Geri Dön

Farklı bitki ekspresyon vektörleri tarafından üretilen deglikosile edilmiş PA83 antijeninin ekspresyon seviyelerinin karşılaştırılması

Comparison of expression levels of deglycosylated PA83 antigen produced by different plant expression vectors.

PDF İndir

  1. Tez No: 642153
  2. Yazar: ESMIRA MIRZALIYEVA
  3. Danışmanlar: PROF. DR. TARLAN MAMMEDOV
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Biyomühendislik, Biyoteknoloji, Biochemistry, Bioengineering, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2020
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Akdeniz Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Tarımsal Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 54

Özet

Son yıllarda, rekombinant proteinler için üretim konakçıları olarak bitkiler seçilmektedir. Sebepler açıktır - bitkiler hayvan ve insan patojenleri içermez, N-bağlı glikosilasyon dahil olmak üzere ökaryotik tip posttranslasyonel modifikasyonlar sağlar ve protein üretimi için neredeyse sınırsız ölçeklenebilirlik sunar. Bu teknoloji, bitki bazlı üretimin ölçeklendirilebilirliği, saflaştırma maliyetleri, verim, istenen glikosilasyon modelinin mühendisliği ve diğer konular dahil olmak üzere, üretim konağı olarak bitkilerin ekonomik, teknik ve güvenlik yönlerini ele almaktadır. Bacillus anthracis'in ölümcül bir biyolojik silah olarak başarılı bir şekilde kullanılması şarbona karşı daha etkili aşıların geliştirilmesinde araştırma ilgisini yeniden başlatmıştır. Bitki bazlı aşılar aşı üretimi için güvenli bir alternatif sunar. B. anthracis'in koruyucu antijeni (PA) şarbon toksininin önemli bir bileşenidir, ancak bir glikoprotein değildir.Bununla birlikte, dizisinin dokuz potansiyel glikosilasyon sahası vardır ve Nicotiana benthamiana bitkilerinde eksprese edildiğinde anormal şekilde glikosile olduğu gösterilmiştir. Son zamanlarda PA83 antijeninin glikozillenmemiş versiyonları, ya in vivo deglikolizasyon stratejisi (PNGase F veya Endo H temelli), (Mamedov vd. 2012; Mamedov vd. 2016; Mamedov vd. 2017) ya da mutasyon (6 tane N-glikolizasyon bölgesine yönlendirilmiş mutagenez), (Mamedov vd. 2016) yaklaşımı vasıtasıyla üretilebilmiştir. Bu çalışmada, farklı bitki ekspresyon vektörleri tarafından üretilen deglikosile edilmiş PA83 antijeninin ekspresyon seviyeleri karşılaştırılarak yeni Şarbon aşısı adayları belirlenmiştir. Yedi N-glikosilasyon sahasının (Asn-39 dahil) koruyucu antijeninin mutasyonu ile tasarlanmış ve kodon optimizasyonu yapılmış olan mutant formu,( Mamedov vd. 2017) farklı bitki ekspresyon vektörleri tarafından eksprese edildi ve N. benthamiana bitkisinde üretildi.Üretilen PA83'ün deglikosile edilmiş antijenleri, IMAC afinite kolonu kromatografi yöntemi kullanılarak saflaştırıldı ve saflaştırılmış protein stabilite analizleri için değerlendirildi.

Özet (Çeviri)

In recent years, many groups are selecting plants as the production hosts for recombinant proteins. The reasons are obvious—plants are free of animal and human pathogens, provide eukaryotic type of posttranslational modifications, including N-linked glycosylation and offer virtually unlimited scalability for protein production. . These technology technical and safety aspects of plants as production hosts including scalability of plant-based production,purification costs, yield, engineering of desired glycosylation pattern, and other topics. The successful use of Bacillus anthracis as a lethal biological weapon has prompted renewed research interest in the development of more effective vaccines against anthrax. Plant based vaccines offer safe alternative for vaccine production. Protective antigen (PA) of B. anthracis is an important component of anthrax toxin but its not a glycoprotein.However, its sequence has nine potential glycosylation sites and it has been shown to be aberrantly glycosylated when expressed in Nicotiana benthamiana plants. Recently, a non-glycosylated versions of PA83 antigen was produced by in vivo deglycosylation strategy (PNGase F or Endo H based) (Mamedov et al. 2012; Mamedov et al. 2016; Mamedov et al. 2017) or by site-directed mutagenesis-based approach, by mutation of six N-Glycosylations sites (Mamedov et al. 2016) In this study, new Anthrax vaccine candidates were identified by comparing the expression levels of the deglycosylated PA83 antigen produced by different plant expression vectors.a new mutant form by mutation of seven N-glycosylation sites (including Asn-39) of protective antigen was engineered, codon optimized, (Mamedov et al. 2017)expressed and produced by different plant expression vectors in N.benthamiana plant. Deglycosylated antigens of PA83 were purified using the IMAC affinity column chromatography method and evaluated for purified protein stability analysis.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    759982

    Genome-wide mapping of nucleotide excision repair in arabidopsis root and shoot & the fate of LYM1/2 proteins during nodulation in Medicago truncatula

    Arabidopsis kökünde ve sürgünde nükleotid eksizyon onarımının genom çapında haritalanması ve Medicago truncatula'da nodülasyon sırasında LYM1/2proteinlerinin kaderi

    DUĞÇAR EBRAR ERDOĞAN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2022

    BiyolojiKoç Üniversitesi

    Moleküler Biyokimya ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ ONUR ÖZTAŞ

  2. Tez No

    151296

    Heterologues expression of two putative glutamate synthase subunits from Methanocaldococcus jannaschii

    Methanocaldococcus jannaschii'nin putatif iki glutamat sentaz alt ünitesinin heterolog ekspresyonu

    VOLKAN DEMİR

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2004

    Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. BENAN DİNÇTÜRK

  3. Tez No

    392251

    Expression and purification of Arabidopsis thaliana heterotrimeric G protein alpha subunit (GPA1) using bacteria and yeast systems

    A.Thaliana G-proteini alfa altbirimi (GPA1)' ın bakteri ve maya sistemlerinde ekspresyonu ve saflaştırılması

    HAZAL BÜŞRA KÖSE

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2014

    BiyofizikSabancı Üniversitesi

    Biyoloji Bilimleri ve Biyomühendislik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ZEHRA SAYERS

  4. Tez No

    68489

    Effect of cell cycle regulatory genes on the utilization of histone H3/H4 promoters in alfalfa and maize protoplasts

    Yonca ve mısır protoplastlarında hücre döngüsü düzenleyici genlerin histon H3/H4 promotörlerinin kullanılması üzerine etkileri

    FAHRİYE SETENCİ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1997

    Bilim ve TeknolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MERAL YÜCEL

  5. Tez No

    386429

    Yaralanmayla aktif olan AoPR1 promotörünün kontrolü altındaki CRY genlerinin protein üretimlerinin patateste sınırlandırılması

    Restriction of CRY gene protein production under the control of wound-induced AoPR1 promoter in potato

    HÜSEYİN ABDULLAH AHMED AHMED

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    BiyoteknolojiAnkara Üniversitesi

    Tarla Bitkileri Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SEBAHATTİN ÖZCAN

Geri Dön