Yaygın fiğ (Vicia sativa L.) çeşitlerinde mikroçoğaltım ve Agrobacterium tumefaciens aracılığıyla Cry1Ac, Cry2A ve bar genlerinin aktarılması
Micropropagation of common vetch (Vicia sativa L.) varieties and Agrobacterium tumefaciens mediated genetic transformation using Cry1Ac, Cry2A and bar genes
- Tez No: 392630
- Danışmanlar: PROF. DR. HAYRETTİN KENDİR
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoloji, Biyoteknoloji, Ziraat, Biology, Biotechnology, Agriculture
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2015
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ankara Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tarla Bitkileri Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 213
Özet
Protein, mineral maddeler ve vitaminler bakımından oldukça zengin olan yaygın fiğ bitkisi (Vicia sativa L.)'de rejenerasyon ve genetik transformasyon büyük bir sorun olarak görülmektedir. Bu tez kapsamında yaygın fiğin Cumhuriyet 99, Karaelçi, Kubilay 82 ve Selçuk 99 çeşitlerinde sürgün rejenerasyonu ve A. tumefaciens aracılığıyla transgenik bitki elde edilmesi hedeflenmiştir. Yaygın fiğin dört çeşidinde yüzey sterilizasyonda farklı oranlarda çamaşır suyu kullanılmıştır. Daha sonra sürgün rejenerasyon çalışmalarında farklı oranlarda BAP + NAA içeren MS ortamında, yarım ve tam kotiledon boğum eksplantı kullanılarak rejenerasyon sistemi geliştirilmiştir. Adaksial ve abaksial şekilde kültüre alınmış kotiledon eksplantları arasında sürgün rejenersyonun bakımından adaksial şekilde kültüre alınmasının daha uygun olduğu görülmüştür. Her dört yaygın fiğ çeşidinde, BAP, SA, GA3 ve BAP + GA3'nın tohumlara priming olarak uygulanmasının sürgün oluşumuna olumlu etkileri izlenmiştir. Olgunlaşmamış embriyo eksplantlarında, farklı oranlarda BAP + NAA içeren MS ortamlarında da sürgün rejenerasyonu üzerine etkileri incelenmiştir. Yukarıda belirtilmiş tüm denemelerden elde edilen sürgünler, 0.75 µg/ml IBA içeren MS ortamda köklendirilmiş ve dış koşullara adaptasyonda başarı sağlanmıştır. A. tumefaciens'in GV2260 GUS INT, LBA4404 pTF101 AopR1 Cry1Ac bar, LBA4404 Cry2A, GNA, C58C1 pGreen AopR1 Cry1Ac bar ve C58C1 pGreen 35S Cry1Ac bar hatlarıyla embriyo, hipokotil ve koltuk altı meristem eksplantı kullanarak Selçuk 99 ve Kubilay 82 çeşitlerine gen aktarım yapılmış, T0 ve T1 generasyonuna kadar tohum ve transgenik bitkiler elde edilmiştir. Gen aktarım çalışmasından elde edilen sonuçlar, GUS tesi, PCR testi ve biyoassay ile de doğrulanmıştır.
Özet (Çeviri)
Protein, minerals and vitamins rich common vetch (Vicia sativa L.), is very difficult to regenerate and transform genetically. This thesis aimed to develop protocols for shoot regeneration and Agrobacterium tumefaciens mediated transformation of the plants using common vetch cultivars Cumhuriyet 99, Karaelçi, Kubilay 82 and Selçuk 99. These cultivars were surface sterilized using different concentrations of commercial bleach. Thereafter, a regeneration system from ½ and fully developed cotyledon node explants was developed using different concentrations of BAP + NAA in MS medium. Comparing shoot regenration system on adaxially and abaxially cultured cotyledon explants on different concentrations of BAP in MS medium, it seemed as adaxillay cultured explants were more productive. Priming of seeds with different concentrations of BAP, SA, GA3 and BAP + GA3 showed positve effects on regeneration. Similarly, different concentrations of BAP + NAA were used to regenerate immature embryo explants positively. Shoots regenerated on all of the above mentioned experiments were rooted on MS medium containing 0.75 µg/ml IBA and acclimetised to external environmental conditions. Successful genetic transformation was after treatment of embryo, hypocotyl and stem node explants from common vetch cv. Selçuk 99 and the Kubilay 82 with GV2260 GUS INT, LBA4404 pTF101 AopR1 Cry1Ac bar, LBA4404 Cry2A , GNA, C58C1 pGreen AopR1 Cry1Ac, bar and C58C1 pGreen 35S Cry1Ac bar lines of A. tumefaciens. Successfully transformed plants were used to obtain T0 and T1 generations, that floered and set seeds. The results were confirmed using GUS test, PCR test and bioassay.
Benzer Tezler
- Yaygın fiğ (Vicia sativa L.) çeşitlerinde gama ışınlamasının M1 ve M2 dölünde bazı bitkisel özelliklere etkisi üzerine bir araştırma
Study on some characteristics of M1 and M2 plants of two common vetch (Vicia sativa L.) cultivars obtained by the application of different doses of gamma irradiation
HÜSEYİN MUTLU
Yüksek Lisans
Türkçe
2011
ZiraatÇukurova ÜniversitesiTarla Bitkileri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HASAN GÜLCAN
- Farklı bakla hasat olgunluk dönemlerinin yaygın fiğ (Vicia sativa L.) tohumlarının tohumluk kalitesi üzerine etkileri
Effects of different pod maturity stages on seed quality of common vetch (Vicia sativa L.)
YASEMİN GÖK
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
ZiraatKahramanmaraş Sütçü İmam ÜniversitesiTarla Bitkileri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İSKENDER TİRYAKİ
- Yazlık ekilen bazı yaygın fiğ çeşitlerinin verim ve verim unsurlarının belirlenmesi
Determination of yield and yield components of some common vetch cultivars in summer sowing
FATMA ÇİĞDEM DÜNDAR
Yüksek Lisans
Türkçe
2010
ZiraatNamık Kemal ÜniversitesiTarla Bitkileri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ADNAN ORAK
- Isparta koşullarında yaygın fiğ çeşitlerinin ot ve tohum verimleri ile verim öğelerinin belirlenmesi
Determination of forage and seed yield with yield components of common vetch cultivars under Isparta conditions
GÖKHAN GÖRGÜLÜ
Yüksek Lisans
Türkçe
2010
ZiraatSüleyman Demirel ÜniversitesiTarla Bitkileri Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SEBAHATTİN ALBAYRAK
- Bitki aktivatörünün bazı yaygın fiğ çeşitlerinde (Vicia sativa L.) farklı uygulamalarının verim ve verim unsurlarına etkisi
The effect of plant activators in certain common vetch (Vicia sativa L.) varieties on yield and yield components in different applications
FERİDE ATEŞ
Yüksek Lisans
Türkçe
2015
ZiraatHarran ÜniversitesiTarla Bitkileri Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. ABDULKADİR MUSTAFA OKANT