Pichia pastoris mayası ile rekombinant ksilanaz enzim üretiminin optimizasyonu
Pichia pastoris mayasi ile rekombinant ksilanaz enzim üretiminin optimizasyonu
- Tez No: 389666
- Danışmanlar: PROF. DR. MEHMET İNAN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Gıda Mühendisliği, Food Engineering
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2015
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Akdeniz Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 56
Özet
Son yıllarda, ksilanazların çok farklı endüstüriyel alanlarda kullanılmasının yanında, hayvan yemlerinin formülasyonuna giren önemli bir bileşim unsuru olduğu görülmektedir. Günümüzde endüstriyel kullanımı olan enzim preparatları için en önemli konu enzim üretim maliyetinin ve buna bağlı olarak da prosese girdi maliyetinin düşürülmesidir. Ksilanazın da aralarında bulunduğu alfa amilaz, selülaz, pektinaz, proteazlar, lipazlar gibi enzimlerin üretimi üzerine sürdürülen araştırmalar, uygun bir üretici mikroorganizmanın bulunması ve aynı zamanda ucuz ve bol bulunabilen kaynaklardan oluşan bir üretim ortamı kompozisyonun oluşturulması yönünde devam etmektedir. Enzim üretim prosesine ilişkin diğer problemler önemli ölçüde aşılmıştır. Ksilanaz enzimi bakteri, maya ve fungus grubunda yer alan çeşitli mikroorganizmalar tarafından üretilebilmektedir. Bu çalışma üç bölümden oluşmaktadır. İlk bölümde ksilanaz enziminin rekombinant ve ekstraselüler olarak dört farklı sinyal protein, HSA(İnsan serum albumin), PIR(Protein with Internal Repeats), PHO(Asit fosfotaz) ve α-mating faktör, kullanılarak P. pastoris te üretimi yapılmıştır. Bu bölüm sonucunda hepsinde üretim görülmüştür. İkinci bölümde üretim verimler karşılaştırılmış ve verimin en yüksek olduğu sinyal protein belirlenmiştir. Bu bölüm sonucunda, HSA 4147 U/ml, PIR 5366 U/ml, PHO 4252 U/ml ve α-mating faktör 4247 U/ml enzim ürettiği belirlenmiştir. En yüksek üretimin PIR sinyal proteininde olduğu görülmüştür. Üçüncü bölümde ise üretilen enzim saflaştırılmış ve enzimin optimum çalışma sıcaklığı ve pH sı belirlenmiştir. Sonuç olarak, Pichia pastoris mayası ile ksilanaz üretimi gerçekleştirilmiş ve en uygun sekresyon sinyalinin PIR olduğu belirlenmiştir. Ksilanaz enziminin sonundaki polihistidin kuyruğu uzaklaştırıldığında fırıncılık ürünlerinde ve hayvan yemlerinde kullanılma imkanı bulunmaktadır. ANAHTAR KELİMELER: Pichia pastoris, ksilanaz, HSA(İnsan serum albumin), PIR(Protein with Internal Repeats), PHO(Asit fosfotaz), α-mating faktör
Özet (Çeviri)
In recent years, xylanases are important ingredient of animal feed formulations in addition to other industrial applications. The most important issue for use of enzymes for industrial applications is reduction of production cost and the cost of goods. Studies are ongoing to determine the best production host and cheap media compositions for production of enzymes including xylanases, alpha amylase, cellulase, pectinase, proteases and lipaes etc. The other problems related to the enzyme production process relatively solved. Xylanase are produced in bacteria, yeast and by various microorganisms. This study consists of three parts. In the first part, four secretion signal sequences were evaluated for extracellular production of Aspergillusniger xylanase (XylB) in Pichia pastoris. These sequences were namely; Saccharomyces cerevisiae α -matingfactor (α -MF), Human Serum Albumin (HSA), P. pastoris Acid Phosphatase (PHO1) and P. pastoris Protein with Internal Repeats (PIR1) secretion signals. Xylanase production was achieved with all constructs. In the second part of the study, the production efficiency of xylanse was compared with four leader sequences and best signal for secretion was determined. Xylanase enzyme activities for single-copy clones with α-MF, HSA, PHO1 and PIR1 as secretion sequence were 4247, 4147, 4252 and 5366 U/mL, respectively. The best production signal was determined to be PIR. The last part of the study consist of purification of the enzyme product and determination of the optimum temperature and pH. Consequently, xylanase production in Pichia pastoris was achieved and PIR secretion signal was determined to be the best secretion signal among the tested signals. Xylanase produced in Pichia pastoris can be utilized in animal feed and bakery products after removing the His-tag sequence. KEYWORDS: Pichia pastoris, xylanase, HSA(Human serum albumin), PIR(Protein with Internal Repeats), PHO(acid phosphatase), α-mating factor
Benzer Tezler
- Biyodizel atığı ham gliserolden rekombinant Pichia pastoris mayası ile laktik asit üretimi
Lactic acid production from biodiesel by-product crude glycerol by recombinant Pichia pastoris
LENA MAHMOUDI AZAR
Doktora
Türkçe
2017
BiyomühendislikHacettepe ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ERHAN BİŞKİN
- Pichia pastoris mayasında GAP promotoru altında deve kimozini ekspresyonu
Production of recombinant camel chymosin enzyme with GAP promotor in Pichia pastoris
ÖZGÜL GÜZEL
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
Gıda MühendisliğiAkdeniz ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET İNAN
- Bioprocess development for therapeutical protein production
Terapötik protein üretimi için biyoproses geliştirilmesi
EDA ÇELİK AKDUR
Doktora
İngilizce
2008
Kimya MühendisliğiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiKimya Mühendisliği Bölümü
PROF. DR. PINAR ÇALIK
PROF. DR. STEPHEN G. OLİVER
- Pichia pastoris'te rekombinant kimozin üretiminin araştırılması
Investigation of recombinant chymosin production in Pichia pastoris
FATMA ERSÖZ
Doktora
Türkçe
2022
BiyoteknolojiAkdeniz ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET İNAN
- Effects of metabolic engineering of ethanol utilization pathway in Pichia pastoris on recombinant protein production and transcription levels in central metabolism
Pichia pastoris'in etanol tüketim yolunda yapılan metabolik mühendisliğinin rekombinant protein üretimi ve merkezi metabolizmadaki transkripsiyon düzeylerine etkisi
İDİL DAYANKAÇ
Yüksek Lisans
İngilizce
2021
BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. PINAR ÇALIK
PROF. DR. HASAN TUNÇER ÖZDAMAR