Geri Dön

Heterologues expression of two putative glutamate synthase subunits from Methanocaldococcus jannaschii

Methanocaldococcus jannaschii'nin putatif iki glutamat sentaz alt ünitesinin heterolog ekspresyonu

  1. Tez No: 151296
  2. Yazar: VOLKAN DEMİR
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. BENAN DİNÇTÜRK
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2004
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: İstanbul Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 123

Özet

METHANOCALDOCOCCUS JANNASCHWNm PUTATIF IKI GLUTAMAT SENTAZ ALT ÜNİTESİNİN HETEROLOG EKSPRESYONU ÖZET Amonyak asimilasyonun erken basamaklarında görev alan kilit bir enzim olan glutamat sentaz (GOGAT) bakterilerde, alglerde ve bitkilerde bulunmaktadır. Glutamat sentaz, glutaminin amido azotundan 2-okzoglutarata indirgeyici bir transamidasyon reaksiyonuyla iki molekül glutamat oluşumunu katalizler. Glutamat sentazlar moleküler ağırlıkları, alt ünite kompozisyonları ve elektron verici özgüllükleri bakımından farklılık gösterirler. Bakterilerde NADPH'e bağımlı (EC 1.4. 1.1 3) ve iki farklı alt üniteli olarak bulunur. Bitkilerin yeşil organlarında, ferredoksin'e bağımlı tek alt üniteli glutamat sentaz (EC 1.4.7.1) bulunur ve moleküler ağırlıkları yaklaşık olarak 160 ile 180 kDa arasında değişir. Bitkilerin kökleri gibi fotosentetik olmayan organlarında ise yine tek alt üniteli fakat NADH bağımlı glutamat sentazlar (EC 1.4. 1.1. 14) bulunur ve moleküler ağırlıkları yaklaşık olarak 220 ile 240 kDa arasındadır. Bakterilerdeki NADPH'e bağımlı glutamat sentazın büyük alt ünitesi, ferredoksin'e bağımlı ve tek alt üniteye sahip bitki glutamat sentazlarıyla yüksek oranda homoloji gösterir. Bu çalışmada, Methanocaldococcus jannaschifnm glutamat sentaz enzimini kodlayan genlerinin evrimini ve elektron verici özgüllüklerini anlamak için, Methanocaldococcus jannaschW nin iki putatif glutamat sentaz homologu, MJ1350 ve MJ1351 pET serisi ekspresyon vektörleri kullanılarak Escherichia colfde sentez edilmiştir. Bir üçüncü alt ünite olarak MJ 135 1.1 saptanmış ve klonlanmıştır. Amino asit dizisi düzeyinde yapılan homoloji analizlerinde MJ1350'nin, glutamat sentazlardaki p helix bölgesine, MJ1351'in ayni anda glutamat sentazlarm merkezi ve FMN bölgelerine (sentaz bölgesi) ve MJ1351.1'in de glutamin amido transferaz bölgesine benzerlik gösterdiği saptamıştır. xxı

Özet (Çeviri)

HETEROLOGOUS EXPRESSION OF TWO PUTATIVE GLUTAMATE SYNTHASE SUBUNITS FROM METHANOCALDOCOCCUS JANNASCHII SUMMARY Glutamate synthase (abbreviated as GOGAT) is a key enzyme in the early stages of the assimilation of ammonia in bacteria, algae and plants. It catalyses the reductive transamidation of the amido nitrogen from glutamine to 2-oxoglutarate to form two molecules of glutamate. Glutamate synthases differ in molecular weights, subunit compositions and electron donor specificities. The ferredoxin-dependent glutamate synthases (EC 1.4.7.1) of oxygenic phototrophs are monomelic proteins with molecular weights of approximately 160-180 kDa. These enzymes are generally present in green tissues of plants, while the Mr 220-240 kDa NADH-dependent forms (EC 1.4. 1.1. 14) are more abundant in non-photosynthetic tissues such as roots, shoots and nodules. However, the bacterial glutamate synthases are NADH/NADPH-dependent (EC 1.4. 1.1 3) The bacterial NADPH-dependent glutamate synthases contain two different subunits, with the larger of these subunits showing considerable homology to the monomelic ferredoxin-dependent enzymes. In this study to understand the evolution of the gene coding for glutamate synthase and to determine its electron donor specificity, putative glutamate synthase subunits of Methanocaldococcus jannaschii, MJ1350 which is homologous to C-terminal |3 helix domain and MJ1351 which is homologous for the FMN binding domain have been successfully expressed in Escherichia coli in pET series of expression vectors. Also a third ORF, MJ1351.1 from Methanocaldococcus jannaschii was cloned because of its homology to glutamine amido transferase domain of glutamate synthases. xx

Benzer Tezler

  1. Tez No

    223154

    Heterologous expression of two putative glutamate synthase subunits from Pyrococcus horikoshii

    Pyrococcus horikoshii iki putatif glutamat sentaz küçük altünite homologlarının heterolog ekspresyonu

    HANDE AKÇE

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2006

    Biyolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı

    DOÇ.DR. BENAN DİNÇTÜRK BOTOFTE

  2. Tez No

    315382

    Cloning of The Laccase cDNAs from Pycnoporus sanguineus MUCL 38531, Expression in Pichia pastoris and Characterization of Recombinant Laccases

    Pycnoporus sanguineus?tan Lakkaz cDNA?larının Klonlanması, Pichia pastoris?te Ekspresyonu ve Rekombinant Lakkazların Karakterizasyonu

    GÜNSELİ KURT GÜR

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2010

    Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AYTEN YAZGAN KARATAŞ

  3. Tez No

    119477

    Cloning, characterization and heterologons expression of the aspartokinase and aspartate semialdehyde dehydrogenase genes from the cephamycin C producer streptomyces clavuligerus

    Sefamisin C üreticisi streptomyces davuligerus'un aspartokinaz ve aspartat semialdehid dehidrojenaz genlerinin klonlanması, karakterizasyonu ve heterolog ekspresyonu

    SEDEF TUNCA

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2002

    BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GÜLAY ÖZCENGİZ

    PROF. DR. JACQUELİNE PİRET

  4. Tez No

    446611

    Substrate characterization of putative ancestral xyloglucan endotransglycosylase/hydrolases

    Atasal ksıloglukan endotransglikozilaz/hidrolazların substrat karakterizasyonu

    DİLARA TÜZÜN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2016

    Bilim ve TeknolojiYeditepe Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. ANDREW JOHN HARVEY

  5. Tez No

    389326

    Construction of expression vectors for the heterologous production of kpkt killer toxin in Saccharomyces cerevisiae and Pichia pastoris cells

    Kpkt katil toksininin Saccharomyces cerevisiae ve Pichia pastoris hücrelerinde heterolog üretimi için ekspresyon vektörlerinin oluşturulması

    MURAT ÜSTÜN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2015

    Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ZEYNEP PETEK ÇAKAR

Geri Dön