Geri Dön

Termofilik Thermus sp. NCCB 100425T esterazının saflaştırılması ve biyokimyasal karakterizasyonu

Purification and biochemical characterization of thermophilic Thermus sp. NCCB 100425T esterase

  1. Tez No: 348353
  2. Yazar: MEHMET ALİ TEKİNCANLI
  3. Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. MELİKE YILDIRIM AKATIN
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2013
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Karadeniz Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 64

Özet

Bu çalışmada, Thermus sp. NCCB 100425T bakteriyal esterazı amonyum sülfat çöktürmesi ile ön saflaştırma işlemine tabi tutulduktan sonra, hidrofobik etkileşim kromatografisi ile tam olarak saflaştırıldı ve saf enzim biyokimyasal olarak karakterize edildi. Enzimin saflığı, doğal- ve SDS-PAGE kullanılarak ortaya konuldu. p-nitrofenil asetat (pNPA) substratı varlığında, enzimin optimum pH?sı 7,5, optimum sıcaklığı ise 60 °C olarak belirlendi. Yapılan kinetik çalışmalar sonucunda, pNPA substratı varlığında Km ve Vmaks değerleri sırasıyla 18,32 mM ve 96,15 U/mg protein olarak belirlendi. pH 4,0-9,0 arasında, 4 °C?de inkübasyona bırakılan saf enzimde aktivitenin 7. günün sonunda bütün pH?larda %85-90 oranında, 60 °C?de 7. günün sonunda ise pH 8,0?de %59±5,2 oranında korunduğu gözlendi. 30-60 °C?ler arasında 7 gün boyunca inkübe edilen enzimin orijinal aktivitesinin yaklaşık %80?ini koruduğu gözlendi. %10 nihai konsantrasyondaki etanol ve DMSO varlığında, enzim maksimum aktivitesinin %96±2,7 ve %78±2,5?ine sahip oldu. Ayrıca bazı metal iyonlarının enzim aktivitesini farklı oranlarda etkilediği tespit edildi. Bu sonuçlar, oldukça pH ve ısıl kararlı bir enzim olan Thermus sp. NCCB 100425T esterazının bazı endüstriyel ve/veya klinik uygulamalarda kullanılabilecek bir potansiyele sahip olabileceğini göstermektedir.

Özet (Çeviri)

In this study, Thermus sp. NCCB 100425T esterase was purified using ammonium sulphate precipitation and hydrophobic interaction chromatography and then characterized biochemically. The purity of the enzyme was observed as a single band on native- and SDS PAGE. In the presence of p-nitrophenyl acetate (pNPA) as a substrate, the optimum pH and temperature of the enzyme were found to be 7.5 and 60 °C, respectively. In the presence of pNPA, Km and Vmax values are calculated as 18.32 mM and 96.15 U/mg protein, respectively. pH stability was investigated in the range of pH 4.0-9.0 at 4 °C and 60 °C. After 7 days incubation, activity of pure enzyme was retained 85-90% for all pH at 4 °C and %59±5,2 for pH 8.0 at 60 °C. It was determined that approximately 80% of enzyme activity was retained between 30-60 °C after 7 days incubation. In the presence of 10% ethanol and DMSO, the enzyme activity was retained 96±2.7% and 78±2.5%, respectively. Additionally, it was detected that some metal ions affect the enzyme activity at different ratios. It is clear from the present results that Thermus sp. NCCB 100425T esterase might have advantages for industrial and/or clinical applications in terms of especially its high thermal- and pH-stability.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    202086

    Ege bölgesindeki çeşitli sıcak su kaynaklarından thermus genusu bakterilerin izolasyonu, moleküler yöntemlerle identifikasyonu ve ß-galaktosidaz aktivitesinin saptanması

    Isolation and identification of the genus thermus from various hot springs in aegean region by molecular biology methods and determination of ß-galactosidase activity

    NERMİN SARIGÜL

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2007

    BiyomühendislikEge Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. RENGİN ELTEM

  2. Tez No

    285379

    Thermus sp. K6' dan yeni, kriptik, küçük, çok kopyalı bir plazmitin (pHIG22) izolasyonu ve kısmi karakterizasyonu

    Isolation of a novel, cryptic low molecular-weight, multicopy plasmid, pHIG22, from Thermus sp. K6 and its partial characterization

    HALİL İBRAHİM GÜLER

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    BiyolojiKaradeniz Teknik Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ALİ OSMAN BELDÜZ

  3. Tez No

    324580

    Bazı jeotermal kaynaklardan termofilik bakterilerin izolasyonu ve endüstriyel öneme sahip enzimlerin belirlenmesi

    Isolation of thermophilic bacteria and determination of their industrially important enzymes from some geothermal sources in Turkey

    HATİCE AKDAŞ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2012

    BiyolojiSüleyman Demirel Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. AYNUR GÜL KARAHAN

    PROF. DR. MUHSİN KONUK

  4. Tez No

    447010

    Sıcak su kaynaklarından termofilik mikroorganizmalarin izolasyonu, identifikasyonu ve poli-β-hidroksibütirat üretim yeteneklerinin belirlenmesi

    Isolation of thermophilic microorganisms from hot springs, identification and determination their ability to poly-β hydroxybutyrate pruduction

    SERAP GEDİKLİ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    BiyolojiEskişehir Osmangazi Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. AHMET ÇABUK

    DOÇ. DR. MEHMET BURÇİN MUTLU

  5. Tez No

    120437

    Aydın yöresi jeotermal sularındaki termofilik bakterilerin incelenmesi

    An Investigation on thermophilic bacteria from geothermal waters of Aydın province

    GAMZE BAŞBÜLBÜL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2002

    BiyolojiAdnan Menderes Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    Y.DOÇ.DR. HALİL BIYIK

Geri Dön