Geri Dön

Purification of casein kinase II from sheep lung tissue and kinetic characterization using MYC oncoproteins as sustrate

Koyun akciğer dokusundan kazein kinaz II`nin saflaştırılması ve MYC onkoproteini substratı ile kinetik karakterizasyonu

  1. Tez No: 48103
  2. Yazar: NESRİN GÜNDOĞUŞ
  3. Danışmanlar: PROF. DR. WAYNE E. CRİSS
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Kazein kinaz II, myc onkoprotein, poliaminler, poliamin analoglar, Genler-MYC, Kazeinler, Onkogen proteinleri, Onkogenler, Casein Kinase II, oncoprotein, polyamines, polyamine analogs, Genes-MYC, Caseins, Oncogene proteins, Oncogenes
  7. Yıl: 1996
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

ÖZET Kazein kinaz II (CKII) enzimi bir çok prokaryot ve ökaryot hücresinde bulunan bir protein kinazdır. Heterotetramer yapısında olup 2 alfa ve 2 beta alt birimi içermektedir. Enzimin farklı izoformları olduğu gibi, halka yada iplik yapısında olan farklı moleküler biçimleri de bulunmaktadır. CKII enzimi doğal yolla oluşan, konsantrasyonları hem hızla çoğalan hücrelerde hem de kanser hücrelerinde artan poliaminler tarafından stimüle edilmektedir. 100' den fazla substratı olan enzimin aktivitesi hücrelerin çoğalmaları esnasında artmaktadır.DEAE-sellüloz, sefaroz CL-6B ve poli-L-lizin affinite kromatografisi gibi teknikler kullanarak CKH enzimi koyun akciğerinden saflaştınldı. Saflaştırma basamaklannda kazein substrat, GTP ise fosfat vericisi olarak kullanıldı. Kinetik özelliklerinin saptanmasında ise c-myc onkogen ürünü olan myc onkoproteini (pmyc) substrat, fosfat vericisi olarak ta GTP kullanıldı. Yaklaşık olarak 550 kez saflaşmış olan CKII enziminin son özgül aktivitesi 800,000 U/mg protein idi. Stimulator olarak polilizin yokluğunda, substrat olarak ta pmyc kullanıldığında enzimin GTP için görünür Km ve Vmax'i 3.3 uM ve 6,250 U/mg protein, pmyc için ise görünür Km ve Vmax 0.2 uM ve 9,433 U/mg protein olarak saptandı. Dolayısıyla, CKII enzimi için myc onkoproteini mükemmel bir substrat olarak gözükmektedir. Stimulator varlığında ise GTP için saptanan Km ve Vmax 8.2 uM ve 14,000 U/mg protein iken, pmyc için ise görünür Km ve Vmax 0.5 uM ve 100,000 U/mg protein olarak hesaplandı. Enzim spermidin ve spermin varlığında % 700 ve % 1100 stimüle, dekstran sülfat varlığında ise % 95 inhibe oldu. Bu çalışmada ayrıca CKII enzimi üzerindeki etkilerini belirlemek amacıyla 5 farklı anti-kanser poliamin analogu çalışıldı. Son zamanlarda bu analoglar ABD' de klinik çalışmalarda kullanılmaktadır. Bu analoglardan sadece BESpm ve BE4x4, CKII enzimini % 85 ve % 80 olarak inhibe etti. Çalışmalarımız CKII enziminin poliaminler tarafından stimüle, dekstran sülfat ve belli poliamin analogu olan ilaçlar tarafından inhibe edildiğini, göstermiştir. Dolayısıyla, bu veriler gelecekte farklı kanser türleri için klinik çalışmalarda kullanılabilir.

Özet (Çeviri)

SUMMARY Casein kinase II (CKII) is a protein kinase that has been found in most types of prokaryotic and eukaryotic cells. It is a heterotetramer composed of 2 alpha and 2 beta subunits. It also has different isoforms. It can be found in several molecular shapes including ring-like or filament structures. CKII is stimulated by naturally occuring polyamines whose concentrations increase in rapidly proliferating normal and cancer cells; and it is inhibited by polyanionic carbohydrate molecules. It phosphorylates more than 100 protein substrates. The activity of the enzyme is increased during cellular proliferation.We purified CKQ from sheep lung tissue by using DEAE-cellulose, sepharose CL-6B and poly-L-lysine affinity chromatographic techniques. The enzyme was purified using casein as substrate and GTP as the phosphate donor. It was characterized kinetically using the myc oncoprotein (pmyc) as substrate and GTP as the phosphate donor. CKQ was purified approximately 550 fold with a final specific activity near 800,000 U/mg protein. In the absence of polylysine as stimulator, the KmapP and Vmax app for GTP were 3.3 uM and 6,250 U/mg protein with pmyc as substrate (the protein product of myc oncogene) and the Krriapp and Vmax app for pmyc were 0.2 uM and 9,334 U/mg protein. This shows that pmyc is an excellent substrate for CKII. In the presence of stimulator, the Km^p and VmaxaPP for GTP and pmyc were 8.2 uM, 14,000 U/mg protein and 0.5 uM, 100,000 U/mg protein. The purified enzyme was stimulated 700 % and 1100 % with spermidine and spermine respectively. It was inhibited approximately 95 % by dextran sulphate.We studied 5 different anti-cancer polyamine analogs to determine their effects on the CKII. BESpm and BE4x4 inhibited polyamine stimulated CKII 85 % and 80 %, respectively. Our studies show that CKII is stimulated by polyamines and inhibited by dextran sulphate and certain polyamine analogue drugs. Such information can be used in clinical trials for different cancers in the future.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    659030

    Cloning, production, purification, and characterization of granulocyte-colony stimulating factor (G-CSF)

    Granülosit-koloni uyarıcı faktörü (G-CSF) klonlanması, üretimi, saflaştırma ve karakterizasyonu

    CANSIN KIRMAÇOĞLU

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2021

    Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)

    PROF. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY

  2. Tez No

    1018915

    Molecular investigation of CHEK2 variants of unknown significance (VUS) found by genetic screening of breast and colorectal cancer patients and healthy individuals in Turkish population

    Türk popülasyonunda meme ve kolorektal kanser hastaları ile sağlıklı bireylerde genetik tarama ile saptanan klinik önemi bilinmeyen CHEK2 varyantlarının moleküler incelemesi

    NİSAN DENİZCE CAN

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2026

    Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)

    PROF. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY

  3. Tez No

    299180

    Production, purification and characterization of thermostable protease from alkaliphilic and thermophilic Geobacillus sp.

    Alkalifilik ve termofilik Geobacillus sp.?den termal kararlı proteaz enziminin üretilmesi, saflaştırılması ve karakterizasyonu

    SEDEN GÜRACAR

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2011

    Biyokimyaİzmir Yüksek Teknoloji Enstitüsü

    Kimya Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. GÜLŞAH ŞANLI

  4. Tez No

    438116

    Isolation, screening, partial purification and characterization of halophilic protease from different samples

    Farklı örneklerden halofilik proteaz taranması, izolasyonu, saflaştırılması ve karakterizasyonu

    SARAH FITRIANI

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2016

    BiyolojiAnadolu Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. KIYMET GÜVEN

  5. Tez No

    415402

    Citrus sinensis (L.) Osbeck (portakal) ve Citrus limon (L.) Burm.f. (limon) çiçeklerinden proteaz ve peroksidaz enzimlerinin saflaştırılması ve endüstride kullanımlarının araştırılması

    Purification of protease and peroxidase from Citrus sinensis (L.) Osbeck (orange) and Citrus limon (L.) Burm.f. (lemon) flowers and investigation of their usage in industry

    FATİH UÇKAYA

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    BiyokimyaMuğla Sıtkı Koçman Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NAZAN DEMİR

Geri Dön