Analysis of interactions between beta-2 adrenergic receptor & beta arrestin-2 using förster resonance energy transfer (fret) method in live cells
Beta-2 adrenerjik reseptör ve beta arrestin-2 proteini arasindaki etkileşimin canli hücrelerde förster rezonans enerji transferi (fret) metodu kullanilarak analiz edilmesi
- Tez No: 572382
- Danışmanlar: DOÇ. DR. ÇAĞDAŞ DEVRİM SON, DR. ÖĞR. ÜYESİ ÖZGE ŞENSOY
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biyoloji, Genetik, Biochemistry, Biology, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2019
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 148
Özet
Hücreler birbiri ile veya etrafları ile reseptörler sayesinde iletişim halindedir. Reseptörler dışarıdan sinyal alıp bunu hücre içine iletirler. Sinyal hücre içine iletildikten sonra, reseptörler desensitizasyona veya endositoza uğrayarak sinyalin kesilmesi sağlanır. Reseptörlerin sinyali iletmesinden sonra, birçok reseptör fosforile olur ve bu fosforilasyon yeni protein-protein etkileşimlerine yol açarak reseptörün internalizasyonunu tetikler. Beta-2 Adrenerjik reseptörü için fosforilasyonu tanıyan protein Beta Arrestin-2 proteinidir. β2A reseptörünün C kuyruğundaki 4 amino asit bu reseptörün beta arrestin-2 proteini ile etkileşiminde önemli rol oynamaktadır. Bu tez çalışması kapsamında bilinen 4 amino asidin önemi, amino asitleri tek tek mutasyona uğratarak detaylı bir şekilde araştırılmıştır. Etkileşimin nicel analizini yapmak için FRET tekniği kullanılmıştır. β2AR üzerinde mutasyonlar yapılmış, mutasyonlardan sonra reseptör ve β-arrestin 2 proteini, mEGFP ve mCherry floresan proteinleri ile işaretlenmiştir. Reseptör 5 farklı bölgeden işaretlenirken, β-arrestin 2 proteini hem N hem de C terminusundan işaretlenmiştir. Reseptör ve β-arrestin 2 proteini farklı kombinasyonlarda Mus musculus Neuroblastoma-2a (N2a) hücrelerine transfekte edilmiştir. Proteinler arası etkileşimin görüntülenmesi için spinning disk konfokal mikroskobu ile görüntüler alınmıştır. FRET verimi ImageJ programının pixFRET eklentisi ile hesaplanmıştır. S355A hariç, tek amino asit mutasyonları yabanıl reseptörün FRET sinyalindan farkli sinyal vermemiştir. İki amino asit mutasyonlarından S355A-S356G β-arrestin 2 ile etkileşime girmezken, diğer çift normal reseptör ile aynı değerde FRET sinyali vermiştir. Bu çalışmanın sonuçları S355 ve S356 pozisyonlarının fosfarilasyonunun β2AR ve β-arrestin 2 arasındaki etkileşimi için önemli olduğunu vurgulamaktadır.
Özet (Çeviri)
Cells communicate with their environment and with other cells using receptors. Receptors take the signal from outside and transmit it into the cell. After transmitting the signal, receptors could be desensitized and/or endocytosed to stop signal transduction. Following receptor activation, many receptors got phosphorylated which will trigger additional protein-protein interactions that could lead to receptor internalization. In the case of Beta-2 Adrenergic receptor (β2AR), key protein recognizing the phosphorylation is Beta-Arrestin-2. It is known that at the C terminus of the β2AR, 4 amino acids get phosphorylated and play role in the interaction between β2AR and beta-arrestin-2. In this thesis, we planned to further investigate the importance of each one of these 4 amino acids on the interaction by site-directed mutagenesis. FRET technique was used for the quantitative analysis of the interaction in live cells. For this purpose, mutations were done on β2AR. After mutations, receptor and the β-arrestin 2 proteins tagged with both mEGFP and mCherry. The receptor was tagged from 5 different positions and β-arrestin 2 was tagged from N and C terminus. Receptor and β-arrestin 2 were co-transfected to Mus musculus Neuroblastoma-2a (N2a) cells in various combinations. Images were taken via spinning disc confocal microscopy to analyze the possible interactions, and FRET efficiency was calculated by using pixFRET Plugin for ImageJ software. Single residue mutations had FRET signal not different than wild-type receptor except for S355A. One of the double mutations (S355A-S356G) had no interaction with β-arrestin 2 while other pair had similar FRET signal with wild type receptor. Our results suggest the phosphorylation of S355 and S356 is very important for the interaction between β2AR and β-arrestin 2.
Benzer Tezler
- Deksmedetomidinin zebra balığı amiloid beta toksisitesi modelindeki davranışsal etkilerinin incelenmesi
Investigation of behavioral effects of dexmedetomidine in the zebrafish amyloid beta toxicity model
NİLAY ÇAKMAK
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2022
Anestezi ve ReanimasyonDokuz Eylül ÜniversitesiAnesteziyoloji ve Reanimasyon Ana Bilim Dalı
PROF. DR. LEYLA İYİLİKÇİ KARAOĞLAN
DOÇ. DR. HALE AKSU ERDOST
- Mezenkimal kök hücre-kanser hücresi ko-kültürü sonrası TGF-βeta ve CxCL12 sinyal yolaklarındaki değişimin araştırılması
Determination of TGF-beta and CxCL12 signaling pathway changes after mesenchymal stem cell-cancer cell co-culture
ŞEFİKA ÖZCAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
BiyolojiHacettepe ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET ALİ ONUR
- Beta vulgaris ekstraktının fitokimyasal içeriğinin ve moleküler doking destekli biyolojik fonksiyonlarının araştırılması
Investigation of phytochemical content and molecular docking supported biological functions of beta vulgaris extract
ÖZGE ÜST
- Voltaj bağımlı sodyum kanallarına spesifik toksinlerin etkisinin yapısal olarak incelenmesi
A structural analysis of the effect of specific toxins on voltage dependent sodium channels
SELİN SEZER
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
Biyomühendislikİstanbul Medeniyet ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ SALİHA ECE ACUNER ZORLUUYSAL
- Asetil-11-keto-beta-bosvelik asitin (akba) in vitro koşullarda kemik iliği kaynaklı mezenkimal kök hücre ile ortak kültüre edilen anaplastik tiroid kanser hücreleri üzerine kanser karşıtı ve sitoprotektif etkilerinin incelenmesi
The investigation into the anticancer and cytoprotective effects of acetyl-11-keto-beta-boswellic acid (akba) on anaplastic thyroid cancer cells co-cultured with bone marrow-derived mesenchymal stem cells in vitro conditions
AYŞENUR KAYA
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
GenetikKocaeli ÜniversitesiKök Hücre ve Doku Yenilenmesi Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ GÜLÇİN GACAR