Geri Dön

Sığır kalp dokusunda mitokondrial F0F1-ATP sentaz ve f1-ATPaz enzimlerinin izolasyonu, purifikasyonu ve rekonstitüsyonu

Isolation, purification and reconstition of mitochondrial F0F1-ATP synthase and F1-ATP ase from bovine heart tissue

  1. Tez No: 44197
  2. Yazar: GÜLGÜN OKTAY
  3. Danışmanlar: PROF.DR. HÜSEYİN T. SESSİZ
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 1995
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 66

Özet

59 2.4 ÖZET FgF^ATP sentaz; H+ATP sentaz, H+ATPaz, ATP sentaz ya da kompleks V olarak da adlandırılan, ATP oluşturmak için membranlararası proton gradiyentini kullanan çok altbirimli bir komplekstir. F0F.,ATP sentaz kompleksi iki bölümden oluşur: F,oIarak adlandırılan kısmı ATP sentezinin yapıldığı katalitik kısımdır, memranda bulunan bölge ise enerji iletiminden sorumlu olan F0 bölgesidir. Bu enzimin, ATP sentezleyebilmek için membranlararası proton gradientini enerjiye nasıl çevirdiği bilinmemektedir. Enzim kompleksinin F0 ve F1 kısımları birbirinden ayırılıp,ayrı ayrı fonksiyonları incelenebilir. F1 kısmı membrandan kolaylıkla serbestleştirilebilir. F1 çıkarıldıktan sonra molekülün membranda kalan kısmı proton kanalı olarak isimlendirilen F0'dur. Çalışmamızda sığır kalbi mitokondrisinden F0F,,-ATP sentaz ve Ft-ATPaz enzimlerini saflaştırdık. öncelikle, sığır kalbinden mitokondri, mitoplast ve submitokondriyal partiküller izole edilerek, F^-ATP sentaz enzimi heptil- tiyoglukozid ile çözünür hale getirildi. Bu basamaktan elde edilen materyal anyon-değişim HPLC'ye uygulandı ve F^-ATP sentaz enzimini içeren fraksiyonlar toplanarak konsantre edildi. HPLC basamağı ATPaz'ın spesifik aktivitesini artırdı. Bu aktivitenin olgomisinle inhibasyonu ise bize saflaştırılan enzimin intakt olduğunu göstermektedir. Konsantre edilen materyal SDS-üre- PAGE ile analizlendi. F0F.,-ATP sentaz'ın altbirim kompozisyonu ve molekül ağırlıkları a-48.000, p-45.000, P'(Factor B)-44.000, y-33.800, altbirim b-27.000, OSCP-24.000, 8-20.400, altbirim d- 17.000, F6-13.000, A6L-1 1.500 and altbirim c- 8.000 dalton. FQF1 ATP sentaz'ın molekül ağırlığı ise 477.700 dalton olarak bulundu. Bu çalışmada aynca, sığır kalbinden kloroform-yöntemi ile F1 ATPaz enzimi de saflaştınldı. Kloroformla-serbestleştirme yöntemine göre izole edilen F.,ATPaz enziminin spesifik aktivitesi başlangıç materyali olan iç membran veziküllerine göre 22 kat artmış bulundu. Saflaştırılan F^ATPaz, SDS-üre-PAGE ile analizlendi. F, ATPaz'ın altbirim kompozisyonu ve molekül ağırlıkları a-46.000, 0-44.500, P'(Factor B)-42.600, y-33.000, 8-21.800, IF1-1 1.700, and e-7.500 dalton olarak belirlendi. Başlangıç materyali olarak Mg-ATP partiküllerini kullandığımız için“inhibitor faktör”ü de tayin edildi. F,-ATPaz'ın molekül ağırlığı 347.000 dalton olarak bulundu. Son olarak; DES, oligomisin, ventürisidin ve DCCD'nin F,, rekonstitüe F^, ve pürifiye F0F, üzerinde gösterdikleri inhibitor etkilerini incelendi.

Özet (Çeviri)

60 2.5 SUMMARY F0FrATP synthase, which is also called H+ATP synthase, FFATPase, ATP synthase, or complex V, is a multisubunit complex that utilizes a transmembrane proton gradient to form ATP. The F0F,-ATP synthase complex is composed of two domains: a hydrophilic part called F,, which is the catalytic site of ATP synthesis, and a membranous domain called F0, which is responsible for energy transduction. However, it is still unknown how this enzyme converts transmembrane proton gradient into energy for ATP synthesis. The F0 and Ft domains can be separated and their functions studied as autonomous entities. The F, portion can be easily dissociated from the membrane and is soluble in aqueous buffers lacking detergents. The portion of the molecule remaining in the membrane after removal of F, is F0, often termed the proton channel. In the present work, we purified F0Fj ATP synthase and Fj-ATPase from bovine heart mitochondria. Firstly, bovine heart mitochondria, mitoplasts and submitochondrial particles were isolated and F0F,ATP synthase was solubulized with HTG from submitochondrial particles. The solution from the previous step was applied to anion-exchange HPLC and fractions containing F0F,ATP synthase were collected, and concentrated. The HPLC step was very effective for increasing the specific activity was completely inhibited by oligomycine, indicating that the purified F^ATP synthase was intact. The concentrated material was analyzed by SDS-urea-PAGE. The subunit composition and molecular weights of F0F,ATP synthase were found as: a-48.000, p-45.000, P'(Factor B)-44.000, y-33.800, subunit b-27.000, OSCP-24.000, 8-20.400, subunit d- 17. 000, F6-13.000, A6L-1 1.500 and subunit c-8.000 dalton. The molecular weight of FJFjATP synthase was also found as 477.700 dalton. We also purified F,-ATPase from bovine heart mitochondria by chloroform-method. The bovine heart F,-ATPase isolated by chloroform-release protocol showed a 22-fold increase in specific activity starting from purified inner membrane vesicles. The purified F,-ATPase was analyzed with SDS- urea-PAGE. The subunit composition and molecular weights of F,-ATPase were found as: a-46.000, p-44.500, p'(Factor B)-42.600, y-33.000, 8-21.800, IF1-1 1.700, and e-7.500 dalton. The molecular weight of Fj-ATPase was found as 347.000. Since we used the Mg-ATP particles as the starting material, we could also determine the inhibitor factor. Finally, we investigated the inhibitory effects of DES, oligomycin, venturicidine and DCCD on F,, reconstitued F0F, and purified F0Fr

Benzer Tezler

  1. Tez No

    853372

    Investigation of mechanoregulatory role of desmin protein

    Investigation of mechanoregulatory role of desmin protein

    NİLÜFER DÜZ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    Tıbbi BiyolojiHacettepe Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. PERVİN RUKİYE DİNÇER

  2. Tez No

    685583

    Investigation of the biochemical parameters in pre-symptomatic and symptomatic SOD1 mutated rat model of ALS

    SOD1 mutasyonlu ALS sıçanlardaki biyokimyasal parametrelerin semptom öncesi ve semptomlardan sonraki dönemde incelenmesi

    DUYGU AYDEMİR

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    BiyokimyaKoç Üniversitesi

    Hücresel ve Moleküler Tıp Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NURİYE NURAY ULUSU

  3. Tez No

    173388

    Siklik AMP nin lipaz aktivasyonuna etkisi

    Başlık çevirisi yok

    LEYLA AÇAN

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    1979

    BiyokimyaAnkara Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

  4. Tez No

    248517

    Sığır sakatat ve kaslarında iz element içeriğinin belirlenmesi

    Determination of trace elements in offals and muscles of beef

    HAYRUNNİSA ÖZLÜ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2009

    Besin Hijyeni ve TeknolojisiAtatürk Üniversitesi

    Besin Hijyeni ve Teknolojisi Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MUSTAFA ATASEVER

  5. Tez No

    767140

    Sığır, koyun ve keçi abortuslarında Chlamydia spp. üzerine patolojik ve moleküler araştırmalar

    Pathological and molecular studies on Chlamydia spp. in cattle, sheep and goat abortions

    İBRAHİM DENİZ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    Veteriner HekimliğiSelçuk Üniversitesi

    Veterinerlik Patolojisi Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ERTAN ORUÇ

Geri Dön