Geri Dön

Yüksek sıcaklık ve PH'da aktif yeni bir kimerik ksilanazın oluşturulması ve karakterizasyonu

Construction and characterization of a new chimeric xylanase active at high temperature and PH

PDF İndir

  1. Tez No: 365253
  2. Yazar: MERVE TUNÇEL
  3. Danışmanlar: PROF. DR. SABRİYE ÇANAKÇI
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biyoteknoloji, Mikrobiyoloji, Biology, Biotechnology, Microbiology
  6. Anahtar Kelimeler: Bacillus halodurans C-125, Geobacillus sp. TF16, DNA shuffling, Kimerik gen, Bacillus halodurans C-125, Geobacillus sp. TF16, DNA shuffling, Chimeric gene
  7. Yıl: 2014
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Karadeniz Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 92

Özet

Bu çalışmada, Bacillus halodurans C-125 ve Geobacillus sp. TF16 ksilanaz genleri PCR'la çoğaltıldı. Bu genler PGEMT-Easy vektörüne klonlandı ve sekans analizi yapılarak istenen gene ait diziler oldukları belirlendi. Daha sonra B. halodurans C-125 bakterisine ait ksilanaz geni E. coli ekspresyon vektörü olan pET20b(+)'ye aktarıldı. Fakat B. halodurans C-125 ksilanazında ekspresyon görülmedi. Geobacillus sp. TF16 ksilanaz geni ise pET20b(+) vektörüne aktarılamadığından, ksilanaz proteini bakteriden doğrudan elde edildi. TF16 ksilanazı amonyum sülfat çöktürmesi ve iyon değişimi kolon kromatografisi kullanılarak saflaştırıldı. TF16 ksilanaz enzimi optimum pH, optimum sıcaklık ve kinetik parametreler açısından değerlendirildi. Enzimin optimum pH'sı; 9.0, optimum sıcaklığı; 70 °C, Km; 6,86± 0,615 mg/ml, Vmax; 720,24± 22,99 U/mg olarak hesaplandı. B. halodurans C-125 ve Geobacillus sp. TF16 ksilanaz genleri kullanılarak DNA shuffling yöntemini temel alan bir yaklaşımla kimerik ksilanaz genleri oluşturuldu. Bu kimerik genler; GeoInH2CTer, GeoInH2CTer2, GeoIntraH2Int3 ve GeoIntraH2Int4 olarak isimlendirildi. Kimerik genler pET28a(+) ekspresyon vektörüne aktarılarak, E. coli BL21 (DE3) suşu içerisinde çoğaltıldı. Aktarım sonucunda GeoIntraH2Int3 ve GeoIntraH2Int4'de ekspresyon görülürken, GeoInH2CTer, GeoInH2CTer2'de ekspresyona rastlanmadı. GeoIntraH2Int3'ün optimum sıcaklığı 60 °C, pH'sı 8,0, GeoIntraH2Int4'ün optimum sıcaklığı 50-60 °C, optimum pH'sı ise 8,0-10,0 olarak bulundu.

Özet (Çeviri)

In this study, the xylanase genes of Bacillus halodurans C-125 and Geobacillus sp. TF16 were amplified with PCR. These genes were cloned into the pGEMT Easy cloning vector and the sequences of the genes were revealed. After that the B. halodurans C-125 xylanase gene was cloned into pET20b(+) expression vector, but there was no expression in B. halodurans C-125 xylanase gene. Because Geobacillus sp. TF16 xylanase gene can't transferred into pET20b(+) vector, the protein harvested directly from bacteria. The purification of TF16 xylanase has been performed by ammonium sulphate precipitation and ion-exchange column chromatography. Optimum pH, optimum temperature and kinetic parameters of the enzyme were determined. Optimum pH was 9.0, optimum temperature was 70 °C and Km, Vmax values were 6,86 ± 0,615 mg/ml, 720,24 ± 22,99 U/mg, respectively. Chimeric xylanase genes were constructed from B. halodurans C-125 and Geobacillus sp. TF16 genes with a method based on DNA shuffling. These chimeric genes were named as GeoInH2CTer, GeoInH2CTer2, GeoIntraH2Int3 and GeoIntraH2Int4. Chimeric genes were cloned into pET28a(+) expression vector. GeoIntraH2Int3 and GeoIntraH2Int4 were succesfully expressed in E. coli BL21 (DE3), but there was no expression for GeoInH2CTer and GeoInH2CTer2. Optimum temperature of GeoIntraH2Int3 and GeoIntraH2Int4 were 60 °C, 50-60 °C and optimum pH of them were 8,0 and 8,0-10,0, respectively

Benzer Tezler

  1. Tez No

    831650

    Controlled delivery of chalcone via biopolyester nanohybrid

    Biyopoliester nanohibrit ile kalkonun kontrollü salımı

    YASEMİN KAPTAN

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2022

    Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. FATOŞ YÜKSEL GÜVENİLİR

  2. Tez No

    101418

    Tatlı patatesten asit fosfataz enziminin kısmi saflaştırması ve kinetik özelliklerinin incelenmesi

    The Purification and the study of the kinetic properties of acid phosphatase enzyme obtained from sweet potatoes

    ENGİN AYKANAT

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2001

    Kimya Mühendisliğiİstanbul Teknik Üniversitesi

    DOÇ.DR. YÜKSEL AVCIBAŞI GÜVENİLİR

  3. Tez No

    897801

    Exploration of novel serine protease do-like HtrA from acigöl

    Acıgöl'den yeni serin proteaz do-like HtrA enziminin keşfi

    MERYEM MENEKŞE KILIÇ

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    Biyolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NEVİN GÜL KARAGÜLER

    PROF. DR. NURGÜL ÇELİK BALCI

  4. Tez No

    757469

    Üçlü faz sistemi ile B. licheniformis SO8'den lakkaz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu ve boyar madde dekolorizasyonunda kullanılması

    Purification and characterization of laccase from B. licheniformis SO8 by three-phase partitioning system and its application in decolorization of dye

    SEMİH YILDIRGAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    BiyoteknolojiAtatürk Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MELDA ŞİŞECİOĞLU

  5. Tez No

    778573

    Termofilik Bacillus licheniformis SO5'den α-amilazın manyetik alan destekli üçlü faz ayırma sistemi ile saflaştırılması ve karakterizasyonu

    Purification and characterization of α-amylase from thermophilic Bacillus licheniformis SO5 using magnetic field-assisted three phase partitioning

    ŞEYMA ARAS

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    BiyoteknolojiAtatürk Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MELDA ŞİŞECİOĞLU

Geri Dön