Anoxybacillus gonensis g2t glukoz izomerasının kinetik ve bazı biyokimyasal parametrelerinin g33d, n138g, t144s, v293ı, v32ı, e373k ve v380ı bölge spesifik mutasyonları ile geliştirilmesi
Improvoment of kinetic and some biochemical parameters of glucose isomerase from anoxybacillus gonensis g2t by site directed mutagenesis g33d, n138g, t144s, v293i, v32i, e373k and v380i
- Tez No: 476169
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. HAKAN KARAOĞLU, YRD. DOÇ. DR. FATİH ŞABAN BERİŞ, YRD. DOÇ. DR. DERYA EFE
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Su Ürünleri, Aquatic Products
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2017
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Recep Tayyip Erdoğan Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Su Ürünleri Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 119
Özet
Glukoz izomeraz, amilaz ve proteaz ile birlikte dünyanın en yüksek tonajlı üç enziminden birisidir. GI; D-glukozun D-fruktoza, D- ksilozun da D- ksiluloza dönüşümlü izomerizasyonunu katalizler. GI, D-glukozun D-fruktoza izomerizasyonu HFCS üretiminde ticari bir öneme sahiptir. Bu öneminden dolayı bugüne kadar pek çok hücreden yeni GI'lar izole edilerek karakterize edilmiştir. Anoxybacillus gonensis G2T glukoz izomerazını kodalayan gen pET-28a(+) ekspresyon vektörüne klonlanarak enzim rekombinant olarak üretildi ve saflaştırıldı. Enzimin biyokimyasal özellikleri, kinetik parametrelerinin geliştirilmek için glukoz izomeraz üzerinde G33D, N138G, T144S, V293I, V32I, E373K ve V380I mutasyonları yapıldı. Mutant enzimler ve yaban tip enzim, kolon kromatografisi yöntemleri ile saflaştırıldı. Karakterize edilen tüm enzimler biyokimyasal özellikleri ve kinetik parametreleri bakımından birbirleriyle ve yaban tip enzim ile karşılaştırıldı. Yapılan karakterizasyon çalışmaları sonucunda G33D, V293I, V32I, E373K ve V380I mutasyonları ile yaban tip enzimin biyokimyal özelliklerinde ve kinetik parametrelerinde önemli sayılabilecek bir değişiklik meydana gelmemiştir. N138G ve T144S mutant enzimlerin Vmax, kcat ve katalitik etkinlik değeri olan kcat/ Km 'sinde artış gözlendi. N138G'nin Vmax değeri 44,24 ± 0,27 µmol/dk/mg protein, T144S'nin Vmax değeri 34,59 ± 0,26 µmol/dk/mg protein olarak hesaplandı. G33D, T144S mutant enzimlerin ısıl kararlılığında yaban tip enzime göre hafif bir artış gözlendi.
Özet (Çeviri)
Glucose isomerase is one of the three highest tonnaged enzymes with along amylase and protease in the World. Glucose isomerase catalyses conversion isomerization of D-glucose to D-fructose, and D-xylose to D-xylulose. Isomerization of D-glucose to D-fructose has a commercial importance in the production of HFCS. Because of this importance, many new GIs have been isolated and characterized to date. The coding gene of glucose isomerase from Anoxybacillus gonensis G2T was cloned to pET-28a(+) vector and GI was produced and characterized. To improve biochemical properties and kinetic parameters of the enzyme, G33D, N138G, T144S, V293I, V32I, E373K and V380I mutations were performed on the wild-type enzyme by site directed mutagenesis. All mutant enzymes and wild-type enzyme were purified by column chromatography methods. All characterized enzymes were compared with each other and with wild-type enzyme in terms of their biochemical and kinetic parameters. As a result of the characterization studies, mutations of G33D, V293I, V32I, E373K and V380I did not give any significant change in the biochemical properties and kinetic parameters of the wild-type enzyme. An increase was observed in the Vmax, kcat, and kcat/ Km values of the wild-type enzyme by N138G and T144S mutantations. The Vmax value of N138G mutant enzyme was calculated as 44,24 ± 0,27 μmol / min / mg protein and the Vmax value of T144S as 34,59 ± 0,26 μmol / min / mg protein. Increases were observed in the thermal stability of the G33D and T144S mutant enzymes compared to wild-type enzyme.
Benzer Tezler
- Anoxybacillus gonensis glukoz izomerazının genetik manipulasyonlarla bazı biyokimyasal özelliklerinin geliştirilmesi
Enhancing some biochemical properties of Anoxybacillus gonensis glucose isomerase by genetic manipulation
HAKAN KARAOĞLU
Doktora
Türkçe
2010
BiyokimyaKaradeniz Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ALİ OSMAN BELDÜZ
- D398S, I323V, I372Q/V VE V380F mutasyonlarının Anoxybacillus gonensis glukoz izomerazının kinetik parametreleri ve ısıl kararlılığı üzerine olan etkisinin araştırılması
Investigation of the effect of D398S, I323V, I372Q/V and V380F mutations on the kinetic parameters and thermal stability of glucose isomerase from Anoxybacillus gonensis G2T
MERVE KIZAKLI
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
BiyokimyaRecep Tayyip Erdoğan ÜniversitesiSu Ürünleri Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ HAKAN KARAOĞLU
- Anoxybacillus gonensis yaban tip ve W137/V184S mutantı glukoz izomerazlarının DEAE-sefaroz matriksina kovalent ve non-ko0valent immobilizasyonu
Covalently and non-covalently immobizilation on DEAS-sepharose matrix of wild type and W137/V184S mutant glucose isomerase from Anoxybacillus gonensis
ZÜLEYHA AKPINAR
Yüksek Lisans
Türkçe
2017
BiyokimyaRecep Tayyip Erdoğan ÜniversitesiSu Ürünleri Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. HAKAN KARAOĞLU
- Termofilik sulardan izole edilen anoxybacillus gonensis'e ait glukoz izomerazın ısıl kararlılığının geliştirilmesi
Increasing thermal stability of glucose isomerase anoxybacillus gonensis isolated hot springs
OSMAN RAMOĞLU
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
BiyokimyaRecep Tayyip Erdoğan ÜniversitesiSu Ürünleri Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ HAKAN KARAOĞLU
- Anoxybacillus gonensis G2t glukoz izomerazının ısıl kararlılığının K111R-L313I-V101R-A353G/F/W VE T428E/S bölge spesifik mutasyonları ile geliştirilmesi
Improvement thermal stability of glucose isomerase from Anoxybacillus gonensis g2t by site directed mutagenesis K111R-L313I-V101R-A353G/F/W and T428E/S
SEYHAN RAKICI
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
BiyokimyaRecep Tayyip Erdoğan ÜniversitesiSu Ürünleri Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ HAKAN KARAOĞLU