Geri Dön

NonO/p54nrb promotorunun klonlanması ve fonksiyonel analizi

Cloning of the human NonO/p54nrb promoter and functional analysis

  1. Tez No: 432795
  2. Yazar: SEVGİ BAYSAL
  3. Danışmanlar: YRD. DOÇ. SÜMEYYE AYDOGAN TÜRKOĞLU, PROF. DR. FERAY KÖÇKAR
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Genetik, Biology, Genetics
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2016
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Balıkesir Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 136

Özet

NonO/p54nrb (Non-POU domain içeren octamer bağlanma protein), insanlarda NONO geni olarak kodlanan bir proteindir ve SFPQ, SPI1 ve androjen reseptörleri ile etkileşimi gösterilmiştir. Son zamanlarda NonO/p54nrb'nin paraspeckles olarak adlandırılan yeni bir nükleer domainin bileşeni olduğu belirtilmiştir. Paraspeckles memeli hücrelerinin interkromatin bölgesinde bulunan alt nükleer gövdelerin nispeten yeni bir sınıfıdır. Böylece paraspeckles ve onun bileşenleri farklılaşma, viral enfeksiyon ve stres cevapları dahil olmak üzere birçok hücresel işlemler sırasında gen ekspresyonunun kontrolünde bir role sahiptir. Ayrıca NonO/p54nrb transkripsiyonun başlamasında, RNA işlenmesinde, transkripsiyonun uzaması, sonlanması dahil olmak üzere nukleus içerisinde çeşitli işlemlere katılmaktadır. Bununla birlikte NonO/p54nrb'nin transkripsiyonel regülasyonu hakkında sınırlı bilgi bulunmaktadır. Çalışmamızda prostat kanser modeli (PC3) ve normal endotel hücrelerinde bu genin hipoksik regülasyonu analiz edilmiştir. İlk olarak on farklı hücre hattında (Hela, HUVEC, HT-29, MCF-7, PC3, Du145, Hep3B, Panc, Saos, Mg63) NonO/p54nrb'nin ekspresyon profili belirlenmiştir. Kimyasal olarak CoCl2 ile uyarılmış hipoksik model kullanılmıştır. Hipoksiya sqRT-PCR kullanılarak HIF-1α mRNA seviyeleri ile doğrulanmıştır. mRNA seviyesindeki NonO/p54nrb gen ekspresyonu, protein ve transkripsiyonel aktivite seviyeleri analiz edilmiştir. NonO/p54nrb farklı promotor parçaları (P1: -730/+529, P2: -516/+529, P3: -336/+529, P4: -159/+529) pMetLuc lusiferaz vektör içerisine klonlanmıştır. Bazal promotor aktivitesi geçici tranfeksiyon deneyleri ile belirlenmiştir. Parçaların bazal aktivitesi 48 saatteki hipoksiyada artmıştır. NonO/p54nrb mRNA ve protein seviyeleri 72 saatteki hipoksiya tarafından uyarılmıştır. Buna ek olarak EMSA ile promotordaki olası HIF-1α bağlanma bölgesi (+471/+529 bç) gösterilmek için çalışılmıştır.

Özet (Çeviri)

NonO/p54nrb (Non-POU domain-containing octamer-binding protein) is a protein that in humans is encoded by the NONO gene and has been shown to interact with SFPQ, SPI1 and Androgen receptor. NonO/p54nrb was recently shown to be a component of a novel nuclear domain termed paraspeckle. Paraspeckles are a relatively new class of subnuclear bodies found in the interchromatin space of mammalian cells. Paraspeckles and their components may ultimately have a role in controlling gene expression during many cellular processes including differentiation, viral infection, and stress responses. Additionaly, NonO/p54nrb participate in numerous processes within the nucleus, including transcription initiation, RNA processing, transcription elongation, and termination. However there is limited information about the transcriptional regulation of NonO/p54nrb. We analyzed the hypoxic regulation of this gene in prostate cancer model (PC3) and normal endothelial cells (HUVEC). Fisrtly, we determined the expression profile of NonO/p54nrb in ten different cell lines (Hela, HUVEC, HT-29, MCF-7, PC3, Du145, Hep3B, Panc, Saos, Mg63). We used chemically induced hypoxic model using CoCl2. Hypoxia was confirmed by HIF1α mRNA level using sqRT-PCR. We analyzed NonO/p54nrb gene expression at mRNA, protein and transcriptional activity level. We cloned different NonO/p54nrb promoter constructs (P1: -730/+529, P2: -516/+529, P3: -336/+529, P4: -159/+529) into pMetLuc lusiferase vector. Basal promotor activity were determined by transient transfection assays. Basal activity of constructs increased in hypoxia at 48 h. NonO/p54nrb mRNA and protein levels were induced by hypoxia at 72 h. Additionaly, we tried to show the possible HIF-1α binding site (+471/+529 bp) in the promoter with EMSA.

Benzer Tezler

  1. NONO/ p54nrb geninin endotel hücrelerinde moleküler karakterizasyonu

    Molecular characterization of NONO/ p54nrb gene in endothelial cells

    KÜBRA PASPAL EROĞLU

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    BiyolojiBalıkesir Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. FERAY KÖÇKAR

  2. Hepatosellüler kanserde TGF-Β'nın nono/p54nrb gen ifadesine etkisinin belirlenmesi

    Determination of the effect of TGF-Β on the expression of nono/p54 nrb gene in hepato-cell

    SALİHA DERYA KESKİN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2020

    GenetikBalıkesir Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. FERAY KÖÇKAR

  3. Prostat kanseri hücre hattında NonO/p54nrb geninin YBX1 transkripsiyon faktörü ile regülasyonu

    Regulation of NonO/p54nrb gene with YBX1 transcription factor in prostate cancer cell line

    MERVE ERCEVAHİR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    GenetikBalıkesir Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ SÜMEYYE AYDOGAN TÜRKOĞLU

  4. Demokratik Kongo Cumhuriyeti'nde medyanın sahiplik yapısı üzerine bir inceleme

    Demokratik Kongo Cumhuriyeti'nde medyanın sahiplik yapısı üzerine bir inceleme

    NONO IKWA ILOKO

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    GazetecilikAkdeniz Üniversitesi

    Radyo Televizyon ve Sinema Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ MUSTAFA SAMİ MENCET

  5. Nitrik oksid donörü (SPER/NO) ve klorür kanal blokerlerinin (9-AC, NPPB) gebe sıçan miyometriyal aktivitesi üzerine etkilerinin araştırılması

    Effect of spermine NONO ate, a nitric oxide donor, and NPPB, chloride channel modulators, on contractions in myometrial strips isolated from pregrant rats

    YASEMİN YARAR

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2000

    Kadın Hastalıkları ve DoğumCumhuriyet Üniversitesi

    Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ALİ ÇETİN