Farelerde in vitro embriyo kültürü ve embriyo transferinin yetişkin akciğer dokusunda toll-benzeri reseptör (TLR)-9 ekspresyonu üzerine etkisi
Effect of in vitro embryo culture and embryo transfer on the expression of toll-like receptor (TLR)-9 in adult mouse lung tissue
- Tez No: 478882
- Danışmanlar: PROF. LEVENT KARAGENÇ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Histoloji ve Embriyoloji, Histology and Embryology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2017
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Adnan Menderes Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Histoloji ve Embriyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Histoloji ve Embriyoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 93
Özet
İn vitro fertilizasyon ve embriyo transferi başta olmak üzere çeşitli üremeye yardımcı tedavi (ÜYTE) uygulamaları tüm dünyada infertilite tedavisinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Ancak yapılan çalışmalar, ÜYTE uygulama sonucu dünyaya gelen çocukların normal gebelik ile dünyaya gelmiş çocuklara oranla enfeksiyonlara ve astım gibi alerjik solunum yolları hastalıklarına karşı daha fazla duyarlı olduklarını göstermektedir. Doğal bağışıklık sistemi, patojenlere ve yabancı antijenlere karşı ilk savunma hattını oluşturmaktadır. Toll-benzeri reseptörler, doğal bağışıklık sisteminde önemli bir yer tutmaktadır. Bununla birlikte doğal bağışıklık sisteminin önemli bir unsuru olan TLR-9, bakteriyel/viral CpG-DNA'nın algılanmasında ve immun yanıtın şekillenmesinde önemli rol oynamaktadır. Sunulan tez çalışmasında, in vitro embriyo kültürü ve embriyo transferi işlemlerinin yetişkin dönemde akciğer dokusunda TLR-9 ekspresyonu üzerine herhangi bir etkisinin olup olmadığının incelenmesi amaçlanmıştır. Çalışmada, bir adet Kontrol grubu ve bir adet Deneme grubuna yer verilmiştir. Kontrol grubu, PMSG+hCG uygulaması yapılmamış olan dişilerin, aynı yaştaki erkeklerle çiftleştirilmelerinden elde edilen yetişkin bireylerden; Deneme grubu ise PMSG+hCG uygulamasını takiben çiftleştirilen dişilerden elde edilen döllenmiş yumurta hücrelerinin (zigot) atmosferik oksijen konsantrasyonunda büyütülmesiyle elde edilen, dolayısıyla in vitro ortamda gelişen blastosistlerin yalancı gebelere transferiyle elde edilen yavruların büyütülmesiyle elde edilen bireylerden oluşturulmuştur. Elde edilen Kontrol ve Deneme gruplarına ait yetişkin akciğer dokusunda, dokunun genel histolojik yapısını incelemek amacıyla Crossman'ın üçlü boyama yöntemi uygulanmıştır. Dokularda, TLR-9'un hangi hücreler tarafından eksprese edildiğini belirlemeye yönelik olarak immunohistokimya ve immunofloresan analizleri gerçekleştirilmiştir. TLR-9 ekspresyonunun mRNA ve protein düzeylerinde ekspresyonunu belirlemek amacıyla real-time PCR ve western blot tekniklerinden yararlanılmıştır. İmmunohistokimya/immunofloresan analiz sonuçları, TLR-9'un hava yollarında, alveol duvarında, alveol lümeninde, damar çevresinde, damar lümeninde eksprese edildiğini ve boyanmanın her iki grupta da benzer olduğunu göstermiştir. Western blot analizlerinden elde edilen sonuçlar, Kontrol grubu ile kıyaslandığında Deneme grubunda TLR-9 proteinine ait ekspresyon düzeyinin 1,25 kat arttığını göstermiştir (p=0,015). Diğer yandan, real-time PCR analizlerinden elde edilen sonuçlar, Kontrol grubu ile kıyaslandığında Deneme grubunda TLR-9'a ait mRNA düzeyinin 1,38 kat azaldığını göstermiştir (p>0,05). Sonuç olarak elde edilen veriler, TLR-9'un yetişkin farelerde akciğer dokusunda Tip II pnömositler ve makrofajlar da dahil olmak üzere belirli hücreler tarafından eksprese edildiğini göstermekte ve in vitro embriyo kültürü ve embriyo transferi işlemlerinin yetişkin akciğer dokusunda TLR-9 ekspresyonunun değiştirerek akciğer immun yanıtını etkiliyebileceğini düşündürmektedir.
Özet (Çeviri)
Various assisted reproductive technologies (ART), mainly in vitro fertilization and embryo transfer, are widely used in infertility treatment all over the world. However, recent studies have indicated that children born following ART are more sensitive to infections and allergic respiratory diseases like asthma compared with children born through normal pregnancy. Innate immune system is the first line of defense against pathogens and foreign antigens. It is known that toll-like receptors are an important component of the innate immune system. Among these, TLR-9 plays an important role in the detection of bacterial/viral CpG-DNA and in the establishment of an immune response. The aim of the present study was to examine if there is any effect of in vitro embryo culture and embryo transfer on the expression of TLR-9 in adult lung tissue. Two groups were included in the study: The Control group consisted of adult mice obtained through mating of female mice that did not receive PMSG + hCG administration with male mice of the same age. The Experimental group consisted of adults derived from the transfer of in vitro produced blastocysts. To this end, fertilized egg cells (zygotes) were cultured under atmospheric oxygen concentration until the blastocysts stage of development, blastocysts were transferred to pseudo-pregnant mice and pups born were reared to adulthood to be included in the Experimental group. Crossman's triple staining method was used to demonstrate the general histological structure of the adult lung tissue. Immunohistochemistry and immunofluorescence methods were used to determine cell types that express TLR-9 in both Control and Experimental groups. In addition to those methods, real-time PCR and western blot techniques were used to determine expression level of TLR-9 at the mRNA and protein levels, respectively. The results of immunohistochemistry/immunofluorescence analyses demonstrated that cells within and around the air ways, epithelium lining the alveoli and blood vessels express TLR-9 and that the pattern of staining was similar between the two groups. Results obtained from western blot analysis indicated that the expression level of the TLR-9 protein in the Experimental group was 1.25 fold higher compared to the Control group (p=0,015). On the other hand, real-time PCR analyses demonstrated that the expression of TLR-9 transcripts decreased 1.38 fold in the Experimental group when compared to the Control group (p>0,05). Taken together, results obtained from the present study demonstrate that TLR-9 is expressed in certain cell types including Type II pneumocytes and macrophages in the adult lung tissue and suggest that in vitro embryo culture and embryo transfer may affect the immune response of the lung by altering expression of TLR-9.
Benzer Tezler
- Farelerde in vitro embriyo kültürü ve embriyo transferinin yetişkin akciğer dokusunda toll-benzeri reseptör (tlr)-5 ekspresyonu üzerine etkisi
Effect of in vitro embryo culture and embryo transfer on the expression of toll-like receptor (tlr)-5 in adult mouse lung tissue
DİDAR TUĞÇE BALGİR
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
Histoloji ve EmbriyolojiAdnan Menderes ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Bilim Dalı
PROF. DR. LEVENT KARAGENÇ
- Farelerde in vitro embriyo kültürü ve embriyo transferinin fötal trakeya dokusunda bazal hücrelerin sayısı üzerine etkisi
Effect of in vitro mouse embryo culture and embryo transfer on the number of basal cells in fetal trachea
GÖKSEL DOĞAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2014
Histoloji ve EmbriyolojiAdnan Menderes ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. LEVENT KARAGENÇ
- Farelerde in vitro embriyo kültürü ve embriyo transferinin fötal akciğer dokusunda notch sinyal yolağı hedef genlerinden HEY1 ve SKP2 genlerinin ekspresyonu üzerine etkisi
Effect of in vitro mouse embryo culture and embryo transfer on the expression of notch signaling pathway target genes hey1 and SKP2 in the fetal lung tissue
GÖKSEL DOĞAN
Doktora
Türkçe
2019
Histoloji ve EmbriyolojiAydın Adnan Menderes ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
PROF. DR. LEVENT KARAGENÇ
- Fare embriyolarının in vitro kültüründe farklı BSA oranlarının gelişime etkisi
Effect of various BSA levels on development of mouse embryos in vitro culture
MİTHAT EVECEN
Doktora
Türkçe
1999
Veteriner Hekimliğiİstanbul ÜniversitesiDölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı
PROF. DR. İ. KAMURAN İLERİ
- Investigation of NFİB function and regulation of its putative target genes in human neural stem cell and SH-SY5Y neuroblastoma cell lines
İnsan sinir kök hücre ve SH-SY5Y nöroblastom hücre hatlarında NFIB işlevinin ve potansiyel hedef genlerinin regülasyonunun incelenmesi
BETÜL ULUCA
Doktora
İngilizce
2023
Biyoteknolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ ASLI KUMBASAR