pH 6.0. The amylase was stable at pHs ranging from 5.0 to 12.0 and temperature up to 70oC. 2-ME was increased the stability of the enzyme at 50 oC. However, it can be partially inhibited by 10 mM EDTA and PMSF, as well as 30 % of glycerol, ethylene glycol and DMSO.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    341396

    Yerel Bacillus soylarının ürettiği lipazların özelliklerinin yönlendirilmiş evrim ve/veya akılcı protein tasarımı yöntemleri ile iyileştirilmesi

    Improvement characteristics of local Bacillus lipases by directed evolution and/or rational protein design methods

    NAGİHAN AKBULUT

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    BiyoteknolojiGebze Yüksek Teknoloji Enstitüsü

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. SALİHA İŞSEVER ÖZTÜRK

  2. Tez No

    774508

    Endofit ve epifit bakterilerin turunçgillerde sorun olan bazı fungal patojenlere karşı in vitro biyokontrol etkinliklerinin belirlenmesi

    Determination of in vitro biocontrol efficiences of endophytic and epiphytic bacteria against some citrus fungal pathogens

    YUSUF GÜMÜŞ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    ZiraatHatay Mustafa Kemal Üniversitesi

    Bitki Koruma Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. EMİNE MİNE SOYLU

  3. Tez No

    484355

    Bacillus cinsine ait yerel bakteri izolatlarında kitinaz genlerinin taranması ve bu izolatların antifungal aktivitelerinin araştırılması

    Screening of chitinase genes from local Bacillus isolates and testing their antifungal activity

    ZEHRA BÜŞRA AZİZOĞLU

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    BiyolojiErciyes Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ABDURRAHMAN AYVAZ

  4. Tez No

    212010

    Yerel Bacillus izolatlarının tiplendirilmesinde moleküler biyolojik yaklaşımlar

    Molecular biological approaches in typing endemic Bacillus isolates

    ŞAZİYE SERDA KAYMAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2007

    BiyolojiGebze Yüksek Teknoloji Enstitüsü

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. SALİHA İŞSEVER ÖZTÜRK

  5. Tez No

    768262

    Polihidroksialkanoat (PHA) üreticisi yerel Bacillus soylarının taranması ve Bacillus sp. A19'dan elde edilen polihidroksialkanoatın üretilmesi ve karakterizasyonu

    Screening of polyhydroxyalkanoate (PHA) producing local Bacillus strains and production and characterization of polyhydroxyalkanoate from Bacillus sp. A19

    GİZEM KUGU

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    BiyolojiGebze Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyokimya ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ SALİHA İŞSEVER ÖZTÜRK

Geri Dön