Geri Dön

HPLC ile proteinlerin ayrılmasında dedeksiyon amaçlı yeni on-line yöntemin geliştirilmesi ve gıda ve ilaç analizinde uygulanması

Improving new on-line method aim of detection in determined proteins with HPLC and applying analyzed food and drug

PDF İndir

  1. Tez No: 482560
  2. Yazar: OZAN EMRE EYUPOĞLU
  3. Danışmanlar: PROF. DR. MURAT KÜÇÜK
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2017
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Karadeniz Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 116

Özet

Protein tayininde kullanılan mevcut UV-Vis spektrofotometrik yöntemlerin taraması yapıldıktan sonra, bu yöntemlerden üstün validasyon özelliklerine sahip olanların HPLC ile protein ayrılmasına uyarlanması sayesinde kolon sonrası reaktif enjeksiyonuyla kantitatif protein tayininin yapılabileceği on-line HPLC-Protein tayin sistemi (On-line HPLC-Biüret, On-line HPLC-Ninhidrin, On-line HPLC-Bradford) geliştirilmesi amaçlanmıştır. Bu yöntemlerden dedeksiyon açısından üstün olan On-line HPLC-Bradford yöntemi ile ayırım sonrası 595 nm'de kantitatif miktar belirleme mümkün olmuş, 280 nm'deki yarı kantitatif ölçüme göre daha güvenilir ölçümlere imkan sağlanmıştır. Bilinen çeşitli standart protein numunelerinin (CA ve BSA proteinleri) kullanılmasıyla on-line yöntemin optimize edilmesinden sonra tayin ve tespit sınırları belirlendi ve gıda (jelatin proteini) ve biyofarmasötik ilaç (insülin, immünglobulin G proteinleri) proteinlerinin boyut dışarılama kolonu ile kantitatif tayini gerçekleştirilmiştir. Ayrıca organik çözücü sistemlerinin (metanol, etanol, asetonitril) proteinler (CA, BSA, immünglobulin G, insülin) ve Bradford reaktifi ile birlikte on-line HPLC'de izokratik ya da gradient uygulamaları farklı kolon sistemleri için model teşkil etmesi amacıyla % kompozisyonları değiştirilerek spektrofotometrik analizleri yapılmıştır. 0.3 mL/dk akış hızı, 70 mg/L reaktif konsantrasyonu, 30 °C sıcaklık ve 2.5 m tubing uzunluğu optimum olarak belirlenmiştir. Ayrıca son karışımda suyun yanında % 10'a kadar organik çözücünün de kullanılabileceği gösterilmiştir.

Özet (Çeviri)

After searching UV-Vis spectrophotometric methods used for protein determination, development of an on-line HPLC-Protein determination system (on-line HPLC-Biuret, on-line HPLC-Ninhydrine, on-line HPLC-Bradford) is sought for by adapting the methods having better validation properties to protein separation with post-column reagent injection. On-line-HPLC-Bradford method, being superior in terms of detection, provided better quantitative determination at 595 nm after protein separation in comparison to the semi-quantitative protein determination at 280 nm. By using various standard protein samples (CA and BSA proteins) the new method was optimized, limit of detection and limit of quantification values were determined, and quantitative determination of food (gelatin) and biopharmaceutic drug (insulin and immunoglobulin G) polypeptides were achieved by using size-exclusion column. In addition organic solvent systems (methanol, ethanol, acetonitrile) were evaluated spectrophotometrically by changing % compositions in order to show a model for the interaction with the determination of proteins (CA, BSA, immunglobuline G, insuline) and Bradford reagent in the on-line HPLC system for isocratic or gradient applications and different column systems. Optimization results were obtained as 0.3 mL/min reagent flow rate, 70 mg/L reagent concentration, 30 °C temperature and 2.5 m tubing length. It was also shown that all organic solvents below 10% mixing ratio can be used.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    352291

    Molecular characterization of a boron-resistant yeast mutant obtained by evolutionary engineering

    Evrimsel mühendislik ile elde edilmiş bor stresine dirençli mutant mayanın moleküler karakterizasyonu

    MUSA TARTIK

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2013

    Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ZEYNEP PETEK ÇAKAR

  2. Tez No

    467126

    The separation of phenolic compounds from red colored fruit juices by using electrospun nanofiber membranes

    Elektroeğirme nanolif membranlarla kırmızı suyu meyve sulardan fenolik bileşen ayrışması

    FARZANEH AZIZZADEH

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2017

    Gıda Mühendisliğiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. FİLİZ ALTAY

  3. Tez No

    528115

    Vitamin D eksikliklerinde vitamin D metabolizması ile ilişkili proteinlerin gen polimorfizimlerinin değerlendirilmesi

    Evaluation of gene polymorphisms of vitamin D metabolism associated proteins in vitamin D deficiencies

    LEYLA SEVİNÇ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    BiyokimyaSakarya Üniversitesi

    Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. FATMA BEHİCE CİNEMRE

  4. Tez No

    353647

    mTOR sinyal yolağının rapamycin ile baskılanması durumunda CDK inhibitörlerinin terapotik etkilerinin LNCaP, DU145 ve PC3 prostat kanseri hücrelerinde incelenmesi

    Başlık çevirisi yok

    ÖZGE BERRAK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    Biyolojiİstanbul Kültür Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ELİF DAMLA ARISAN

  5. Tez No

    224308

    Koroner arter hastalığı olan ve olmayan Tip 2 diabet hastalarında ileri glikasyon son ürünleri

    Advanced glycation end products in Type 2 diabetes patients with and without coronary artery disease

    BURAK ÇİMEN

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2008

    Biyokimyaİstanbul Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. REMİSA GELİŞGEN

Geri Dön