Geri Dön

The effect of inducible costimulatory ligand (İCOS-LG) expressing myeloid leukemia cells on helper t lymphocyte activation and exhaustion

Uyarılabilen ko-stimülatör ligand (ICOS-LG) eksprese eden akut miyeloid lösemi hücrelerinin t lenfosit aktivasyonuna ve yorulmasına etkisi

PDF İndir

  1. Tez No: 396468
  2. Yazar: DİDEM ÖZKAZANÇ
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. GÜNEŞ ESENDAĞLI
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2015
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Temel Onkoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 147

Özet

T hücre yorulması sürekli antijen uyarımı etkisinde kademeli olarak gelişen sitokin üretiminin kaybı, çoğalma kapasitesinde azalma ve tekrar aktivasyona direnç ile tanımlanmıştır. Yardımcı T lenfosit (Th) yanıtlarının, AML hücreleri tarafından uyarabilmesine rağmen, anti-lösemik etkisi sınırlıdır. Bu çalışmada, AML kaynaklı kostimülasyon sinyallerinin Th yorulmasına olan etkilerini incelemek amacıyla ilk kez bir in vitro model geliştirilmiştir. Öncelikle AML hücrelerinin (HL-60, THP-1, U937, Kasumi-1, KG-1) ve CD14+ monositlerin normal fizyolojik ve proinflamatuar koşullardaki ICOS-LG ifade düzeyleri ve zamana bağlı değişimleri belirlendi. Daha sonra, CD4+ T lenfositlerin AML hücre hatları veya monositler ile farklı hücre oranları ve farklı konsantrasyonlarda anti-CD3 (aCD3) uyarımı ile ko-kültürleri gerçekleştirildi. aCD3 ve kültür ortamı düzenli olarak tazelendi. Th hücrelerinin CD25, CD127, FoxP3, CD69, PD-L1, PD-1, CTLA-4, ICOS, TIM-3, LAG3, CD38, CD154, CCR7 ve HLA-DR ifade düzeyleri, çoğalma kapasiteleri ve canlılıkları akım sitometri ile saptandı. Kostimülasyon sinyallerinin T hücre yorulmasına olan etkileri ICOS-LG, PD-L1/PD-L2 ve CD80/CD86 bloklayıcı ajanlar ile test edildi. ELISA ile IL-2, IL-10, IL-4, TGF-, IFN-γ ve TNF-α düzeyleri belirlendi. Fonksiyonel yorulmanın test edilmesi için yorulmuş (TIM-3mo/hi) ve yorulmamış (TIM-3-/low) Th alt-popülasyonları zenginleştirildi ve tekrar uyarıldı. AML:Th ko-kültürlerinde Th hücreleri üzerinde LAG3, TIM-3, PD-1, CTLA-4 moleküllerin belirgin artışı saptandı. Monosit ko-kültürlerde ise Th aktivasyonu ve proliferasyonu AML hücreleri ile elde edilen sonuçlara benzer iken yorulma belirteçlerinin düzeyi anlamlı olarak düşük kaldı. Bu yorulmuş hücreler düşük düzeylerde IL-2, IFN-γ ve TNF-α üretti. Bu hücrelerin yorulmaları önceki çoğalma düzeylerinden bağımsızdı. AML-kaynaklı kostimülatör sinyallerin aCD3 uyarımına kıyasla Th yorulması için daha kritik olduğu görüldü. Yorulma dışarıdan verilen IL-2 ile geri döndürülebiliyordu. Bu bulgular, AML hücrelerinin kostimülasyon aracılığı ile Th yorulmasına neden olduğunu göstermekte ve yeni bir immün kaçış mekanizmasına işaret etmektedir.

Özet (Çeviri)

T cell exhaustion is characterized by progressive loss of cytokine production, decreased proliferation and resistance to reactivation especially upon continuous antigen stimulation. Despite being potent stimulators of helper T (Th) lymphocytes, AML cells employ intriguing mechanisms to limit anti-tumor responses. Thus, this study proposes an in vitro co-stimulation dependent Th cell exhaustion model that may represent a novel immune escape mechanism in AML. Firstly, ICOS-LG expression kinetics were evaluated on AML cell lines of different maturation status (HL-60, THP-1, U937, Kasumi-1, KG-1) in comparison to CD14+ monocytes by flow cytometry under steady state and pro-inflammatory conditions. Then, CD4+ T cells were co-cultured with AML cells or monocytes at different ratios and stimulated with various anti-CD3 concentrations. Media and aCD3 was regularly refreshed in extended culture periods. CD25, CD127, FoxP3, CD69, PD-L1, PD-1, CTLA-4, ICOS, TIM-3, LAG3, CD38, CD154, CCR7, HLA-DR expression, together with proliferation and viability were evaluated by flow cytometry. Assays were also performed under ICOS-LG, PD-L1/PD-L2 and CD80/CD86 blockade. IL-2, IL-10, IL-4, TGF-, IFN-γ and TNF-α levels were measured by ELISA. Exhausted (TIM-3mo/hi) and non-exhausted Th cells (TIM-3-/low) were enriched and re-stimulated for functional exhaustion assays. In the co-cultures, Th cells possessed high levels of LAG3, TIM-3, PD-1, ICOS and CTLA-4. Th cells' proliferation and activation with AML cells or monocytes were similar; however, exhaustion was significantly higher in AML co-cultures. These exhausted cells produced lower IL-2, IFN-γ and TNF-α. Exhaustion was independent of Th cells' initial proliferative activity. Co-stimulatory signals derived from AML cells were more critical than aCD3 stimulation in Th cell exhaustion. Exhaustion could be reversed by exogenous IL-2. Our findings indicate a novel immune escape mechanism employed by AML cells that can induce a co-stimulation dependent Th cell exhaustion.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    825880

    Blocking the costimulatory pathwaysin t cell activation - to overcome anergy

    Kostimulate patwayleri engellemekt hücresinde aktivasyon - anerjiyi aşmak için

    HATİCE GÜNGÖR

    Tıpta Yan Dal Uzmanlık

    İngilizce

    İngilizce

    2010

    OnkolojiImperial College London

    İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ANDREW GEORGE

  2. Tez No

    520305

    Molecular genetic characterization of nod-like receptor 11 (NLRP11) in the regulation of adaptive immune responses

    Edinsel bağışıklık cevabının düzenlenmesinde nod-benzeri reseptör 11 (NLRP11)'in moleküler genetik karakterizasyonu

    İREM ÖZEL

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2018

    Biyolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyokimya ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. CEREN ÇIRACI

  3. Tez No

    401220

    SA-4-1BBL as a platform to develop adjuvant systems for prophylactic and therapeutic vaccines

    Başlık çevirisi yok

    GÜNEŞ DİNÇ

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2014

    MikrobiyolojiUniversity of Louisville

    DR. HAVAL SHIRWAN

  4. Tez No

    421249

    The effect of Helicobacter felis on macrophage polarization

    Helicobacter felis'in makrofaj polarizasyonu üzerine etkisi

    ASLI KORKMAZ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2015

    Allerji ve İmmünolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AYÇA SAYI YAZGAN

  5. Tez No

    535802

    Fare lokal artrit modelinde yangı sırasında indüklenebilen indolamin-2,3 dioksijenaz (İDO) gen aktarımının etkisi

    The effect of inducible indolamine-2,3 dioxygenase (İDO) gene transfer during inflammation in local mouse arthritis model

    AYŞE ÖZDEN SOYDAŞ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    Allerji ve İmmünolojiGazi Üniversitesi

    İmmünoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. VEDAT BULUT

Geri Dön