Geri Dön

Katı substrat fermentasyonu (KSF) ile Trichoderma harzianum ve Trichoderma viride türü funguslarda ksilanaz üretimi, saflaştırılması ve biyokimyasal özelliklerin belirlenmesi

Xylanase production, purification and identification of biochemical characteristics of Trichoderma harzianum and Trichoderma viride species fungi through solid state fermentation

  1. Tez No: 506081
  2. Yazar: HÜSEYİN ALPER İRTEM
  3. Danışmanlar: PROF. DR. AYŞE DİLEK AZAZ
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Mikrobiyoloji, Microbiology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2018
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Balıkesir Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 135

Özet

Bu çalışmada, Katı Substrat Fermentasyon (KSF) kültür ortamında geliştirilen Trichoderma harzianum NRRL 13019 ve Trichoderma viride NRRL 6418'den β-ksilosidaz enzimi saflaştırılmış ve biyokimyasal karakterizasyonu yapılmıştır. Birçok biyoteknolojik uygulamalarda ticari öneme sahip, β-ksilosidaz enzimi, KSF ortamında substrat olarak buğday kepeğinin kullanılmasıyla geliştirilen Trichoderma harzianum (KSF ortamının nemlendirme sıvısı pH 4,0 Sitrik asit monohidrat (C6H8O7H2O), optimum sıcaklık 35oC ve inkübasyon süresi 7 gün) ve Trichoderma viride (KSF ortamının nemlendirme sıvısı pH 8,5 Di-sodyum hidrojen fosfat dihidrat (Na2HPO4.2H2O) tamponu ile nemlendirilerek, optimum sıcaklık 25oC ve inkübasyon süresi 7 gün) suşlarından elde edilmiştir. β-ksilosidaz enzimi, amonuyum sülfat çöktürmesi ve Sepharose-4B-L-Tyrosine-1-Napthylamine kullanılarak Hidrofobik Etkileşim Kromatografisi ile iki basamakta saflaştırılmıştır. Saflaştırılan β-ksilosidaz enzim aktivitesi, p-nitrofenil-β-D-ksilopiranosit (pNPX) substratı kullanılarak belirlenmiştir. Trichoderma harzianum β-ksilosidaz enzimi (Thβ) %50,48 verimle 215,76 kat; Trichoderma viride β-ksilosidaz (Tvβ) ise %33,43 verimle 92,39 kat saflaştırılmıştır. SDS-PAGE ve Native-PAGE ile Thβ ve Tvβ enzimlerinin molekül ağırlıkları sırasıyla 20 kDa ve 25 kDa olarak belirlenmiş olup tek alt üniteden oluştukları tespit edilmiştir. Thβ ve Tvβ enzimlerinin optimum pH değerleri 6,0; optimum sıcaklık değerleri ise sırasıyla 75°C ve 65°C olarak saptanmıştır. Thβ enzimin Km ve Vmax değerleri sırasıyla 0,25 mM ve 2500 EU; Tvβ enziminin ise 0,5 mM ve 2500 EU olarak belirlenmiştir. Ayrıca saflaştırılan β-ksilosidaz enzimlerinin aktiviteleri bir β-ksilosidaz inhibitörü olan D-(+)-ksiloza karşı belirlenmiştir. D-(+)-ksiloz inhibitörünün Thβ enzimini karışık, Tvβ enzimini ise yarışmalı olarak inhibe ettiği belirlenmiştir. D-(+)-ksilozun Thβ enzim aktivitesi üzerine IC50 ve Ki değerleri sırasıyla 1,1x10-1 mM ve 1,10x10-3/5,57x10-3; Tvβ enziminin IC50 ve Ki değerleri ise 7,1x10-2 mM ve 2,64x10-4±1x10-5 olarak hesaplanmıştır.

Özet (Çeviri)

In this study, purification and biochemical characterization of β-xylosidase enzyme purified from Trichoderma harzianum NRRL 13019 and Trichoderma viride NRRL 6418 growth in solid state fermentation (SSF) was performed. β-xylosidase enzyme that has many biotechnological applications, was primarily obtained from Trichoderma harzianum (SSF conditions moistening citric acid monohydrate (C6H8O7H2O) pH 4.0, temperature 35°C and incubated 7 days) and Trichoderma viride (SSF conditions moistening disodium hydrogen phosphate dihydrate (Na2HPO4.2H2O) pH 8.5, temperature 25°C and 7 days) grown in SSF using wheat bran as a substrate. β-xylosidase enzyme was purified using two-step procedures, namely ammonium sulfate precipitation and Sepharose-4B-L-Tyrosine-1-Napthylamine Hydrophobic Interaction Chromatography. In our study, purified β-xylosidase enzyme activity was determined by using para-Nitrophenyl-beta-D-xylopyranoside (pNPX) substrate. The purification rate was found 215.76 fold with yield of 50.48% for the obtained β-xylosidase from Trichoderma harzianum (Thβ) and 92.39, 33.43% yield for the obtained β-xylosidase from Trichoderma viride (Tvβ). Molecular weights of Thβ and Tvβ enzymes were determined 20kDa and 25kDa, respectively, using SDS and Native PAGE analysis, and are formed in sub-unit. Optimum pH values of Thβ and Tvβ enzymes were 6.0; respectively, optimum temprature values were determined as 75°C and 65°C. The Km and Vmax values of Thβ enzyme were determined as 0.25 mM and 2500 EU, respectively; while for the Tvβ enzyme 0.5 mM and 2500 EU. In addition, the activities of purified β-xylosidase enzymes were determined against D-(+)-xylose which is a β-xylosidase inhibitor. It is determined that D-(+)-xylose inhibitor inhibited the Thβ enzyme mixed and the Tvβ enzyme competitively. The IC50 and Ki values for D-(+)-xylose Thβ enzyme activity were calculated according to an order as 1.1x10-1 mM and 1.10x10-3/5.57x10-3; respectively IC50 and Ki values of Tvβ enzyme as 7.1x10-2 mM and 2.64x10-4±1x10-5.

Benzer Tezler

  1. Trichothecium roseum'dan Katı Substrat Fermentasyonu ile β-glukosidaz Üretimi, Saflaştırılması ve Biyokimyasal Özellikleri

    β-glucosidase Production, Purification and Biochemical Properties of Trichothecium roseum by The Solid State Fermentation

    EMRE YANIK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2020

    BiyoteknolojiBalıkesir Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ SELMA ÇELEN YÜCETÜRK

    PROF. DR. AYŞE DİLEK AZAZ

  2. Katı substrat fermentasyonu ile lakkaz üretimi

    Laccase production by solid substrate fermentation

    FİLİZ KURU

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2007

    Biyolojiİnönü Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. MURAT ÖZMEN

    PROF.DR. ÖZFER YEŞİLADA

  3. Katı faz fermentasyonu (KSF) tekniğiile bacillus subtilis ATCC 6051'dden ?-amilaz üretimi

    ?-amylase production from Bacillus subtilis ATCC 6051 wiith solid state fermentation (SSF)

    YUSUF ÖNEN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    BiyolojiDicle Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. FİKRET UYAR

  4. Farklı Aspergillus türü funguslarda selüloz ve hemiselüloz parçalayıcı enzim aktivitelerinin incelenmesi

    Screening of cellulose and hemicellulose enzyme activities in different A456160spergillus species

    ASLI TANGÜNÜ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    BiyokimyaBalıkesir Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. AYŞE DİLEK AZAZ

  5. Bazı Bacillus türlerininin ekstrasellüler enzimlerinin araştırılması

    The study of extracellular enzymes of some Bacillus species

    NURULLAH AKCAN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2009

    BiyoteknolojiDicle Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. FİKRET UYAR