Manyetik nanopartikül aracılığıyla Pichia pastoris'e yeni bir gen aktarım yönteminin geliştirilmesi
Improvement of a new gene transfer method to Pichia pastoris with magnetic nanoparticle
- Tez No: 609552
- Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ YAĞMUR ÜNVER
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Genetik, Biotechnology, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2020
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Atatürk Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Gen Mühendisliği Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 123
Özet
Bu tez çalışmasında Pichia pastoris mayasına şimdiye kadar gerçekleştirilen gen aktarım yöntemlerinden (LiCl-ısı şoku veya elektroporasyon vb.) farklı olarak yeni bir gen aktarım yöntemi geliştirilmiştir. Bu doğrultuda, maya hücrelerine gen aktarımında aracı olarak kullanılan manyetik nanopartiküller (Fe3O4@PEI) sentezlenmiş ve karakterize edilmiştir. Sentezlenen manyetik nanopartiküllerin maya hücreleri üzerinde toksik etkisinin olmadığı görülmüştür. Gen aktarımının doğrulanması için kullanılan yeşil floresan protein raportör geninin (Green Fluorescent Protein; GFP) kodon optimizasyonu yapılmış ve bu gen dizisi, ticari olarak temin edilen sentetik DNA'dan amplifiye edilerek pGKB ekspresyon plazmitine yerleştirilmiştir. E. coli hücrelerinde klonlanarak elde edilen rekombinant DNA (pGKB-GFP) manyetik nanopartiküller ile bir araya getirilmiş, optimum şartlarda elde edilen manyetofektin mıknatıs aracılığıyla maya hücrelerine transfer edilmiştir. Antibiyotik seçilimi ve PCR reaksiyonu ile genomlarında GFP genini taşıyan maya transformantları doğrulanmış, GFP üreten hücreler konfokal mikroskopta görüntülenmiştir. Böylece rekombinant protein üretiminde sıklıkla kullanılan P. pastoris mayasına ilk defa manyetik nanopartikül aracılığıyla gen aktarımı gerçekleştirilmiştir. Bu yöntemin, kolay bir şekilde uygulanabilir olması, ucuz olması, az miktarda DNA'ya gereksinim duyması, kompetent hücre hazırlanmasına gerek duymaması ve transformasyon işleminin kısa sürede gerçekleştirilmesi gibi birçok avantaja sahip olduğu söylenebilir.
Özet (Çeviri)
In this thesis study, a new gene transfer method has been developed in contrast to the gene transfer methods (LiCl-heat shock or electroporation etc.) applied to Pichia pastoris yeast up to now. Accordingly, magnetic nanoparticles (Fe3O4@PEI), which are used as a mediator of gene transfer to yeast cells, have been synthesized and characterized. It was found that the synthesized magnetic nanoparticles had no toxic effect on yeast cells. The codons of the Green Fluorescent Protein reporter gene (GFP) used to confirm gene transfer was optimized and this gene sequence was amplified from commercially assured synthetic DNA and inserted into the expression plasmid pGKB. Recombinant DNA (pGKB-GFP) obtained by cloning in E. coli cells was combined with magnetic nanoparticles and the magnetofectin obtained under optimum conditions was transferred to yeast cells by means of magnet. Yeast transformants carrying GFP gene in their genomes were confirmed by antibiotic selection and PCR reaction, GFP producing cells were visualized on confocal microscope. Thus, gene transfer by means of magnetic nanoparticle, to P. pastoris yeast, which is frequently used in recombinant protein production was realized for the first time. It can be said that this method has many advantages such as being easy to apply, being inexpensive, requiring a small amount of DNA, not requiring a competent cell preparation and the transformation process being performed in a short time.
Benzer Tezler
- Organik/inorganik analitlerin farklı matrikslerde tayinlerine yönelik yenilikçi önderiştirme yöntemlerinin geliştirilmesi ve kutup örneklerinde element dağılımları
Development of innovative preconcentration methods for determination of organic/inorganic analytes in different matrices and elemental distributions in pole samples
ELİF SEDA KOÇOĞLU
- Real time analysis of in vitro photodynamic therapy (PDT) application in MCF-7 human breast cancer line with indocyanine green (ICG) embedded mesoporous magnetic silicon nanoparticle (MSN) molecules
MCF-7 kanser hücre hattının ICG gömülü mezopor manyetik silikon nanopartikül molekülleri kullanılarak fotodinamik terapi uygulamasıyla gerçek zamanlı analizi
TUĞBA SAĞIR
- Kanser hücre membranı kaplı manyetik nanoparçacıkların sentezlenmesi ve glioblastoma tedavisinde sitotoksik etkinliğinin incelenmesi
Synthesis of cancer cell membrane coated magnetic iron oxide nanoparticles and investigation of cytotoxic efficacy in glioblastoma treatment
BUSE SANCAKLI
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
BiyoteknolojiBezm-i Alem Vakıf ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AYDAN DAĞ
- Kolon kanser hücreleri için altın kaplı manyetik yüklü transfeksiyon ajanlarının kullanılması
Use of gold coated magnetically loaded nanoparticles in transfection of colon cancer cells
DUYGU DENİZ USTA
Yüksek Lisans
Türkçe
2014
BiyomühendislikHacettepe ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ERHAN BİŞKİN
DOÇ. DR. MUSTAFA TÜRK
- Multi-component superparamagnetic nanoparticles for cancer therapy via hyperthermia
Hipertermiya yöntemi ile kanser tedavisi için çok bileşenli süperparamanyetik nanopartiküller
ELVAN AYDIN
Yüksek Lisans
İngilizce
2017
Biyoteknolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiElektronik ve Haberleşme Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. CELALETDİN ERGUN