Geri Dön

Investigating the effects of 5,10-methylenetetrahydrofolate reductase C677T polymorphism on human mesenchymal stem cells by using CRISPR/CAS9 system as A gene editing tool

İnsan mezenkimal kök hücrelerinde CRISPR/CAS9 genom düzenleme yöntemi ile 5,10- metilentetrahidrofolat redüktaz C677T zpolimorfizm etkisinin araştirilmasi

PDF İndir

  1. Tez No: 594405
  2. Yazar: BURCU TALUĞ
  3. Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ ZEYNEP TOKCAER KESKİN, DR. ÖĞR. ÜYESİ EMRE DENİZ
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biyoteknoloji, Genetik, Biology, Biotechnology, Genetics
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2019
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Acıbadem Mehmet Ali Aydınlar Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Medikal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 194

Özet

5,10-Metilenetrahidrofolat redüktaz (MTHFR) enzimi folat metabolizmasında önemli bir rol oynar ve C677T tekli nükleotit polimorfizmi(TNP), Türk popülasyonunda en sık görülen mutasyondur ve ilgili enzimin aktivitesinin azalmasına neden olur. Bu polimorfizm yüksek homosistein seviyeleri ile birlikte, literatürdeki birçok farklı hastalıkla ilişkilendirilmiştir. Ayrıca kemik hastalıklarının bir göstergesi olarak kabul edilir ve kemik yoğunluğunun azalmasına yol açarak kemik iliği kaynaklı mezenkimal kök hücrelerde (KİMKH'ler) apoptozise neden olan osteoklast oluşumunu tetikler. MKH'lerin başlıca kemik, kıkırdak ve adipoz doku rejenerasyon kaynağı olduğu bilindiğinden, MTHFR C677T polimorfizmi ile MKH farklılaşma kapasitesi arasında bir bağlantı olabileceği düşünülmüştür. Bu nedenle bu projede MTHFR C677T polimorfizminin MKH canlılığı, morfoloji, fizyoloji ve farklılaşma kapasitesi üzerine etkilerini araştırmayı hedefliyoruz. Bu amaçla, MTHFR geni C677T TNP'inin ilgili nükleotit pozisyonu için vahşi tip (C / C), heterozigot (C / T) ve homozigot (T / T) olan kemik iliği kaynaklı birincil insan mezenkimal kök hüclererini (KİMKH) elde ettik. Birincil sonuçlarımız, bu hücrelerin farklılaşma kapasitelerine göre farklı olduğunu ortaya koydu. Ancak bu hastaların farklı genetik geçmişlerine bağlı olabilir. Genetik arka plandaki farklılıkları ortadan kaldırmak, C677T polimorfizmini tanıtmak ve istenen varyatı CRISPR/Cas9 genome düzenleme teknolojisini kullanarak KİMKH'lerin genomuna entegre etmek için bir kılavuz RNA ve bir şablon tek iplikli oligo nükleotidi (ssODN) tasarladık. Ancak hücreler tek hücre olarak elde edilmeye çalışıldığında elde edilemediler ve öldüler. Sonuç olarak, bu çalışma MTHFR C677T SNP'sinin KİMKH'lerin farklılaşma potansiyellerini etkilediğini gösterdi ve altında yatan nedenlerin ortaya çıkarılabilmesi için ileri çalışmaların gerekliliğini ortaya koydu.

Özet (Çeviri)

5,10-Methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) enzyme plays an important role in folate metabolism and C677T single nucleotide polymorphism (SNP) is the most frequently seen mutation in Turkish population and it causes MTHFR enzyme activity to decrease. This SNP has been linked to many different diseases in the literature and accompanied with high homocysteine levels. The latter is considered as an indicator of bone diseases and triggers the osteoclast formation, leading to a decrease in bone density and causes apoptosis in bone marrow derived mesenchymal stem cells (MSCs). As MSCs are known to be the major source of bone, cartilage and adipose tissue regeneration, we hypothesized that there could be a link between MTHFR C677T polymorphism and MSC differentiation capacity. That is why in this project, we aim to investigate the effects of MTHFR C677T polymorphism on MSC viability, morphology, physiology and differentiation capacity. For this purpose, we obtained primary human bone marrow derived MSCs (BMMSCs) that are wild type (C/C), heterozygous (C/T) and homozygous (T/T) for MTHFR gene at the corresponding nucleotide position of C677T SNP. Our primary results revealed that these cells were different by their differentiation capacities. However, this may be due to different genetic backgrounds of the patients. To eliminate the differences in genetic background we designed a guide RNA and a template single stranded oligo nucleotide (ssODN) to introduce C677T polymorphism to the genomes of BMMSCs using CRISPR/Cas9 genome editing technology. However, the cells couldn't be obtained as single cells and died. As a result, this study was able to show that the C677T SNP of MTHFR has interference in the differentiation potentials of BMMSCs and it needs further work to investigate the underlying reasons.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    684481

    Investıgatıng the effects of 5,10 methylenetetrahydrofolate reductase C677T polymorphısm on dıfferentıatıon of human mesenchymal stem cells

    İnsan mezenkimal kök hücrelerinde 5,10-metilentetrahidrofolat redüktaz C677T polizmorfizm etkisinin farklılaşma üzerine etkisinin incelenmesi

    RENGİM VURAL

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2021

    Moleküler TıpAcıbadem Mehmet Ali Aydınlar Üniversitesi

    Moleküler ve Translasyonel Biyotıp Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ ZEYNEP TOKCAER KESKİN

  2. Tez No

    275471

    Antikoagülan kullanım endikasyonu olan hastalarda VKORC1 C1173T ve G-1639A gen polimorfizmlerinin farmakogenetik etkisinin araştırılması

    Investigation of pharmacogenetic effects of VKORC1 C1173T and G-1639A gene polymorphisms in patients with indications for the use of anticoagulant drugs

    FİLİZ ÇETİNKAYA

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    BiyoteknolojiAnkara Üniversitesi

    Temel Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AHMET RÜÇHAN AKAR

  3. Tez No

    541440

    Hipertansiyon hastalarında MTHFR gen varyasyonları ve homosistein düzeylerinin karotid-intima-media kalınlaşması üzerine etkilerinin incelenmesi

    Investigation of effects on carotid intima media thickness of mthfr gene variations and homocysteine levels in patients with hypertension

    SİBEL KURAŞ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    Moleküler Tıpİstanbul Üniversitesi

    Moleküler Tıp Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SADRETTİN PENÇE

  4. Tez No

    307152

    Çocuk ve ergende dikkat eksikliği hiperaktivite bozukluğu'ndaki metilentetrahidrofolat redüktaz geni polimorfizminin moleküler genetik yöntemle araştırılması

    Molecular genetic investigation of methylenetetrahydropholate reductase gene polymorphism in children and adolescents with attention deficit hyperactivity disorder

    ALGUN TÜFEKÇİ

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2009

    Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıUludağ Üniversitesi

    Çocuk Ruh Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. YEŞİM TANELİ

  5. Tez No

    201107

    Karyotipi normal olarak belirlenen gebelik kayıplarının etiyolojisinde faktör II, faktör V, metilentetrahidrofolat redüktaz gen mutasyonlarının etkisi

    The effect of factor II, factor V, methylenetetrahydrofolate reductase gene mutations on the etiology of spontaneous abortions which have normal karyotype

    ELİF PALA

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2007

    Moleküler TıpGazi Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. BARBAROS BALABANLI

Geri Dön