Geri Dön

Functional analysis of transgelin in breast cancer

Meme kanserinde transgelin geninin fonksiyonel analizi

PDF İndir

  1. Tez No: 507313
  2. Yazar: NAZLI DEĞER
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. IŞIK YULUĞ
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Genetik, Biology, Genetics
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2018
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: İhsan Doğramacı Bilkent Üniversitesi
  10. Enstitü: Mühendislik ve Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 133

Özet

Transgelin (TAGLN) aktin proteinine bağlanan bir proteindir. Fibroblastlarda ve düz kas hücrelerinde yüksek seviyede ifade edilir. Düz kas hücrelerinde, hareketlilik ve farklılaşmada görev alır ve stres liflerinin oluşumunda rol oynar. TAGLN geninin ifadesi, meme ve kolon kanseri dokularında promoter hipermetillenmesiyle düşürülmüştür ve TAGLN geni bu dokularda tümör baskılayıcı gen olarak davranmaktadır. Bununla birlikte, sinir kılıfı tümörleri üzerinde yapılan bir çalışmada, TAGLN geninin ifadesinin hipometilasyon ile artırıldığı ve bu dokularda, onkogen olarak davrandığı görülmüştür. Bildiğimiz kadarıyla, TAGLN geninin fonksiyonel etkisi daha önce meme karsinoma hücre hatlarında detaylı olarak çalışılmamıştır. Bu çalışmanın amacı, meme kanseri gelişiminde TAGLN geninin fonksiyonel rolünü ortaya çıkarmaktır. Bu sebeple, seçilen meme kanseri hücre hatlarında TAGLN geninin ifadesi azaltılmış ya da artırılmış ve sonrasında fonksiyonel analizler yapılmıştır. Meme kanseri hücre hatları seçilirken, hücre hatlarının alt tipleri, hücre göçü karakterleri, epitel ya da mezenkimal yapıda olma statüleri ve TAGLN geninin işlem yapılmamış hücrelerdeki ifade seviyeleri göz önüne alınmıştır. Bu sebeple, TAGLN genini orta seviyede ifade eden üçlü negatif mezenkimal MDA-MB-157 ve MDA-MB-231 hücreleri TAGLN geninin ifadesinin azaltılması için kullanılmıştır. Bu hücre hatları ve TAGLN genini az miktarda ifade eden HER2 pozitif ve epithel MDA-MB-361 hücreleri TAGLN geninin ifadesinin artırılması için kullanılmıştır. Immun floresan ve western blotlama analizleri MDA-MB-157 ve MDA-MB-231 hücrelerinde Vimentin ifadesinin TAGLN geninin ifadesiyle doğru orantılı olduğunu göstermiştir. Bu hücrelerden farklı olarak MDA-MB-361 hücrelerinde ters bir ilişki gözlenmiş ve TAGLN geninin yüksek ifadesiyle E-Cadherin ifadesinin arttığı ve Vimentin ifadesinin azaldığı görülmüştür. TAGLN geninin sessizleştirilmesi MDA-MB-157 hücrelerinde hücrelerin yayılma potansiyelini ve yaşama yeteneğini artırırken, TAGLN geninin ifadesinin artırılmasının bir etkisi olmamıştır. TAGLN geninin sessizleştirilmesi MDA-MB-231 hücrelerinde hücrelerin yayılma potansiyelini ve yaşama yeteneğini azaltırken, TAGLN geninin ifadesinin artırılması hücrelerin bu özelliklerinde artışa sebep olmuştur. MDA-MB-361 hücreleri TAGLN geninin yüksek ifadesinde daha farklı davranarak daha az koloni kurmuşlar ve yaşama yeteneklerinde azalma göstermişlerdir. MDA-MB-157 ve MDA-MB-231 hücrelerinde, TAGLN geninin sessizleştirilmesi hücre döngüsünde değişikliğe sebep olurken TAGLN geninin yüksek ifade edilmesi bir değişikliğe sebep olmamıştır. Sonuç olarak, TAGLN geni E-Cadherin ve Vimentin ifadelerini değiştirerek epitel mezenkimal değişim (EMD) üzerinde bir etkiye sahiptir ve bu etki ilgili hücre hatlarının orijinal morfolojisine bağlıdır. Bu çalışmada, TAGLN ifadesinin proliferasyon üzerinde etkisi de çalışılmıştır ve TAGLN geninin MDA-MB-157 ve MDA-MB-361 hücrelerinde tümör baskılayıcı gen olarak, MDA-MB-231 hücrelerinde ise onkogen olarak işlevi olduğu görülmüştür. Bu farklılık MDA-MB-231 hücrelerinin invasif karakterinden kaynaklanıyor olabilir. Bu sebeple altta yatan mekanizmalar incelenmelidir. Ayrıca, TAGLN geninin ifadesindeki değişimlerin hücrelerin tümör oluşturma ve metastaz kapasitelerinde bir değişikliğe neden olup olmadığını anlamak için hayvan deneyleri yapılabilir.

Özet (Çeviri)

Transgelin (TAGLN) is an actin-binding protein. It is highly expressed in fibroblasts and smooth muscle cells. In smooth muscle cells, it takes part in processes including motility and differentiation and also it has a role in the formation of stress fibers. TAGLN gene has been found to be downregulated by promoter hypermethylation in breast and colon tissues and in these tissues, it acted as a tumor suppressor gene. However, in a study on nerve sheath tumors, TAGLN expression was found as upregulated via hypomethylation and in nerve sheath tumors, it acted as a proto-oncogene. To the best of our knowledge, the functional effect of TAGLN gene expression has not been studied in detail in breast carcinoma cell lines. The aim of this study was therefore to identify the functional role of TAGLN in breast cancer development. Hence, TAGLN gene expression was silenced or overexpressed and functional analysis was performed in selected breast cancer cell lines. Breast cancer cell lines were chosen according to their subtypes such as basal, HER2 positive or triple negative; their migratory properties; epithelial or mesenchymal characteristics and the expression level of TAGLN. Therefore, triple negative and mesenchymal MDA-MB-157 cells and MDA-MB-231 cells that express TAGLN at medium level were selected to silence TAGLN expression. The same cell lines and HER2 positive and epithelial MDA-MB-361 cells which express TAGLN at very low level were selected to overexpress TAGLN gene. Immunofluorescence and western blot analysis showed that in MDA-MB-157 and MDA-MB-231 cells mesenchymal marker Vimentin expression is correlated with TAGLN gene expression level. On the contrary, a reverse relationship exists in MDA-MB-361 cells where E-Cadherin expression increased and Vimentin expression decreased in TAGLN overexpressing MDA-MB-361 cells. TAGLN silencing in MDA-MB-157 cells increased the cell spreading potential and viability capacity while TAGLN upregulated cells did not show any significant change. TAGLN silencing in MDA-MB-231 cells decreased the cell spreading potential and cell viability of the cells, TAGLN overexpression in MDA-MB-231 cells increased these properties of cells. MDA-MB-361 cells behaved differently with TAGLN overexpression; cells were able to form less colonies and cell viability decreased in TAGLN overexpressing cells. TAGLN gene silencing affected the cell cycles of MDA-MB-157 and MDA-MB-231 cells but TAGLN overexpression had no effect on the cell cycle. In conclusion, TAGLN expression has an effect on Epithelial to Mesenchymal Transition (EMT) by altering the expression of established EMT markers E-Cadherin and Vimentin and its effect is based on the original morphology of the respective cell lines. In this study, the effect of TAGLN expression on cell proliferation was also studied and TAGLN seems to be acting as a tumor suppressor in MDA-MB-157 and MDA-MB-361 cells and as an oncogene in MDA-MB-231 cells. This might be due to the invasive character of MDA-MB-231 cells and the underlying mechanisms for this outcome should be investigated. Also, in vivo experiments can be performed to see whether changes in the expression of TAGLN gene has a role in tumor formation or metastasis capacity of cells.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    409107

    Unmasking of epigenetically silenced genes and identification of transgelin as a potential methylation biomarker in breast cancer

    Meme kanserinde epigenetık olarak susturulmuş genlerin açığa çıkarılması ve transgelin geninin potansiyel bir metilasyon belirteçi olarak tanımlanması

    NİLÜFER SAYAR

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2015

    Biyolojiİhsan Doğramacı Bilkent Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. IŞIK YULUĞ

  2. Tez No

    713870

    B cell deficiency and anaemia caused by mutations in the murine atp11c gene

    Fare atp11c genindeki mutasyonların neden olduğu b hücre eksikliği ve anemi

    MEHMET YABAŞ

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2014

    Allerji ve İmmünolojiThe Australian National University

    İmmünoloji Ana Bilim Dalı

    DR. ANSELM ENDERS

    PROF. DR. CHRISTOPHER C. GOODNOW

  3. Tez No

    718233

    Analysis of the mammary gland specific effect of endothelin-1 in transgenic mice

    Başlık çevirisi yok

    NADİR GÜL

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2011

    BiyolojiHumboldt-Universität zu Berlin

    DR. RİCHARD LUCİUS

    PROF. DR. FRANZ THEURİNG

  4. Tez No

    387427

    Functional study of common bean isoliquiritigenin 2'-O- methyltransferase gene under salt stress

    Fasulye bitkisi 'isoliquiritigenin 2'-o- methyltransferase' geninin tuz stresi altında fonksiyonel analizi

    HARUN NİRON

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2015

    BiyolojiBoğaziçi Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MÜGE TÜRET

  5. Tez No

    338922

    Characterization of a novel R7-specific gene in the drosophila visual system

    Fotoalmaç-7 hücresine spesifik özgün genin sirke sineği görme sisteminde karakterizasyonu

    GÜNER KAÇMAZ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2013

    GenetikBoğaziçi Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ARZU ÇELİK FUSS

Geri Dön