Development of ASC specks as carriers / adjuvants for novel vaccine technology
ASC zerreciklerinin yeni aşı teknolojisi için taşıyıcı ve adjuvan olarak geliştirilmesi
- Tez No: 507024
- Danışmanlar: PROF. DR. NESRİN ÖZÖREN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Allerji ve İmmünoloji, Biyoloji, Biyoteknoloji, Allergy and Immunology, Biology, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2018
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 102
Özet
Patojen ilişkili moleküler kalıplar (PAMPlar) ve tehlike ilişkili moleküler kalıplar (DAMPlar) sitoplazmada bulunan NOD - benzeri reseptörler tarafından algılanırlar. NLRP3 ve AIM2 gibi pro - enflamatuar NLR proteinleri inflamazom kompleksinin oluşmasını başlatırlar. Adaptör protein ASC, NLR proteinleri ve inaktif kaspaz-1 proteini arasında köprü görevi görüp kaspaz 1 proteinin aktifleşmesini sağlamasıyla hücrenin enflamasyon ve piroptotik hücre ölümü yolaklarında önemli bir rol oynamaktadır. Uyarılmamış hücrelerde sitoplazmada dağınık halde bulunan ASC proteini, hücre uyarıldıktan sonra küresel 'ASC zerreciğini' oluşturur. ASC zerrecikleri aynı zamanda hücrede yüksek dozlarda ifade ettirilerek yapay yollarla da oluşturabilmektedir. Grubumuz daha önce yapay yollarla üretilen ASC zerreciklerinin 37 C de 30 günden daha fazla stabil olarak kaldığını raporlamıştır. Bu tez kapsamında da, ASC zerreciklerinin bağışıklığı tetikleyici etkisini in vivo olarak araştırılmıştır. İlk olarak model antijenin, ovalbumin, kesik formuna bağlı olan tOVA-ASC zerreciklerini ve mCherry proteine proteinine bağlı olan mCherry-ASC zerreciklerini görüntüleme sistemlerinde kullanmak üzere saflaştırdık. Aynı zamanda, ASC zerreciklerinin makrofajlar tarafından yutulup ayrıştırıldığını gösterdik. Buna ek olarak, THP-1 makrofajları ASC zerrecikleriyle uyarıldığında enflamatuar IL-1beta, IL-6 and TNF-alfa sitokinlerini salgılamaktadır. İkinci olarak, tOVA-ASC enjeksiyonlarının yabanıl C57BL/6 fare suşunun dalak hücrelerinden tip 1 ve tip 2 T lenfositlerine özgü sitokinlerini salgılattığını gösterdik. Üçüncü olarak, tOVA-ASC enjeksiyonlarının C57BL/6 fare suşunda oluşturulan EG7-OVA tümörlerini ya tamamen yok ettiğini ya da küçülmelerine sebep olduğunu gösterdik. Son olarak, intraperitoneal yoldan enjekte edilen mCherry-ASC zerreciklerinin ikincil lenf organlarına gittiğini gösterdik.
Özet (Çeviri)
Pathogen associated molecular patterns (PAMPs) and danger-associated molecular patterns (DAMPs) are sensed by nucleotide binding oligomerization domain-like receptor (NLR) family of proteins in the cytosol. Certain NLRs like NLRP3 and AIM2 induce formation of inflammasome complexes. The adaptor protein ASC has critical functions in inflammatory and pyroptotic signaling pathways by forming a bridge between pro-caspase-1 via CARD-CARD interactions and NLR's via pyrin-pyrin interactions and by activating caspase-1. In unstimulated cells, ASC is soluble in the cytosol; however, upon stimulation it forms globular speck structures, called as `ASC speck'. ASC specks can also be produced arti cially via overexpression in HEK293FT cells. Our group has previously show the stability of arti cially produced ASC specks in PBS at 37 oC for more than 30 days. In this thesis, we investigated the immune stimulatory role of ASC specks in vivo. In our preliminary studies, we managed to purify antigen-bound ASC specks with truncated form OVA and also with mCherry protein as a tracker for imaging systems. We have shown that puri ed ASC specks engulfed and degraded by macrophages. Moreover, we documented that stimulation of THP-1 macrophages with puri ed ASC specks induces secretion of inflammatory cytokines; IL-1 , IL-6 and TNF- . Secondly, we have shown that tOVA-ASC speck injections cause secretion of type I and type II cytokines from splenocytes of the immunized wild type C57BL/6 mice. Thirdly, we showed that tOVA-ASC injections cause complete eradication or reduction in size of the EG7-OVA tumor in C57BL/6 mice. Lastly, we have shown that intraperitoneally injected mCherry-ASC specks goes to secondary lymph nodes.
Benzer Tezler
- Development of a new vaccine technology using the carrier/adjuvant properties of ASC specks
ASC zerreciklerinin taşıyıcı/adjuvan özellikleri kullanılarak yeni aşı teknolojisi geliştirilmesi
AYLİN ALKAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2019
BiyoteknolojiBoğaziçi ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NESRİN ÖZÖREN
- In vivo studies of asc specks as antigen delivery vehicles
Asc zerrelerinin antijen taşıyıcı özelliğinin ın vıvo çalışmalar ile gösterilmesi
SEDA YAŞA
Yüksek Lisans
Türkçe
2016
BiyolojiBoğaziçi ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NESRİN ÖZÖREN
- Effect of immunosuppressive oligodeoxynucleotide A151 on inflammasome activation pathways
İmmün baskılayıcı sentetik oligodeoksinükleotid A151'in enflamazom aktivasyon yolaklarına olan etkisi
NAZ SÜRÜCÜ
Yüksek Lisans
İngilizce
2017
BiyolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MAYDA GÜRSEL
- ASC proteininin Aß ve AL tipi amiloid yapıları ile birlikteliğinin araştırılması
Investigation of the co-localization of ASC protein with Aß and AL type amyloid fibrils
ZİHNİ EKİM TAŞKIRAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2007
Tıbbi BiyolojiHacettepe ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ENGİN YILMAZ
- Investigation of the possible effect of intragenic MEFV gene CpG island methylation on mRNA transcription and pyrin localization
MEFV geni intragenik CpG adacığı metilasyonunun mRNA transkripsiyonu ve pyrin lokalizasyonu üzerindeki olası etkisinin araştırılması
GÖKÇE ERDEM
Doktora
İngilizce
2017
Genetikİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. EDA TAHİR TURANLI