Kordon kanı kökenli mezankimal kök hücrelerin kahverengi adipositlere farklılaştırılması
Differentiation of umbilical cord blood derived- mesenchymal stem cells to brown adipocytes
- Tez No: 494618
- Danışmanlar: PROF. DR. GÜLİNNAZ ERCAN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biyoloji, Biyoteknoloji, Biochemistry, Biology, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2016
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ege Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kök Hücre Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 82
Özet
Mitokondriden zengin olan kahverengi yağ hücreleri“depolanmış trigliseritleri”yakarak onların içindeki enerjiyi ısıya dönüştürerek enerji tüketimini sağlayan ve bu özellikleri nedeniyle de diyabet, obezite, ve obeziteyle ilişkili çeşitli metabolik hastalıkların tedavisinde yararlı olma potansiyali olan hücrelerdir. Kordon kanı Mezenkimal Kök Hücre (KK-MKH)'leri Kemik İliği kökenli mezenkimal Kök Hücre (Kİ-MKH)'leri gibi diğer KH kaynaklarından daha az immünojenik olup allojenik ve otolog transplantasyonlarda kullanılabilirler. Şu ana kadar literatürde kordon kanından elde edilen mezankimal kök hücrelerin kahverengi adipositlere farklılaştırılmasını gösteren bir çalışma mevcut değildir. Bu projede kordon kanından elde edilen mezankimal kök hücrelerin in vitro koşullarda kahverengi adipositlere farklılaştırılması ve onların farklılaşma kapasitesi ve etkinliğinin adipoz doku kökenli MKH (AD-MKH)'ler ile kıyaslanması amaçlanmıştır. Çalışmamızda KK-MKH'leri Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalında normal doğum sonrası rutinde atılan 10 adet plasenta ve kordon kanından toplanmıştır. AD-MKH'leri ise Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Plastik ve Rekonstrüktif Cerrahi Kliniğinde liposakşın/lipektomi ameliyatı olan 6 adet gönüllü hastadan izole edilmiştir. KK-MKH'lerinin beyaz ve kahverengi adipositlere farklılaşma yeteneği AD-MKH'leri ile kıyaslanmıştır. İzole edilmiş MKH'ler akış sitometri analizi ile karakterize edilmiştir. Akış sitometri sonuçlarına göre hem KK-MKH'leri hem de AD-MKH'leri CD34 ve CD45 yüzey markerleri için negatif iken, CD90 ve CD105 yüzey markerleri için yüksek oranda pozitiflik gösterdiler. 3. pasaj MKH'ler, beyaz ve kahverengi olmak üzere iki farklı farklılaşma besi ortamında kültüre edilerek beyaz ve kahverengi adipositlere farklılaştırılmıştır. Kahverengi adipositleri elde etmek için MKH'ler rekombinant bone morphogenic protein 7 (BMP7) içeren farklılaşma medyumu içinde kültüre edilmiştir. Elde edilen beyaz ve kahverengi yağ hücrelerinin karakterize edilebilmesi için yapılan Oil Red O boyaması sonuçlarına göre, AD-MKH'lerden elde edilen beyaz ve kahverengi adipositler sırasıyla %85 ve %61 kırmızı pikseli gösterirken, KK-MKH'lerden elde edilen beyaz ve kahverengi adipositler ise sadece %3 ve %1,9 oranında kırmızı pikseli göstermiştir. Kahverengi adipositlere özgü UCP1 protein miktarı, Western blot ve floresan mikroskop analizleri ile incelenmiştir. Floresan analiz sonuçlarına göre, hem KK-MKH'lerden hem de AD-MKH'lerden elde edilen kahverengi adipositler farklılaştırılmamış kontrol hücrelerine göre daha fazla UCP1 proteini içermektedirler ancak sadece AD-MKH'lerden elde edilen kahverengi adipositlerin sitoplazmalarında yuvarlak parlayan cisimcikler görülmüştür. Bu cisimcikler literatüre göre bir araya gelen çok fazla sayıda kümeleşmiş mitokondriler olabilir. Western blot sonuçlarına göre KK-MKH ve AD-MKH'lerden elde edilen kahverengi adipositler farklılaştırılmamış MKH'lere göre sırasıyla 4 ve 10.64 kat daha fazla UCP1 proteini eksprese etmektedir (P
Özet (Çeviri)
Mitochondria-enriched brown fat cells provides energy consumption by burning“stored triglycerides”and converting th energy to heat, therefore they are potentially useful cells for the treatment of diabetes, obesity and various metabolic diseases associated with obesity. Umbilical Cord Blood derived-Mesenchymal Stem Cells (UCB-MSC) are less immunogenic than other SC sources such as Bone Marrow derived- Mesenchymal Stem Cells (BM-MSC), and can be used for allogenic and autologous transplantation. There is not any study in the literature available to demonstrate differentiation of UCB-MSC to brown adipocytes until now. In this study we aimed to perform in vitro differentiation of UCB-MSC to brown adipocytes and compare their differentiation capacity and efficiency with AD-MSCs. In this study, the UCB-MSCs were collected from 10 placenta and umbilical cord blood samples which are routinely discarded after a normal birth in Ege University Faculty of Medicine, Department of Gynecology and Obstetrics, AD-MSCs were collected from 6 voluntary patients who undergo Liposuction / lipectomy surgery at Ege University Faculty of Medicine Department of Plastic and Reconstructive Surgery. Differentiation ability of UCB-MSCs to white and brown adipocytes was compared with AD-MSCs. Isolated MSCs were characterized by flow cytometry analysis. According to the results of flow cytometry both UCB-MSCs and AD-MSCs showed high rate of positivity for CD90 and CD105 surface markers while they were negative for CD34 and CD45. MSCs in the 3rd passage were differentiated to white and brown adipocytes by culturing them in two different differentiation mediums, for white and brown adipocyte differentiation. MSCs were cultured in differentiation medium containing recombinant bone morphogenic protein7 (BMP7) to give brown adipocytes. The results of Oil Red O staining used for characterizing white and brown adipocytes demonstrated that white and brown adipocytes obtained from AD-MSCs showing 85% and 61% of red pixels, respectively, while it was 3% and 1.9%, respectively for white and brwon adipocytes obtained from UCB-MSCs. Brown adipocyte-specific UCP1 protein content, was determined by fluorescence microscopy and Western blot analysis. According to the results of the fluorescence analysis, brown adipocytes obtained from both UCB-MSCs and AD-MSCs contain more UCP1 protein than undifferentiated control cells but round shining bodies were only seen in cytoplasm of brown adipocytes obtained from AD-MSCs. According to the literature, they can be clustered mitochondria formed from large numbers of mitochondria that come together. The results of Western blot analysis show that brown adipocytes obtained from UCB-MSCs and AD-MSCs express UCP1 protein 4 and 10.64 times, respectively, more than undifferentiated MSCs (P
Benzer Tezler
- Kordon kökenli mezenkimal kök hücrelerinin hepatosit hücrelerine farklılaştırılmasının optimizasyonu
Optimisation of the differentiation of cord originated mesenchymal stem cells into hepatocyte cells
MELİKE ERSÖZ
Doktora
Türkçe
2014
BiyokimyaYıldız Teknik ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ADİL ALLAHVERDİYEV
- Testosteron propiyonatın kemik iliği kökenli mezenkimal kök hücrelerin proliferasyon ve canlılığına etkisi
Effects of testosterone propionate on bone marrow derived mesenchymal stem cells' proliferation and viability
BAŞAK ARU
Yüksek Lisans
Türkçe
2016
Allerji ve İmmünolojiYeditepe ÜniversitesiMoleküler Tıp Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. GÜLDEREN DEMİREL
- C-MYC inhibition allows ex vivo expansion of murine and human hematopoietic stem and progenitor cells
C-MYC inhibisyonunun fare ve insan hematopoetik kök hücre/hücre progenitorlerinin ex vivo çoğalmasını arttırıcı etkisi
MERVE AKSÖZ
Yüksek Lisans
İngilizce
2016
BiyomühendislikYeditepe ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. FATİH KOCABAŞ
- İnsan kordon kanı kökenli trombosit lizatların nanoveziküler sistemlerde enkapsülasyonu ve yara iyileştirme potansiyelinin incelenmesi
Encapsulation of human cord blood-derived platelet lysate in nanovesicular systems and investigation of its wound healing potential
NAZİRE DUYGU ASKER AKSOY
- Kordon kanı kök hücrelerinin diyabetik ayak yaralarında iyileşmeyi sağlayan faktörler üzerine etkisinin immünohistokimyasal yöntemle gösterilmesi
The indication of the influence of cordon blood stem cells on the factors that provide healing on diabetic foot scars using immunohistochemical method
NAZLI ÇİL
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2014
Histoloji ve EmbriyolojiPamukkale ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. EMİN OĞUZHAN OĞUZ