MCF-7 hücrelerinde hücre ölümü ve rho kinaz arasındaki olası ilişkinin değerlendirilmesi
Evaluation of the possible relationship between cell death and RHO kinase in MCF-7 cells
- Tez No: 445445
- Danışmanlar: PROF. DR. MUSTAFA ARK
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Eczacılık ve Farmakoloji, Pharmacy and Pharmacology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2016
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gazi Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Farmakoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 167
Özet
Kaspazlar, apoptoz sırasında proteaz kaskadının aktive edilmesinde rol almakta, anahtar yapısal proteinlerin ve önemli hücresel sinyallerin aktivasyonuna/ inaktivasyonuna yol açmaktadır. Diğer taraftan küçük G proteini Rho ve onun downstream efektörü Rho kinazın (ROCK 1 ve ROCK 2) hücre kontraksiyonu, proliferasyonu, apoptozu ve migrasyonu gibi çok çeşitli fizyopatolojik mekanizmada yer aldığı gösterilmiştir. Rho kinazlar yapısal olarak otoinhibitör aktiviteye sahiptir. ROCK 1'in, efektör kaspazlardan kaspaz-3 ile, ROCK 2'nin granzim B veya kaspaz-2 ile kesilerek aktive olduğu bilinmektedir. MCF-7 hücrelerinde kaspaz-3 geninin ekson 3 bölgesinden 47 baz çifti genomik bir mutasyonla fonksiyonel olarak silinmiştir. Bu nedenle birçok çalışma MCF-7 hücrelerinde apoptozun kaspaz-3 ile ilişkilendirilen birçok karakteristik özelliğinin (DNA fragmentasyonu, membran bleblenmesi gibi) gözlemlenmediğini söylemektedir. Bu tez kapsamında yapılan çalışmalar sırasında, kaspaz-3 bulunmayan MCF-7 hücrelerinde çeşitli ajanlar ile indüklenen hücre ölümünde, ROCK 1'in kesildiği ve bu kesilmenin kaspaz inhibitörlerine duyarlı olduğu tespit edilmiştir. ROCK 1'in gerçekten kaspaz-2 aracılığı ile kesilip kesilmeyeceğini belirlemek için, öncelikle bu proteinin aminoasit sekansı incelenmiştir. Yapılan biyoinformatik incelemelerde kaspaz-2 için birkaç olası ROCK 1 tanıma bölgesi olduğu saptanmıştır. Kaspaz-2'nin ROCK 1'i kesip kesmediğini doğrulamak için 3 farklı hücre lizatı (HeLA, MCF-7, MDA-MB-231) rekombinant aktif kaspaz-2 ile inkübe edilmiştir. Her üç hücre lizatında da eksojen aktif kaspaz-2 inkübasyonu ile ROCK 1 kesilmesi gözlenmiştir. Bu bulgular, hem ilaçla indüklenen hücre ölümü ile endojen olarak hem de eksojen aktif kaspaz-2 uygulaması sonucu meydana gelen ROCK 1 kesilmesinden, kaspaz-2'nin de sorumlu olabileceğine işaret etmektedir. Sonuç olarak, apoptotik süreçte kaspaz-2 aracılı yeni bir ROCK 1 kesilme bölgesinin belirlenmesi kanser tedavisinde yeni tedavi yaklaşımlarına katkı sağlayabilecektir.
Özet (Çeviri)
Caspases play role in activating the protease cascade during apoptosis and lead to activation/inactivation of the key structural proteins and cellular signalings. On the other hand, it is shown that small G protein Rho and its downstream effector Rho kinase (ROCK 1 and ROCK 2) are involved in several pathophysiologic mechanisms such as cell contraction, proliferation, apoptosis and cell migration. ROCK has constituve autoinhibitory activity. It is known that ROCKs are activated after ROCK 1 is cleaved by caspase 3, which is one of the effector caspases, and ROCK 2 is cleaved by caspase 2 and granzyme B. 47 base pairs located in exon 3 of caspase-3 gene is functionally removed with a genomic mutation in MCF-7 cells. Therefore, many studies state that many caspase 3-related apoptotic characteristics features (such as DNA fragmentation, membrane blebbing etc.) are not observable in MCF-7 cells. During the studies within the context of this thesis, it is observed that ROCK 1 is cleaved in various agents induced cell death in caspase-3-deficient MCF-7 cells, and that cleavage is sensitive to caspase inhibitors. Therefore, first the amino acid sequence of that protein has been analyzed for whether ROCK 1 might be literally cleaved by caspase 2. In bioinformatics analysis, it is found that there exist several possible recognition sequences of ROCK 1 for caspase-2. To confirm whether caspase-2 cleaves ROCK 1, three different cell lysates (HeLa, MCF-7 and MDA-MB-231) were incubated with recombinant active caspase-2. Cleavage of ROCK 1 with active caspase-2 incubation was observed for all three cell lysates. These findings suggest that caspase-2 might also be responsible for ROCK 1 cleavage endogenously in various agents-induced cell death and exogenously with recombinant active caspase-2 incubation as well. As a result, determination of a new possible caspase-2 mediated ROCK 1 cleavage site in the apoptotic process will contribute to new therapeutic approaches in cancer treatment.
Benzer Tezler
- Radyoterapi ile eşzamanlı letrozol kullanımının meme kanseri hücre hattında hücre ölüm mekanizmaları üzerine etkilerinin araştırılması
Study of the effect of concurrent use of letrozole with radiotherapy to the cell death mechanisms in the breast cancer cell line
BURCU DURMAK İŞMAN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2010
OnkolojiDokuz Eylül ÜniversitesiRadyasyon Onkolojisi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İLKNUR BİLKAY GÖRKEN
- MCF-7 hücrelerinde everolimus ve melatonin kombinasyonunun MTOR yolu aracılı hücre ölümü ve mitokondriyal solunum üzerine olan etkisinin araştırılması
Investigation of the effect of everolimus and melatonin combination on mtor pathway-mediated cell death and mitochondrial respiration in MCF-7 cells
ŞEYMA DEMİRKESEN
Doktora
Türkçe
2023
BiyolojiTekirdağ Namık Kemal ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. CENK ARAL
- İnsan meme kanseri hücre hattında (MCF-7) AKT inhibitörünün apoptozis üzerine etkisi
Effect of AKT inhibitor on apoptosis in human breast cancer (MCF-7) cell line
AHMET KARAKUŞ
Doktora
Türkçe
2022
BiyokimyaAtatürk ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ORHAN ERDOĞAN
- Kurkumin ve türevlerinin Nrf2 sinyal yolağı üzerine etkileri
Effects of curcumin and its derivates on Nrf2 signaling pathways
GÖKHAN BİÇİM
Doktora
Türkçe
2024
BiyokimyaMarmara ÜniversitesiBiyokimya (Tıp) Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AHMET SÜHA YALÇIN
- Malatya'da yetişen farklı kayısı çeşitlerinin hücre kültür sisteminde sitotoksik/apoptotik etkilerinin incelenmesi
Investigation of cytotoxic/apoptotic effects different species of apricot in Malatya
ÜNZİLE KELEŞTEMUR