Geri Dön

Preparation of ascorbate oxidase enzyme electrode and its usage for L-ascorbic acid determination

Askorbat oks1daz enz1m elektrodu hazırlanması ve l-askorb1kas1t tayininde kullanılması

  1. Tez No: 50707
  2. Yazar: EROL AKYILMAZ
  3. Danışmanlar: PROF.DR. ERHAN DİNÇKAYA
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyomühendislik, Bioengineering
  6. Anahtar Kelimeler: Ascorbate Oxidase, L- Ascorbic Acid, Enzyme Electrodes, Biosensors
  7. Yıl: 1996
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Ege Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 54

Özet

Bu tezde, salatalıktan (Cucumis sativus L.) izole edilip kısmi olarak saflaştınlan Askorbat oksidaz [(L-Askorbat: oksijen oksidoredüktaz) (EC 1.10.3.3)] glutaraldehid yardımıyla jelatin ile çapraz bağlanarak, çözünmüş oksijen probu membranı üzerinde bir biyoaktif tabaka oluşturuldu ve L-askorbik aside duyarlı bir askorbat oksidaz enzim eiektrodu geliştirildi. Ölçümler enzimatik reaksiyon uyarınca L-askorbik asit konsantrasyonu ile orantılı olarak tüketilen oksijen düzeyinin belirlenmesi yoluyla çizilen standard grafikler yardımıyla gerçekleştirildi. Hazırlanan biyosensörün optimizasyon çalışmalarında en uygun askorbat oksidaz, jelatin ve glutaraldehid oranlan sırasıyla 24,8 U/cm^, 5,9 mgjelatin/cm^ ve %2,5 olarak bulundu. Optimum çalışma ortamı olarak 50 mM'lik pH:7,5 olan fosfat tamponunun kullanılması ve ölçümlerin 35°C de yapılması gerektiği sonucuna varıldı. Geliştirilen biyosensörün karakterizasyonu amacıyla yapılan çalışmalar sonucunda 5,0xl0~5 - 1,2x10“ 3 M L-askorbik asit konsantrasyon aralığında doğrusal sonuçların alınabildiği tespit edildi. Tekrarlanabilirlik denemelerinde (n=ll), 4,0xl0”4 MTlık L-askorbik asit konsantrasyonu için ortalama değer (x)=3,99xl0"4 M, standard sapma (S.S):±0,001 ve varyasyon katsayısı (V.K):%0,251 olarak bulundu. Ayrıca substrat spesifikliği, depo kararlılığı ve bazı maddelerin girişim etkileri araştırıldı. Son olarak bazı meyva ekstraktları ve vitamin tabletlerinde, geliştirilen biyosensörle L-askorbik asit tayini yapıldı ve elde edilen sonuçlar ve metodun duyarlılığı 2,6 diklorofenolindofenol metodu ile kıyaslandı. Anahtar ' Kelimeler : Askorbat Oksidaz, L-Askorbik Asit, Enzim Elektrodlan, Biosensörler

Özet (Çeviri)

In this thesis, ascorbate oxidase [(L-Ascorbate:oxygen oxidoreductase) (EC1. 10.3.3)], isolated and partially purified from cucumber (Cucumis sativus L.) was crosslinked with gelatine by using glutaraldehyde and a bioactive layer was formed on the dissolved oxygen probe, therefore, ascorbate oxidase enzyme electrode which was sensitive for L-ascorbic acid determination was developed. Measurements were carried out by standard curves which were obtained by the determination of consumed oxygen level, related to L-ascorbic acid concentration in the enzymatic reaction. In the optimization studies of the biosensor prepared, the most suitable ascorbate oxidase, gelatine and glutaraldehyde ratios were determined as 24.8 U/cm-, 5.9 mggelatine/cm^ and, 2.5% respectively. The phosphate buffer (50 mM, pH:7.5) and 35° C were established as providing the optimum conditions. The characterization studies proved a linearity in the ascorbic acid concentration range 5.0xl0~5-1.2xl0~3 M. The reproducibility experiments (n=ll) revealed that for 4x10-4 M L-ascorbic acid, the average value (x) was 3.99x10-4 M,standard deviation (S.D) was ±0.001 and, variation coefficient (C.V) was 0.251%. Moreover, substrate specification, storage stability and the interference effects of some substances were investigated. Finally, L-ascorbic acid determination in some fruit extracts and vitamin tablets was carried out. Both the results obtained and the sensitivity of the method were compared with the 2,6 dichlorophenolindophenol method.

Benzer Tezler

  1. Tavşan karaciğer paraoksonaz enziminin saflaştırılarak kinetik özellikleri, endojen substratları ve antioksidan özelliklerinin araştırılması.

    Purification of rabbit liver paraoxonase enzyme and investigation of its kinetic properties, endogenous substrates and antioxidant properties.

    TÜLİN BAYRAK

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2009

    BiyokimyaHacettepe Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. EDİZ DEMİRPENÇE

  2. 'Click' kimyası ile yeni ftalosiyanin türevlerinin sentezi

    Synthesize of novel phthalocyanine derivatives with click chemistry

    YUSUF YILMAZ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    KimyaYıldız Teknik Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. M. KASIM ŞENER

  3. The analysis of food additives and inorganic anions in bread by ion chormatographic method with conductivity detector

    Ekmekte bulunan gıda katkı maddleri ve inorganik anyonların iletkenlik dedektörlü iyon kromatografik yöntem ile tayini

    ZEYNEP MELİS ARKAN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2020

    Kimyaİstanbul Teknik Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. GÜLÇİN YILMAZ

  4. Kitozanın yumuşak doku iyileşmesindeki etkisinin deneysel olarak incelenmesi ve hücre kültürü ile değerlendirilmesi

    Experimental evaluation of the effect of chitosan on the soft tissue healing and evaluation with cell culture

    MUHARREM GÜVERCİN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2004

    Sağlık EğitimiMarmara Üniversitesi

    Ağız, Diş, Çene Hastalıkları ve Cerrahisi Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. KAMİL GÖKER

  5. Beyazlatma sonrası farklı yüzey işlemlerinin mine bağlanma dayanımı üzerine etkisi

    The effect of different post-bleaching surface treatments on enamel bond strength

    BÜŞRA ÇINAR

    Diş Hekimliği Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    Diş HekimliğiSivas Cumhuriyet Üniversitesi

    Restoratif Diş Tedavisi Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. DİĞDEM EREN