Geri Dön

Aeribacillus pallidus C10'dan alkalin proteaz enziminin saflaştırılması,karakterizasyonu ve biyoteknolojik uygulanabilirliği

Purification, characterization and investigation of biotechnological applications of alkaline protease enzyme from Aeribacillus pallidus C10

  1. Tez No: 376272
  2. Yazar: VİLDAN YILDIRIM
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. MELDA ŞİŞECİOĞLU
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Biyoteknoloji, Biochemistry, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2014
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Atatürk Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Biyoteknoloji Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 99

Özet

Bu çalışmada; termofilik bakteri olarak tanımlanan Aeribacillus pallidus C10'dan ekstra selüler alkalin proteaz enzimi saflaştırıldı ve karakterize edildi. Enzim amonyum sülfat çöktürmesi-diyaliz sonrasında DE52 anyon değişim kromotografisi ve ProbondTM afinite kromotografisi teknikleri ile sırasıyla %26,9 verimle 4,85 kat ve %19,56 verimle 17,32 kat saflaştırıldı. Enzimin molekül kütlesi SDS-PAGE ile yaklaşık 38,35 kDa olarak tayin edildi. Enzim için optimum pH ve sıcaklık sırasıyla 9 ve 60°C olarak belirlendi. Enzimin 20-80°C sıcaklıkları arasında 1 saat sonunda aktivitesinin %80'den fazlasını özellikle 60, 70 ve 80°C sıcaklıklarda kararlılığını büyük oranda koruduğu tespit edildi. A. pallidus C10'dan saflaştırılan proteaz enzimin aktivitesi üzerine metal iyonlarının etkisi incelendiğinde Mg+2, K+, Ca+2, Zn+2 ve Ag+ iyonları varlığında enzimin aktiviteyi artırdığı gözlenirken, Fe+2, Mn+2 ve Co+2 iyonları varlığında ise enzimin yüksek kararlılık sergilediği gözlendi. Enzimin oksidantlar, yüzey aktif maddeleri varlığında aktivite kaybettiği fakat %5 SDS varlığında enzimin aktivitesinde %16'lık bir artış olduğu belirlendi. Organik çözücüler varlığında enzimin aktivitesinin %70'den fazlasını koruduğu tespit edildi. Enzim, en yüksek aktiviteyi kazein subsratı için gösterdi. Enzimin serin proteaz inhibitörü PMSF ile tamamen inhibe olduğu belirlendi. EDTA varlığında ise enzimin aktivitesini koruduğu gözlemlendi. Bu enzim için KM ve Vmax değerleri sırasıyla 0,197 mg/ml ve 7,29 µmol.ml-1.dk-1 olarak hesaplandı.

Özet (Çeviri)

In this study, an extracellular alkaline protease was purified and characterized by Aeribacillus pallidus C10 identified as thermophilic bacteria. After ammoniumsulfate precipitation-dialysis, protease was purified by DE52 anion-exchange chromatography and ProbondTM affinity chromatography with 26,9% a yield and 4,85 fold, with 19,56% a yield and 17,32 fold respectively. The molecular weight of purified enzyme determined by using SDS-PAGE was approximately 38,35 kDa. The optimum pH and temperature for enzyme was 9 and 60°C respectively. The enzyme activity remained more than 80% of its orginal activity for 1 h between 20-80°C and was stable especially 60, 70 and 80°C. The effects of various metal ions (Mg2+, Mn2+, K+, Ag+ , Fe2+, Zn2+, Ca2+) on the protease enzyme activity were examined. This results showed that enzyme activity was increased in the presence of Mg2+, K+, Ca2+, Zn2+ ve Ag+ ions and it was maintain stability in the presence of Fe+2, Mn+2 ve Co+2 . The enzyme wasn't stable in the presence of surfactants and oxidizing agent but in the presence of 5% SDS the enzyme activity was increased %16. The enzyme activity was found to retain more than %70 in the presence of organic solvents. The protease enzyme showed highest activity together with casein. The protease was almost completely inhibited by the serine protease inhibitor PMSF. The enzyme was preserve its activity in the presence of EDTA. The kinetic parameters, Vmax and KM of the purified protease were determined by using Lineweaver-Burk plot 0,197 mg/ml and 7,29 µmol.ml-1.dk-1 respectively.

Benzer Tezler

  1. Aeribacillus pallidus AC6'da yüksek seviyede ekspres edilen flagellin geninin (hag) klonlanması, promotor yapısı, flagellar spesifik transkripsiyon faktörünün (sigma-d) izolasyonu ve saflaştırılması

    Cloning and promoter architecture of flagellin gene (hag) expressed at high-level and isolation and purification flagellar-specific transcription factor (?d) in Aeribacillus pallidus AC6

    ELİF SEVİM

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    BiyolojiKaradeniz Teknik Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ALİ OSMAN BELDÜZ

  2. Aeribacillus pallidus (P26) bakterisinden peroksidaz enziminin saflaştırılması ve kinetiğinin araştırılması

    Purification and characterization of peroxidase from Aeribacillus pallidus (P26)

    PARHAM TASLİMİ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    MikrobiyolojiAtatürk Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AHMET ADIGÜZEL

  3. Aeribacillus pallidus PI8 suşuna ait proteaz enzim genin klonlanmasi ve protein üretimi

    Cloning and protein production of protease enzyme from Aeribacillus pallidus PI8 strain

    MAHDIYEH SAADATI

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    GenetikAtatürk Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ORHAN ERDOĞAN

  4. Yüksek miktarda biyofilm oluşturan termofilik basillerin çeşitli yüzeylerdeki biyofilm yapılarının analizi ve biyofilmin giderimi ile biyokorozyonun önlenmesi

    Analyses of biofilm structures on various surfaces produced by high amounts of biofilm-forming thermophilic bacilli and prevention of biocorrosion with biofilm removal

    TUĞBA KILIÇ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    BiyolojiAnkara Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ARZU ÇÖLERİ CİHAN

  5. Bacillus sp. suşlarından izole edilen asidik, alkali, termostabil amilaz ve pullulanaz enzimlerinin üretimi, karakterizasyonu ve biyoteknolojik kullanım olanaklarının araştırılması

    The investigation of the production, characterization and biotechnological usage possibilities of the acidic, alkaline, thermostable amylase and pullulanase enzymes isolated from Bacillus sp.

    NİHAN ARABACI

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    BiyolojiÇukurova Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. BURHAN ARIKAN