Isolation and characterization of L-asparaginase of Bacillus sp. isolated from the riverside of Seyhan
Seyhan nehri kıyısından izole edilen Bacillus sp.'den L-asparajinaz izolasyonu ve karakterizasyonu
- Tez No: 424234
- Danışmanlar: PROF. DR. HATİCE KORKMAZ GÜVENMEZ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2016
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Çukurova Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 86
Özet
L-asparajinaz terapötik özelliğiyle, tümör hücrelerinin özellikle akut lenfoblastik lösemi tedavilerinde kullanılabilir bir anti-tümör ajan olarak büyük ilgi çekmektedir. Ayrıca, L-asparajinaz nişastalı gıdalarda kanserojen olan akrilamitin gıda işleme yardımcısı olarak, seviyesini önemli ölçüde azaltabilmektedir. Bu çalışmada, Adana'da Seyhan nehri kıyısından alınmış toprak örneğinden 40 adet Bacillus suşu izole edilmiştir. Suşların L-asparajinaz üretim yeteneklerini saptamak amacıyla L-asparajin içeren modifiye M9 besiyeri kullanılmıştır. Enzim üretme yeteneğinde olan 4 suş saptanmış, bunlardan Z12 nolu suş hem kalitatif hem de kantitatif deneylerde en yüksek aktivite göstermiştir. Z12 nolu suş mikroskobik (Gram +, endospor + basil) ve biyokimyasal testler (VITEK-2, % 88) ile Bacillus olarak tanımlanmıştır. Optimum enzim üretimi; 0.75% L-asparajin ihtiva eden besiyerinde (pH 7.0) 5 gün ve 40°C'de gerçekleştirilmiştir. L-asparajinaz geniş pH ve sıcaklık aralığında aktivite göstermesine rağmen optimum aktivite pH 8.0 ve 40oC'de gözlenmiştir. Enzim farklı tamponlar (pH 7.0-12.0) ile 60 dk muamele edildiğinde pH 7.0'de aktivitenin %100 korunduğu gözlenmiştir. Değişen sıcaklılarda (40-100oC) 60 dk ön inkübasyondan sonra enzim 50oC'de aktivitesini %100 korumasına rağmen, 70oC'nin üzerindeki sıcaklıklarda aktivitesinin %50'sini kaybetmiştir. Üre ve EDTA enzim aktivitesini yaklaşık 50%'e kadar azaltmış, ancak, MgCl2 enzim aktivitesini %20 düzeyinde arttırmıştır. Zymogram ve SDS-PAGE analiziyle enzimin 128 kDa boyutunda tek bant olduğu gözlenmiştir. Sonuçlara göre, doğal bir izolat olan Bacillus Z12 suşu L-asparajinaz üreticisi olarak endüstriyel amaçlı kullanılabilir.
Özet (Çeviri)
The therapeutic enzyme L-asparaginase has received great attention as an antitumor agent for its treatment of tumor cells, particularly in acute lymphoblastic leukemia. In addition, as a food processing aid, L-asparaginases can significantly reduce the level of the carcinogen acrylamide in starchy foods. In this study, 40 Bacillus strains were isolated from the soil of the Seyhan riverside in Adana. Modified M9 medium containing L-asparagine as a substrate was used in order to evaluate the strain's L-asparaginase producing potential. 4 strains were determined as enzyme producing strains and among them, isolate No. Z12 showed the greatest activity in both qualitative and quantitative experiments. Isolate No. Z12 was identified as Bacillus sp. by microscopic (Gram +, endospore +, bacil) and biochemical tests (VITEK-2, 88%). The optimal enzyme production was carried out in a medium containing 0.75% L-asparagine as a substrate (pH 7.0) at 40°C for 5 days. Although L-asparaginase showed the activity over a wide range of pH values and temperature, optimum activity was observed at pH 8.0 at 40oC. When the enzyme was treated with different buffers (pH 7.0-12.0) for 60 min, it was observed that the activity was 100% preserved at pH 7.0. After pre-incubating the enzyme at different temperatures (40oC-100oC) for 60 min, the enzyme was 100% stable at 50oC, whereas the enzyme lost 50% of its activity in temperatures over 70oC. Urea and EDTA decreased the enzyme activity up to approximately 50%, however, MgCl2 increased the enzyme activity up to 20%. Using Zymogram and SDS-PAGE analyses, a single band was observed for the enzyme with the molecular weight of 128 kDa. According to the results, the native Bacillus Z12 strain can be used as a producer of L-asparaginase with industrial purposes.
Benzer Tezler
- L-asparaginaz enzimi üreten mikroorganizmaların izolasyonu ve karakterizasyonu
Isolation and characterization of microorganisms producing l-asparaginase enzyme
EMİNE GÖKÇE
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
BiyoteknolojiAtatürk ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ÖMER FARUK ALGUR
- Van Gölü'nün farklı bölgelerinden toplanan su ve sediment örneklerinden L-asparaginaz ve ürikaz enzimi üreten alkalofilik bakterilerin izolasyonu ve karakterizasyonu
Isolation and characterization of alkalophilic bacteria producing L-asparaginase and uricase enzyme from water and sediment samples collected from different regions of Lake Van
FİRDEVS ESEN
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
BiyolojiVan Yüzüncü Yıl ÜniversitesiGenel Biyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. ERDAL ÖĞÜN
- Antikanserojenik l-asparaginazın farklı gram-negatif bakterilerde üretimi, kimyasal karakterizasyonu ve in vitro uygulaması
Production, chemical characterization and in vitro application of anti-cancerogenic l-asparaginase from different gram-negative bacteria
BURHAN ATEŞ
- Isolation and characterization of a novel tyrosinase enzyme from native bacterial straine, production of the enzyme by cloning, characterization of the recombinant enzyme and analysis of its biotechnological applications such as production of l-dopa and melanin
Doğal bakteri suşlarından tirozinaz enzim izolasyonu, karakterizasyonu, üretici genin klonlanması, rekombinant enzimin karakterizasyonu ve l-dopa ve melanin üretimi gibi biyoteknolojide kullanılabilirliği
EBRAHİM VALİPOUR
Doktora
İngilizce
2015
BiyolojiÇukurova ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BURHAN ARIKAN
- Isolation and characterization of the gene encoding d-lactate dehydrogenase enzyme from bacteroides fragilis that is known to be localized in colon cancer tissues
Kolon kanseri dokularında yerleştiği bilinen bacteroıdes fragılıs in d-laktat dehidrogenaz enzimini kodlayan genin izolasyonu ve karakterizasyonu
ZEYNEP BÜŞRA BOLAT
Yüksek Lisans
İngilizce
2013
BiyokimyaYıldız Teknik ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. DİLEK TURGUT BALIK