Geri Dön

Hepatoselüler karsinoma hücrelerinin epitelyal-mezenkimal dönüşüm sürecinde mikro-RNA'ların rolünün belirlenmesi

The role of micro-RNAs in epithelial-mesenchymal transition of hepatocellular carcinoma cells

PDF İndir

  1. Tez No: 361338
  2. Yazar: PEYDA KORHAN
  3. Danışmanlar: PROF. DR. SAFİYE NEŞE ATABEY
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Tıbbi Biyoloji, Medical Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2014
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Temel Tıp Bilimleri Bölümü
  12. Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 81

Özet

Hepatoselüler karsinoma (HCC) metastatik ve rekürren doğası nedeniyle dünyada en sık rastlanan, agresif ve kötü prognozlu kanser türlerindendir. Epitelyal-Mezenkimal Dönüşüm (EMT) diğer epitel kökenli kanserlerde olduğu gibi HCC'de de tümör invazyonu ve metastazı için en önemli aşamalardan biridir. Bu süreçte mikro-RNA'ların (miRNAs) rol oynadığı bildirilmiştir. HCC'de mortalitinin bu kadar yüksek olmasının nedenlerinden en önemlileri invazyon ve metastaz olduğundan, projemiz kapsamında EMT'nin rol oynadığı hücre migrasyon ve invazyonunda miRNA'ların rolünü incelemeyi amaçladık. EMT sürecinde değişen miRNA'ları belirlemek için EMT fenotipinin uyarıldığı HCC hücreleri ile atasal HCC hücreleri ile miRNA mikrodizin çalışması gerçekleştirdik. Biyoinformatik analizlerle ekspresyonu değişen miRNA'ları ve onların hedeflerini belirledik. Gerçek Zamanlı Polimeraz Zincir Reaksiyonu (RT-PCR) ile seçilen miRNA'lardaki değişimi doğruladık. Bu miRNA'larden biri olan miR-181a-5'nin overekspresyonu ve baskılanmasının adezyon, proliferasyon, motilite, invazyon, ve tübülogenez rolünü inceledik. İlişkili hedef moleküllerinin ekspresyon düzeylerini Western Blotlama (WB) yöntemiyle araştırdık.“Luciferase Reporter Assay”yöntemi ile miRNA'nın bağlandığı hedef molekülü belirledik. Normal karaciğer, siroz, HCC ardışık doku kesitlerinde miR-181a-5p ekspresyonunu in situ hibridizasyon (ISH), hedef molekül ekspresyonunu da İmmünfloresan (IF) yöntemiyle inceledik. miR-181a-5p baskılanmasının motilite, invazyon ve tübülogenezi uyardığını, overekspresyonunun ise motilite, invazyon ve tübül oluşumunu azaltığını belirledik. Buna karşın, miR-181a-5p ekspresyonunun hücre adezyon ve proliferasyonu üzerinde belirgin bir etkisinin olmadığını gözlemledik. miR-181a-5'nin motilite, invazyon ve tübülogenezi c-Met sinyal yolağı aracılıklı düzenlediğini ve bunu c-Met reseptörünü direk olarak hedef alarak gerçekleştiridiğini gösterdik. Doku mikrodizin analizlerinde miR-181a-5p ekspresyonunun hepatokarsinogenez sürecinde azalırken, c-Met ekspresyonunun arttığını ortaya koyduk. Bu çalışma ile literatürde ilk kez hepatokarsinogenezde miR-181a-5p ekspreyonunun azaldığı, buna karşın c-Met ekspresyonunun arttığı gösterilip, miR-181a-5p'nin c-Met sinyal yolağını hedefleyerek, HCC hücre migrasyon, invazyon ve tübulo-morfogenezinin düzenlenmesinde rol oynadığı ortaya konmuştur. Elde ettiğimiz bulgular, c-Met ve miR-181a-5p'nin birlikte hedef alınarak HCC'de yeni birleştirilmiş-hedefli tedavi yaklaşımları için iyi hedefler olabileceğini düşündürmektedir.

Özet (Çeviri)

HCC is one of the most common and aggressive cancers worldwide. EMT, known as a phenotypical conversion of cells, is a key event in tumor invasion of carcinomas including HCC. There are lots of molecular mechanisms responsible for EMT and still underlying mechanism is unknown. Emerging evidence indicates that MicroRNAs are often deregulated during EMT. Since main mortality reason of HCC is due to recurrence of disease and metastasis, we aimed to analyze role of miRNAs in HCC migration and invasion in this project. We performed miRNA microarray assay with EMT-induced clones and wild type cells to determined miRNA affected by EMT. We performed some bioinformatics works to cluster miRNAs and to find out predicted target of these miRNAs. Microarray results were validated by RT-PCR. We analyzed expression of target molecules by WB after transfecting cells either with miRNA mimic or miRNA inhibitor. miRNA-181a-5p target molecule was determined by Luciferase Assay. Biological behaviors including, adhesion, proliferation, motility, invasion, and tubulomorphogenesis were evaluated after miRNA mimic or inhibitor transfections. Analysis of miR-181a-5p expression by ISH and c-Met expression by IF, respectively were carried out in liver tissue microarrays sectioned sequentially, including normal, cirrhotic and HCC tissues. We determined that while overexpression of miR-181a-5p reduced migration invasion, and branching tubulogenesis, its inhibition increased cellular motility, invasion and branching tubulogenesis. However, we observed that miR-181a-5p expression had no significant effect on cell adhesion and proliferation. We showed that miR-181a-5p regulated cellular motility, invasion and tubulogenesis through a direct inhibition of c-Met expression and indirectly regulated c-Met signaling pathyway. ISH of miR-181a-5p and c-Met staining in normal liver, cirrhosis and HCC tissues revealed that miR-181a-5p expression showed a significant decreased during transformation of normal liver to HCC, whereas c-Met expression increased in hepatocarcinogenesis. This project demonstrated for the first time that miR-181a-5p decreseased during hepatocarcinogenesis and miR-181a-5p plays a central role in cellular motility invasion, and tubulogenesis through directly targeting c-Met and regulating c-Met signaling pathyway. Taken together, our results define a regulatory link between miR-181a-5p and c-Met signaling pathway in hepatocarcinogenesis, which imply that combined modality targeting both miR-181a-5p and c-Met may become a therapy alternative in HCC.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    440271

    Hepatoselüler karsinom gelişiminde oksidatif stres ile ilişkili sinyal yolaklarının rolü

    The role of signaling pathways associated with oxidative stress in the progression of hepatocellular carcinom

    AYŞİM GÜNEŞ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    GenetikDokuz Eylül Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SAFİYE NEŞE ATABEY

  2. Tez No

    579587

    Potential regulatory effects of fluidic shear stress through C-met signalling on biological behaviours of hepatocellular carcinoma cells

    Sivi teğetsel gerilme stresinin hepatoselüler karsinoma hücrelerinin biyolojik davranişlarina C-met sinyal yolaği aracilikli etkilerinin araştirilmasi

    DEHAN ÇÖMEZ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2019

    Moleküler TıpDokuz Eylül Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. HATİCE GÜNEŞ ÖZHAN

    PROF. DR. SAFİYE NEŞE ATABEY

  3. Tez No

    659038

    Analysis of the ATAD2 gene effect on the genes involved in epithelial mesenchymal transition in estrogen positive and negative breast cancers

    Östrojen pozitif ve negatif meme kanserinde ATAD2 geninin epitel mezenkimal dönüşüm genleri üzerine etkisinin analizi

    ZEYNEP ILGIM ÖZERK

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2021

    Biyolojiİhsan Doğramacı Bilkent Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. IŞIK YULUĞ

  4. Tez No

    573347

    ZEB2/SIP'in hepatoselüler karsinomada yarışmacı endojen rna (ceRNA) bağımlı düzenlenmesi

    Competing endogenous RNA dependent regulation of ZEB2/SIP1 in hepatocellular carcinoma

    İREM YALIM CAMCI

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    BiyolojiGebze Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. TAMER YAĞCI

  5. Tez No

    493427

    Hepatosellülar karsinoma'da regorafenib etkilerinin incelenmesi

    Identification of the effect of regorafenib in hepatocellular carcinoma

    MUSTAFA KARABİÇİCİ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    OnkolojiDokuz Eylül Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ŞERİFE ESRA ERDAL BAĞRIYANIK

Geri Dön