Vasküler endotel büyüme faktörü (VEGF)'nün rekombinant olarak üretilmesi, saflaştırılması ve biyolojik özelliklerinin araştırılması
Production of recombinant VEGF (vascular endothelial growth factor), purification and investigation of biological proporties
- Tez No: 482373
- Danışmanlar: PROF. DR. İSA GÖKÇE
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyomühendislik, Biyoteknoloji, Genetik, Bioengineering, Biotechnology, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2017
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gaziosmanpaşa Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 127
Özet
Vasküler endotelyal büyüme faktörleri (VEGF) genel olarak endotel hücre büyümesi, anjiyojenez ve vaskülojenez gibi fonksiyonlar göstermektedir. VEGF165 proteini VEGF ailesi içerisinde en yüksek anjiyojenik etkiye sahip türü olup birçok hücre ve doku türünde bulunmaktadır. VEGF165, özellikle VEGF reseptörlerine bağlanarak ve bu reseptörleri aktive ederek endotel hücreleri için mitojenik faktör olarak rol almaktadır. Bu tez çalışmasında, insan VEGF165 proteinin (rhVEGF165) rekombinant DNA teknolojisi kullanılarak maya ekspresyon sisteminde üretimi gerçekleştirilmiştir. Bu çalışmanın üç amacı, VEGF165 geninin klonlanması; Kluyveromyces lactis sisteminde rekombinant olarak ekspresyonu ve saflaştırılması; endotel hücreleri için biyolojik karakterizasyonunun belirlenmesidir. VEGF165 geni K. lactis pKLAC2 vektörüne K. lactis'e ait α-MF dizisinin alt bölgesine klonlanmıştır. VEGF165-pKLAC2 kontsrüktü lineer hale getirilip K. lactis kompetent hücrelerine tranforme edilmiş ve K. lactis genomuna entegrasyonu sağlanmıştır. Transforme hücrelerin seçilimi azot bulunmayan ve asetamid içeren besiyerinde gerçekleştirilmiştir. VEGF165 His-etiketi ile eksprese edilmiş ve K. lactis kültür ortamına sekresyonu sağlanmıştır. Amonyum sülfat ile çöktürme ve nikel temelli afinite kromotografisi teknikleri saflaştırma amacı ile kullanılmıştır. Saflaştırılmış rhVEGF165 SDS-PAGE yöntemi ile kalitatif olarak analiz edilmiştir. Bu çalışmada üretilen rekombinant VEGF165'nin biyolojik olarak aktifliği insan umbilikal ven endotel hücreleri (HUVEC) kullanılarak yapılan proliferasyon analizi ile belirlenmiş ve EC50 değeri 3.06 ng/mL olarak tespit edilmiştir. Ayrıca in vitro yara modeli oluşturularak yara iyileşmesi üzerine olan etkisi araştırılmıştır.
Özet (Çeviri)
Vascular endothelial growth factors (VEGFs) generally have functions such as endothelial cell growth, angiogenesis and vasculogenesis. Human VEGF165 is the most efficient angiogenic factor variant in the VEGF family and mainly found in many different cells and tissues. Especially, VEGF165 plays a role as an endothelial cell mitogenic factor via binding and activating of VEGF receptors. In this study, the expression of human protein VEGF165 (rhVEGF165) has been achieved using recombinant DNA tecnology in yeast expression system. The following three aims of this project are focusing on cloning of VEGF165 gene, expression and purification of the protein from the yeast Kluyveromyces lactis recombinantly and its biological characterization for endothelial cells. The gene VEGF165 was cloned into expression vector, pKLAC2 downstream of K. lactis α-MF. The VEGF165-pKLAC2 construct was linearized and transformed into K. lactis competent cells and integrated in its genome by electroporation. The selection of transformed strains was carried out using nitrogen-free medium containinig acetamide. VEGF165 was expressed with His-tag and secreted in K. lactis culture medium. Ammonium sulfate precipitation and the nickel based affinity chromotography were used for purification. Purified VEGF165 was qualitatively analyzed by SDS-PAGE. The recombinant VEGF165 was functionally active as assessed by human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) proliferation assay with EC50 of 3.06 ng/mL. In addition, in vitro wound model was created and its effect on wound healing was investigated.
Benzer Tezler
- Sıçan abdominal aorta fizyolojik yanıtlarına bevasizumabın etkileri
The effects of bevacizumab on rat abdominal aorta physiologic responses
AYŞEGÜL GÜMÜŞ BAŞKAYA
Yüksek Lisans
Türkçe
2016
Eczacılık ve FarmakolojiAkdeniz ÜniversitesiTıbbi Farmakoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. CAHİT NAÇITARHAN
- Vasküler endotelyal büyüme faktörünün yara iyileşmesi ve oksidatif stres üzerine etkileri
Effects of vasculer endoteilal growth factor on wound healing and oxidative stress
AYTEN BAYHAN
- Puberte döneminde Capsaicin uygulanan sıçanların böbrek dokusunda vasküler endotel büyüme faktörü'nün immunohistokimyasal lokalizasyonu
Immunohistochemical localization of vasküler endothelial growth factor in the kidneys of rats treated Capsaicin during puberty period
KADER ÇİFÇİ
Yüksek Lisans
Türkçe
2011
Histoloji ve EmbriyolojiKafkas ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MÜMTAZ NAZLI
- Küçük hücreli dışı akciğer karsinomlarında sperm-ilişkili antijen 9'un, tümör ilişkili makrofajların ve vasküler endotelyal büyüme faktörü'nün anjiyogenezis ve tümör progresyonundaki rolü
Role of sperm-associated antigen 9, tumor associated macrophages and vascular endothelial growth factor on angiogenesis and tumor progression in non-small cell lung cancer patients
FİRDEVS ZEYNEP TAŞLICA TAŞTEPE
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2017
PatolojiBaşkent ÜniversitesiPatoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. MERİH TEPEOĞLU
- İntravitreal bevacizumab enjeksiyonun konjonktival kalınlığa etkisi
Intravitreal bevacizumab injection's effect on conjunctival thickness
MEHMET OĞUZHAN KUNCI
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2024
Göz HastalıklarıÇanakkale Onsekiz Mart ÜniversitesiGöz Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. İSMAİL ERŞAN