Geri Dön

Glucose-based feeding strategy development in recombinant human growth hormone production by Pichia pastoris for semi-batch bioreactor operation

Pichia pastoris ile rekombinant insan büyüme hormonu üretiminde yarı-kesikli biyoreaktör işletimi için glukoz temelli besleme stratejisi geliştirilmesi

PDF İndir

  1. Tez No: 385074
  2. Yazar: ABDULLAH KESKİN
  3. Danışmanlar: PROF. DR. PINAR ÇALIK, PROF. DR. HASAN TUNÇER ÖZDAMAR
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2014
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Mühendisliği Bölümü
  12. Bilim Dalı: Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 148

Özet

Bu çalışmada amaç Pichia pastoris Mut+ hücrelerinin gliseraldehit-3-fosfat dehidrogenaz geni (GAP) bölgesine entegre edilmiş pGAPZαA::hGH taşıyan konak hücre ile rekombinant insan büyüme hormonu (rhGH) üretimini artıracak yarı-kesikli biyoreaktör işletimi için besleme stratejisi geliştirilmesidir. Sekiz yarı-kesikli biyoreaktör işletim stratejisi tasarlanmıştır. Tasarlanan tüm stratejilerin kesikli fazı aynıdır; gliserol tek karbon kaynağı olarak kullanılmıştır. Proseslerin yarı-kesikli fazlarında belirlenen spesifik çoğalma hızları için önceden-hesaplanan üstel- ve sabit- debide seçilen substratların sürekli beslendiği besleme stratejileriyle, özgül substrat tüketim hızı temelli besleme stratejileri tasarlanmış; ve ek olarak da bu stratejilerin kombinasyonlarından oluşan bir strateji tasarlanmıştır. Besleme stratejilerinin tasarımında üç farklı ön-görülmüş özgül çoğalma hızı, μ0=0.10, 0.15, ve 0.175 st-1; iki farklı sabit akış hızı, Q(t≥15 st) =12 ml st -1 veya Q(t≥11 st) = 24 ml st -1, ve özgül subtrat tüketim hızı, qS=0.05 g g-1 st -1, kullanılmıştır. Bunlara ek olarak, karbon kaynağı etkisini incelemek için glukoz ve ön-işlem görmüş melas kullanılmıştır. En yüksek rhGH derişimi t=19 st'te CrhGH = 508 mg L-1 olarak μ0=0.15 st-1 için önceden-hesaplanan üstel beslemeli yarı-kesikli işletim stratejisinde elde edilmiştir; t=19 st'te hücre derişimi CX =65.4 g L-1 değerinde toplam substrat tüketimi üzerinden ürün ve hücre verimi Y'P/S = 1.9 mg g-1 and Y'X/S=0.22 g g-1 olarak bulunmuştur.

Özet (Çeviri)

The aim of this study was to develop an effective feeding strategy to enhance recombinant human growth hormone (rhGH) production by Pichia pastoris Mut+ strain harboring pGAPZαA::hGH which is integrated to glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase gene (GAP) locus of P. pastoris. In this context, eight semi-batch bioreactor experiments were conducted at pilot-scale; their batch phase was same in which glycerol was used as the sole carbon source. For semi-batch operation phase, eight feeding strategies were designed using exponential substrate feeding, constant substrate feeding, specific substrate consumption rate based substrate feeding, and combination of these feeding modes. The feeding strategies were designed by using three different pre-determined specific growth rates, μ0=0.10, 0.15, and 0.175 h-1, two constant volumetric flow rates of glucose, Q(t≥15 h) =12 ml h-1 or Q(t≥11 h) =24 ml h-1, and one constant specific glucose consumption rate, qS=0.05 g g-1 h-1. Further, to investigate the effects of carbon sources, glucose and pre-treated molasses were used. The best feeding strategy was the one conducted based on exponential glucose feeding with the pre-determined specific growth rate of μ0= 0.15 h-1 wherein the highest rhGH was attained as CrhGH = 508 mg L-1 at t=19 h and the cell concentration was CX =65.4 g L-1. The overall product and cell yield on total substrate were obtained as Y'P/S = 1.9 mg g-1 and Y'X/S=0.22 g g-1, respectively.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    442148

    Defined and complex medium based feeding strategy development for recombinant human growth hormone production by P. pastoris under gap promoter

    Pichia pastoris ile rekombinant insan büyüme hormonu üretimi için tanımlı ve kompleks ortam temelli besleme stratejisi geliştirilmesi

    BEBETA HOXHA

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2016

    Kimya MühendisliğiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. PINAR ÇALIK

    PROF. DR. TUNÇER H.ÖZDAMAR

  2. Tez No

    368875

    Semi-defined medium based feeding strategy development for human growth hormone production by recombinant Bacillus subtilis

    Rekombinant Bacillus subtilis ile insan büyüme hormonu üretimi için yarı-tanımlı ortam temelli besleme stratejisi geliştirilmesi

    SİBEL ÖZTÜRK

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2014

    BiyomühendislikOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. PINAR ÇALIK

    PROF. DR. HASAN TUNÇER ÖZDAMAR

  3. Tez No

    341088

    Human growth hormone production by metabolically engineered B. subtilis: Feeding strategy development

    Metabolik mühendislik B. subtilis ile insan büyüme hormonu üretimi: Besleme stratejisi geliştirilmesi

    BURCU GÖKBUDAK

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2013

    BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. PINAR ÇALIK

    PROF. DR. HASAN TUNÇER ÖZDAMAR

  4. Tez No

    305083

    Bioprocess development for thermostable glucose isomerase production

    Isıya dayanıklı glukoz izomeraz üretimi için biyoproses geliştirilmesi

    VAHİDEH ANGARDİ

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2011

    BiyokimyaOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Bölümü

    PROF. DR. PINAR ÇALIK

  5. Tez No

    177290

    Feeding strategy development for benzaldehyde lyase production by recombinant Escherichia coli BL21

    Rekombinant Escherichia coli BL21 ile benzaldehit liyaz üretimi için besleme stratejisi geliştirilmesi

    HANDE LEVENT

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2008

    BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Bölümü

    PROF. DR. PINAR ÇALIK

Geri Dön