MCF-7 hücrelerinde hücre ölümü ve rho kinaz arasındaki olası ilişkinin değerlendirilmesi
Evaluation of the possible relationship between cell death and RHO kinase in MCF-7 cells
- Tez No: 445445
- Danışmanlar: PROF. DR. MUSTAFA ARK
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Eczacılık ve Farmakoloji, Pharmacy and Pharmacology
- Anahtar Kelimeler: GTP fosfohidrolazlar, Hücre ölümü, Hücreler, Neoplazm hücreleri, Neoplazmlar, Rho kinaz, GTP phosphohydrolases, Cell death, Cells, Neoplastic cells, Neoplasms, Rho kinase
- Yıl: 2016
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gazi Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Farmakoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Kaspazlar, apoptoz sırasında proteaz kaskadının aktive edilmesinde rol almakta, anahtar yapısal proteinlerin ve önemli hücresel sinyallerin aktivasyonuna/ inaktivasyonuna yol açmaktadır. Diğer taraftan küçük G proteini Rho ve onun downstream efektörü Rho kinazın (ROCK 1 ve ROCK 2) hücre kontraksiyonu, proliferasyonu, apoptozu ve migrasyonu gibi çok çeşitli fizyopatolojik mekanizmada yer aldığı gösterilmiştir. Rho kinazlar yapısal olarak otoinhibitör aktiviteye sahiptir. ROCK 1'in, efektör kaspazlardan kaspaz-3 ile, ROCK 2'nin granzim B veya kaspaz-2 ile kesilerek aktive olduğu bilinmektedir. MCF-7 hücrelerinde kaspaz-3 geninin ekson 3 bölgesinden 47 baz çifti genomik bir mutasyonla fonksiyonel olarak silinmiştir. Bu nedenle birçok çalışma MCF-7 hücrelerinde apoptozun kaspaz-3 ile ilişkilendirilen birçok karakteristik özelliğinin (DNA fragmentasyonu, membran bleblenmesi gibi) gözlemlenmediğini söylemektedir. Bu tez kapsamında yapılan çalışmalar sırasında, kaspaz-3 bulunmayan MCF-7 hücrelerinde çeşitli ajanlar ile indüklenen hücre ölümünde, ROCK 1'in kesildiği ve bu kesilmenin kaspaz inhibitörlerine duyarlı olduğu tespit edilmiştir. ROCK 1'in gerçekten kaspaz-2 aracılığı ile kesilip kesilmeyeceğini belirlemek için, öncelikle bu proteinin aminoasit sekansı incelenmiştir. Yapılan biyoinformatik incelemelerde kaspaz-2 için birkaç olası ROCK 1 tanıma bölgesi olduğu saptanmıştır. Kaspaz-2'nin ROCK 1'i kesip kesmediğini doğrulamak için 3 farklı hücre lizatı (HeLA, MCF-7, MDA-MB-231) rekombinant aktif kaspaz-2 ile inkübe edilmiştir. Her üç hücre lizatında da eksojen aktif kaspaz-2 inkübasyonu ile ROCK 1 kesilmesi gözlenmiştir. Bu bulgular, hem ilaçla indüklenen hücre ölümü ile endojen olarak hem de eksojen aktif kaspaz-2 uygulaması sonucu meydana gelen ROCK 1 kesilmesinden, kaspaz-2'nin de sorumlu olabileceğine işaret etmektedir. Sonuç olarak, apoptotik süreçte kaspaz-2 aracılı yeni bir ROCK 1 kesilme bölgesinin belirlenmesi kanser tedavisinde yeni tedavi yaklaşımlarına katkı sağlayabilecektir.
Özet (Çeviri)
Caspases play role in activating the protease cascade during apoptosis and lead to activation/inactivation of the key structural proteins and cellular signalings. On the other hand, it is shown that small G protein Rho and its downstream effector Rho kinase (ROCK 1 and ROCK 2) are involved in several pathophysiologic mechanisms such as cell contraction, proliferation, apoptosis and cell migration. ROCK has constituve autoinhibitory activity. It is known that ROCKs are activated after ROCK 1 is cleaved by caspase 3, which is one of the effector caspases, and ROCK 2 is cleaved by caspase 2 and granzyme B. 47 base pairs located in exon 3 of caspase-3 gene is functionally removed with a genomic mutation in MCF-7 cells. Therefore, many studies state that many caspase 3-related apoptotic characteristics features (such as DNA fragmentation, membrane blebbing etc.) are not observable in MCF-7 cells. During the studies within the context of this thesis, it is observed that ROCK 1 is cleaved in various agents induced cell death in caspase-3-deficient MCF-7 cells, and that cleavage is sensitive to caspase inhibitors. Therefore, first the amino acid sequence of that protein has been analyzed for whether ROCK 1 might be literally cleaved by caspase 2. In bioinformatics analysis, it is found that there exist several possible recognition sequences of ROCK 1 for caspase-2. To confirm whether caspase-2 cleaves ROCK 1, three different cell lysates (HeLa, MCF-7 and MDA-MB-231) were incubated with recombinant active caspase-2. Cleavage of ROCK 1 with active caspase-2 incubation was observed for all three cell lysates. These findings suggest that caspase-2 might also be responsible for ROCK 1 cleavage endogenously in various agents-induced cell death and exogenously with recombinant active caspase-2 incubation as well. As a result, determination of a new possible caspase-2 mediated ROCK 1 cleavage site in the apoptotic process will contribute to new therapeutic approaches in cancer treatment.
Benzer Tezler
- Kardiyak glikozit aracılıklı sitotoksisite ile rho/rho kinaz yolağının olası bağlantısının kanser hücre dizilerinde incelenmesi
Investigation of the possible link between cardiac glycosides mediated cytotoxicity and RHO/RHO kinase pathway on cancer cell lines
AYSUN ÖZDEMİR
Doktora
Türkçe
2014
Eczacılık ve FarmakolojiGazi ÜniversitesiFarmakoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MUSTAFA ARK
- MCF-7 hücrelerinde everolimus ve melatonin kombinasyonunun MTOR yolu aracılı hücre ölümü ve mitokondriyal solunum üzerine olan etkisinin araştırılması
Investigation of the effect of everolimus and melatonin combination on mtor pathway-mediated cell death and mitochondrial respiration in MCF-7 cells
ŞEYMA DEMİRKESEN
Doktora
Türkçe
2023
BiyolojiTekirdağ Namık Kemal ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. CENK ARAL
- miR-506 ifadesi arttirilan MCF-7 ve MDA-MB-231 meme kanseri hücrelerinde metforminin apoptotik hücre ölümü üzerine etkisinin incelenmesi
Investigation of the effect of metformin on apoptotic cell death in MCF-7 and MDA-MB-231 breast cancer cells with increased miR-506 expression
SURAYA QAYOUMI
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
Biyolojiİstanbul Kültür ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ ÖZGE RENCÜZOĞULLARI
- DENSpm ile paklıtaksel'in uyardığı apoptotik hücre ölümünde poliamin metabolizması rolünün MCF-7 WT ve BCL-2+ hücrelerinde gösterilmesi
Başlık çevirisi yok
ZEYNEP AKYOL
Yüksek Lisans
Türkçe
2014
Onkolojiİstanbul Kültür ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AJDA ÇOKER GÜRKAN
- Fotoduyarlılaştırıcı olarak schiff baz ligand kompleksleri kullanılan fotodinamik terapinin insan meme kanseri hücre hattı MCF-7 üzerinde anti-kanser etkisinin incelenmesi
The investigation of the anti-cancer effect of photodynamic therapy using schiff base ligand complex as photosensitiser on human breast cancer MCF-7 cell line
BURCU DEMİRBAĞ
Doktora
Türkçe
2023
Histoloji ve EmbriyolojiMersin ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. EBRU BALLI