Ökaryot Elongasyon Faktörü 2 (EF-2)'nin etki mekanizmaları
Başlık çevirisi mevcut değil.
- Tez No: 60484
- Danışmanlar: PROF. DR. ENGİN BERMEK
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyofizik, Biophysics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 1988
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyofizik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 104
Özet
V. ÖZEI Çalışmada sıçan karaciğeri elongasyon faktörü 2 (EP-2)1 nin guanin nükleotit“bağlama ”bölgesinin yapısının aydınlatıl-- ması için ; gerekli koşullar belirlendibEF-2'ye“affinity labelling”yoluyla bağlanan oksitlenmiş ĞTP» nin (GTPoks' un) serbest GTP ile yavaş bir kinetikle de olsa değişime girdiğinin görülmesi üzer ine, EE-2.GIP.. arasındaki bağın daha kalımlı bir duruma getirilmesine çalışı İdi. HaBH, varlığındaki indirge me işleminin bağın kalımlılığını büyük Ölçüde arttırdığı bulu-. narak ve £^P0vsIuI1 EF-2'ye bir Schiff bazının oluşumu üzerinden bağlandığı sonucuna varı İdi, Kalım İılaştırı İmiş EP-2.GTPolj:s bi- leş iği daha sonra tr ipsinle sindirilerek radyoaktif G-2P0vs'u taşıyan triptik fragment kromatografik işlemlerle saf laştırıl- dı.Dansil klorür işlemiyle saf la ş tın lan peptidin jtfB^-ucundaki amino asidin arginin olduğu belirlendi. Çalışmanın ikinci bölümünde sıçan karaciğer özütünde.EF-2'nin ABP-ribozi İlenmesini sağ lıyan endojen bir transferase, (eADPR-transferaz) etkin Ifğfi saf laştırılarak, tanımlandı. eADPR-. transferâzm, saflaştırma boyunca, EE-2 etkinliğiyle birlikte kaldığı, izoelektrik odaklama iş lemiyle_ homojen ; duduma getiri- * len EP-2 kesiminde de eA3DPR-tna,nsferaz etkinliğinin saflaştır-ma için kullanılan mikrozomüstü sıvı (S-100) kesimim kıyasla 1621 kat -zenginleşmiş olarak bulunduğu saptandı. Homo j en EF-2 proteini natif ya da denatürleyici koşullarda poliakrilamit elektroforez işlemine tutulduğunda eADPR-transferaz etkinliği gene EF-2*ye karşılık gelen protein bandında bulundu. Bu bulgu lardan eADPR-transferaz etkinliğinin EP-2'nin intrinsik bir özelliği olabileceği sonucuna varı İdi.EP-2 * yi özgün bir şekil de inaktif leştiren GuoPP(C5H2)Poks ya da îî-etilmaleyimidin (MEM' in)“eADPR-transferaz etkinliğini de ortadan kaldıntfası bu görüşü destekledi. eADPR-transferaz etkinliğinin reaksiyonda kullanılan NAD* m yaklaşık 500 katı nikotinamit derişimi var lığında ' durduğu ve ADP-ribozi İlenmenin s-100 kesiminin varlığın da geri dönüştüğü gözlendi. Bu bulgular EP-2'nin eADP-ribozil- lenmesinin hücrede düzenlenmesinde rol oynayabilecek mekaniz malar olarak tartışıldı. Çalışmanın son bölümünde ise değişik ortam koşullarının (serumsuz ortam, konfluent durumun yol açtığı kontakt inhibis- yonun ve ısının (42°C) ) hücrelerde eADPR-transferaz etkinli-. ? ğini arttırıcı bir. etkisi olup olmadığı araş tın İdi. Konfluent hücrelerde, b,u etkinliğin az ölçüde artmış olduğu, ayrıca kon- fluent' ve özellikle 42°0'ta tutulmuş hücrelerde, difteri toksi nine bağlı ADP-rîböZ'Öîeteedetki artışın gösterdiği gibi,EP-2 miktarının önemli ölçüde artmış olduğu bulundu. Bu gözlemlerden hareketle EP-2'nin bir ”stress" proteini oljnası olasılığı üze'riıide duruldu.
Özet (Çeviri)
H, SUMMARY In this investigation, conditions required for eluci dating the structure of the guanine nucleotide binding site of rat liver elongation factor 2 (EF-2) have“been determined. After having observed the slow exchange of.oxidized (HOP (GTPoy which was bound* to EP-2 by affinity labelling, with free GTP. studies were Carried out -to render the bond between EE-2 and G2P more stable. She stability of the bond was found to increase, in the presence of NaBIL under reducing conditions and it was concluded that G!I!P _ binds to EP-2 by forming a Schiff base. The stabilized EP-2.G!EPrt_ complex was then digested with trypsin and the tryptic fragment carrying the radioactive ly labelled GQ}P-”was purified by chromato- VjjL graphy.The peptide purified by the dansyl chloride technique was found to contain the amino acid arginine on its ^-terminal. In the second part of this, study, an endogeneous transferase ( eADPR-transf erase) activity which funotions in the ADP-ribosylation of EP-^. rças purified and characterized.from rat liver extraets.lt was observed that the eADPR- *\-:'..-*.' transferase and EF-2 activities co-purified. îhe ADPR- transfer- ase activity was found to be enriched 1621 fold in the EF-2 fraction purified to homogenity on isoelectric focusing - *..., *:H, SUMMARY In this investigation, conditions required for eluci dating the structure of the guanine nucleotide binding site of rat liver elongation factor 2 (EF-2) have“been determined. After having observed the slow exchange of.oxidized (HOP (GTPoy which was bound* to EP-2 by affinity labelling, with free GTP. studies were Carried out -to render the bond between EE-2 and G2P more stable. She stability of the bond was found to increase, in the presence of NaBIL under reducing conditions and it was concluded that G!I!P _ binds to EP-2 by forming a Schiff base. The stabilized EP-2.G!EPrt_ complex was then digested with trypsin and the tryptic fragment carrying the radioactive ly labelled GQ}P-”was purified by chromato- VjjL graphy.The peptide purified by the dansyl chloride technique was found to contain the amino acid arginine on its ^-terminal. In the second part of this, study, an endogeneous transferase ( eADPR-transf erase) activity which funotions in the ADP-ribosylation of EP-^. rças purified and characterized.from rat liver extraets.lt was observed that the eADPR- *\-:'..-*.' transferase and EF-2 activities co-purified. îhe ADPR- transfer- ase activity was found to be enriched 1621 fold in the EF-2 fraction purified to homogenity on isoelectric focusing - *..., *:
Benzer Tezler
- Ökaryot elongasyon faktörü 2(EF-2)'nin farklı dokularda eldesi ve miktarlarının karşılaştırılması
Başlık çevirisi yok
ABDULLAH SEVİNÇ
Yüksek Lisans
Türkçe
1993
Tıbbi BiyolojiMarmara ÜniversitesiTıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. BEKİ KAN
- Pseudomonas ekzotoksin A ile ökaryotik elongasyon faktörü 2'nin (eEF-2) ADP-ribozilasyon mekanizmasının incelenmesi
Investigation ADP-ribosylation mechanism of eukaryotic elongation factor 2 (eEF-2) with pseudomonas exotoxin A
GKIOULSOUM ACHMET
- Exploring functional dynamıcs of bacterial and human ribosome structures via coarse grained techniques
Bakteri ve insana ait ribozomal kompleks dinamiğinin kaba ölçekli teknikler ile araştırılması
PELİN GÜZEL
Doktora
İngilizce
2020
Kimya Mühendisliğiİstanbul Teknik ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AYŞE ÖZGE KÜRKÇÜOĞLU LEVİTAS
- A Functional Connection between Noncoding RNA Polymerase II Transcription andChromatin
Protein Kodlamayan RNA Polimeraz II Transkripsiyonu ile Kromatin Arasındaki Fonksiyonel Bağlantı
NİHAL TERZİ ÇİZMECİOĞLU
Doktora
İngilizce
2011
GenetikHarvard UniversityMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. STEPHEN BURATOWSKI