Termofilik Thermus sp. NCCB 100425T esterazının saflaştırılması ve biyokimyasal karakterizasyonu
Purification and biochemical characterization of thermophilic Thermus sp. NCCB 100425T esterase
- Tez No: 348353
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. MELİKE YILDIRIM AKATIN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2013
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Karadeniz Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 64
Özet
Bu çalışmada, Thermus sp. NCCB 100425T bakteriyal esterazı amonyum sülfat çöktürmesi ile ön saflaştırma işlemine tabi tutulduktan sonra, hidrofobik etkileşim kromatografisi ile tam olarak saflaştırıldı ve saf enzim biyokimyasal olarak karakterize edildi. Enzimin saflığı, doğal- ve SDS-PAGE kullanılarak ortaya konuldu. p-nitrofenil asetat (pNPA) substratı varlığında, enzimin optimum pH?sı 7,5, optimum sıcaklığı ise 60 °C olarak belirlendi. Yapılan kinetik çalışmalar sonucunda, pNPA substratı varlığında Km ve Vmaks değerleri sırasıyla 18,32 mM ve 96,15 U/mg protein olarak belirlendi. pH 4,0-9,0 arasında, 4 °C?de inkübasyona bırakılan saf enzimde aktivitenin 7. günün sonunda bütün pH?larda %85-90 oranında, 60 °C?de 7. günün sonunda ise pH 8,0?de %59±5,2 oranında korunduğu gözlendi. 30-60 °C?ler arasında 7 gün boyunca inkübe edilen enzimin orijinal aktivitesinin yaklaşık %80?ini koruduğu gözlendi. %10 nihai konsantrasyondaki etanol ve DMSO varlığında, enzim maksimum aktivitesinin %96±2,7 ve %78±2,5?ine sahip oldu. Ayrıca bazı metal iyonlarının enzim aktivitesini farklı oranlarda etkilediği tespit edildi. Bu sonuçlar, oldukça pH ve ısıl kararlı bir enzim olan Thermus sp. NCCB 100425T esterazının bazı endüstriyel ve/veya klinik uygulamalarda kullanılabilecek bir potansiyele sahip olabileceğini göstermektedir.
Özet (Çeviri)
In this study, Thermus sp. NCCB 100425T esterase was purified using ammonium sulphate precipitation and hydrophobic interaction chromatography and then characterized biochemically. The purity of the enzyme was observed as a single band on native- and SDS PAGE. In the presence of p-nitrophenyl acetate (pNPA) as a substrate, the optimum pH and temperature of the enzyme were found to be 7.5 and 60 °C, respectively. In the presence of pNPA, Km and Vmax values are calculated as 18.32 mM and 96.15 U/mg protein, respectively. pH stability was investigated in the range of pH 4.0-9.0 at 4 °C and 60 °C. After 7 days incubation, activity of pure enzyme was retained 85-90% for all pH at 4 °C and %59±5,2 for pH 8.0 at 60 °C. It was determined that approximately 80% of enzyme activity was retained between 30-60 °C after 7 days incubation. In the presence of 10% ethanol and DMSO, the enzyme activity was retained 96±2.7% and 78±2.5%, respectively. Additionally, it was detected that some metal ions affect the enzyme activity at different ratios. It is clear from the present results that Thermus sp. NCCB 100425T esterase might have advantages for industrial and/or clinical applications in terms of especially its high thermal- and pH-stability.
Benzer Tezler
- Ege bölgesindeki çeşitli sıcak su kaynaklarından thermus genusu bakterilerin izolasyonu, moleküler yöntemlerle identifikasyonu ve ß-galaktosidaz aktivitesinin saptanması
Isolation and identification of the genus thermus from various hot springs in aegean region by molecular biology methods and determination of ß-galactosidase activity
NERMİN SARIGÜL
- Thermus sp. K6' dan yeni, kriptik, küçük, çok kopyalı bir plazmitin (pHIG22) izolasyonu ve kısmi karakterizasyonu
Isolation of a novel, cryptic low molecular-weight, multicopy plasmid, pHIG22, from Thermus sp. K6 and its partial characterization
HALİL İBRAHİM GÜLER
Yüksek Lisans
Türkçe
2011
BiyolojiKaradeniz Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ALİ OSMAN BELDÜZ
- Bazı jeotermal kaynaklardan termofilik bakterilerin izolasyonu ve endüstriyel öneme sahip enzimlerin belirlenmesi
Isolation of thermophilic bacteria and determination of their industrially important enzymes from some geothermal sources in Turkey
HATİCE AKDAŞ
Doktora
Türkçe
2012
BiyolojiSüleyman Demirel ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AYNUR GÜL KARAHAN
PROF. DR. MUHSİN KONUK
- Sıcak su kaynaklarından termofilik mikroorganizmalarin izolasyonu, identifikasyonu ve poli-β-hidroksibütirat üretim yeteneklerinin belirlenmesi
Isolation of thermophilic microorganisms from hot springs, identification and determination their ability to poly-β hydroxybutyrate pruduction
SERAP GEDİKLİ
Doktora
Türkçe
2016
BiyolojiEskişehir Osmangazi ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AHMET ÇABUK
DOÇ. DR. MEHMET BURÇİN MUTLU
- Aydın yöresi jeotermal sularındaki termofilik bakterilerin incelenmesi
An Investigation on thermophilic bacteria from geothermal waters of Aydın province
GAMZE BAŞBÜLBÜL
Yüksek Lisans
Türkçe
2002
BiyolojiAdnan Menderes ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
Y.DOÇ.DR. HALİL BIYIK