Geri Dön

Analysis of interactions between beta-2 adrenergic receptor & beta arrestin-2 using förster resonance energy transfer (fret) method in live cells

Beta-2 adrenerjik reseptör ve beta arrestin-2 proteini arasindaki etkileşimin canli hücrelerde förster rezonans enerji transferi (fret) metodu kullanilarak analiz edilmesi

  1. Tez No: 572382
  2. Yazar: HÜSEYİN EVCİ
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. ÇAĞDAŞ DEVRİM SON, DR. ÖĞR. ÜYESİ ÖZGE ŞENSOY
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Biyoloji, Genetik, Biochemistry, Biology, Genetics
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2019
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 148

Özet

Hücreler birbiri ile veya etrafları ile reseptörler sayesinde iletişim halindedir. Reseptörler dışarıdan sinyal alıp bunu hücre içine iletirler. Sinyal hücre içine iletildikten sonra, reseptörler desensitizasyona veya endositoza uğrayarak sinyalin kesilmesi sağlanır. Reseptörlerin sinyali iletmesinden sonra, birçok reseptör fosforile olur ve bu fosforilasyon yeni protein-protein etkileşimlerine yol açarak reseptörün internalizasyonunu tetikler. Beta-2 Adrenerjik reseptörü için fosforilasyonu tanıyan protein Beta Arrestin-2 proteinidir. β2A reseptörünün C kuyruğundaki 4 amino asit bu reseptörün beta arrestin-2 proteini ile etkileşiminde önemli rol oynamaktadır. Bu tez çalışması kapsamında bilinen 4 amino asidin önemi, amino asitleri tek tek mutasyona uğratarak detaylı bir şekilde araştırılmıştır. Etkileşimin nicel analizini yapmak için FRET tekniği kullanılmıştır. β2AR üzerinde mutasyonlar yapılmış, mutasyonlardan sonra reseptör ve β-arrestin 2 proteini, mEGFP ve mCherry floresan proteinleri ile işaretlenmiştir. Reseptör 5 farklı bölgeden işaretlenirken, β-arrestin 2 proteini hem N hem de C terminusundan işaretlenmiştir. Reseptör ve β-arrestin 2 proteini farklı kombinasyonlarda Mus musculus Neuroblastoma-2a (N2a) hücrelerine transfekte edilmiştir. Proteinler arası etkileşimin görüntülenmesi için spinning disk konfokal mikroskobu ile görüntüler alınmıştır. FRET verimi ImageJ programının pixFRET eklentisi ile hesaplanmıştır. S355A hariç, tek amino asit mutasyonları yabanıl reseptörün FRET sinyalindan farkli sinyal vermemiştir. İki amino asit mutasyonlarından S355A-S356G β-arrestin 2 ile etkileşime girmezken, diğer çift normal reseptör ile aynı değerde FRET sinyali vermiştir. Bu çalışmanın sonuçları S355 ve S356 pozisyonlarının fosfarilasyonunun β2AR ve β-arrestin 2 arasındaki etkileşimi için önemli olduğunu vurgulamaktadır.

Özet (Çeviri)

Cells communicate with their environment and with other cells using receptors. Receptors take the signal from outside and transmit it into the cell. After transmitting the signal, receptors could be desensitized and/or endocytosed to stop signal transduction. Following receptor activation, many receptors got phosphorylated which will trigger additional protein-protein interactions that could lead to receptor internalization. In the case of Beta-2 Adrenergic receptor (β2AR), key protein recognizing the phosphorylation is Beta-Arrestin-2. It is known that at the C terminus of the β2AR, 4 amino acids get phosphorylated and play role in the interaction between β2AR and beta-arrestin-2. In this thesis, we planned to further investigate the importance of each one of these 4 amino acids on the interaction by site-directed mutagenesis. FRET technique was used for the quantitative analysis of the interaction in live cells. For this purpose, mutations were done on β2AR. After mutations, receptor and the β-arrestin 2 proteins tagged with both mEGFP and mCherry. The receptor was tagged from 5 different positions and β-arrestin 2 was tagged from N and C terminus. Receptor and β-arrestin 2 were co-transfected to Mus musculus Neuroblastoma-2a (N2a) cells in various combinations. Images were taken via spinning disc confocal microscopy to analyze the possible interactions, and FRET efficiency was calculated by using pixFRET Plugin for ImageJ software. Single residue mutations had FRET signal not different than wild-type receptor except for S355A. One of the double mutations (S355A-S356G) had no interaction with β-arrestin 2 while other pair had similar FRET signal with wild type receptor. Our results suggest the phosphorylation of S355 and S356 is very important for the interaction between β2AR and β-arrestin 2.

Benzer Tezler

  1. Deksmedetomidinin zebra balığı amiloid beta toksisitesi modelindeki davranışsal etkilerinin incelenmesi

    Investigation of behavioral effects of dexmedetomidine in the zebrafish amyloid beta toxicity model

    NİLAY ÇAKMAK

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    Anestezi ve ReanimasyonDokuz Eylül Üniversitesi

    Anesteziyoloji ve Reanimasyon Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. LEYLA İYİLİKÇİ KARAOĞLAN

    DOÇ. DR. HALE AKSU ERDOST

  2. Mezenkimal kök hücre-kanser hücresi ko-kültürü sonrası TGF-βeta ve CxCL12 sinyal yolaklarındaki değişimin araştırılması

    Determination of TGF-beta and CxCL12 signaling pathway changes after mesenchymal stem cell-cancer cell co-culture

    ŞEFİKA ÖZCAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    BiyolojiHacettepe Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MEHMET ALİ ONUR

  3. Beta vulgaris ekstraktının fitokimyasal içeriğinin ve moleküler doking destekli biyolojik fonksiyonlarının araştırılması

    Investigation of phytochemical content and molecular docking supported biological functions of beta vulgaris extract

    ÖZGE ÜST

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    BiyokimyaGiresun Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. EMİNE YALÇIN

  4. Voltaj bağımlı sodyum kanallarına spesifik toksinlerin etkisinin yapısal olarak incelenmesi

    A structural analysis of the effect of specific toxins on voltage dependent sodium channels

    SELİN SEZER

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Biyomühendislikİstanbul Medeniyet Üniversitesi

    Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ SALİHA ECE ACUNER ZORLUUYSAL

  5. Asetil-11-keto-beta-bosvelik asitin (akba) in vitro koşullarda kemik iliği kaynaklı mezenkimal kök hücre ile ortak kültüre edilen anaplastik tiroid kanser hücreleri üzerine kanser karşıtı ve sitoprotektif etkilerinin incelenmesi

    The investigation into the anticancer and cytoprotective effects of acetyl-11-keto-beta-boswellic acid (akba) on anaplastic thyroid cancer cells co-cultured with bone marrow-derived mesenchymal stem cells in vitro conditions

    AYŞENUR KAYA

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    GenetikKocaeli Üniversitesi

    Kök Hücre ve Doku Yenilenmesi Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ GÜLÇİN GACAR