Kobra sitotoksinlerine karşı geniş espektrumlu nötralize edici rekombinant insan monoklonal antikorların keşfi
Discovery of broadly neutralizing recombinant human monoclonal antibodies against cobra cytotoxins
- Tez No: 661175
- Danışmanlar: DOÇ. DR. FİGEN ÇALIŞKAN, DOÇ. DR. ANDREAS HOUGAARD LAUSTEN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2020
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Eskişehir Osmangazi Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji ve Biyogüvenlik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 99
Özet
Bu çalışmada, Naja nigricollis, Naja mossambica ve Naja melanoleuca'dan elde edilen zehirler RP-HPLC kullanılarak fraksiyonlara ayrılmıştır. Sitotoksin (CTx) içeren fraksiyonlar LC-MS/MS kullanılarak analiz edilmiştir. N. nigricollis'ten iki farklı fraksiyona bağlanabilen insan tek zincirli değişken fragmanları (scFv) ifade eden fajların seçilmesini mümkün kılan bir çapraz kaydırma faj gösterim stratejisi geliştirilmiştir. Seçilen fajların scFv genleri, scFv ekspresyon sistemi olarak kullanılan E. coli'ye klonlanmıştır. Eksprese edilen scFv'lerin bağlanma yetenekleri direkt ELISA'da değerlendirilmiştir. En iyi çapraz bağlayıcı scFv'lerin genlerinin DNAsı dizilenip benzersiz scFv klonları, diğer yılanlardan gelen CTx içeren zehir fraksiyonlarına karşı daha geniş bir çapraz bağlanma açısından ayrıca test edilmiştir. Benzersiz scFv'lerin yedisi, üç farklı yılanın zehir fraksiyonlarına geniş ölçüde bağlanma yeteneği göstermiştir. En umut verici çapraz bağlayıcı scFvyi eksprese eden klon, TPL0027_01_F7, scFv ifade edilip saflaştırılmış ve (çapraz)-bağlamanın (çapraz)-nötralizasyona dönüşüp dönüşmeyeceği değerlendirilmiştir. İnsan keratinositleri kullanılarak, insan epidermisini in vitro da taklit eden yeni bir test geliştirilmiştir. Bu in vitro çalışmada, TPL0027_01_F7 scFv'nin, farklı kobra yılanlarına ait zehir fraksiyonlarının insan keratinositleri üzerindeki sitolitik etkisini nötralize edebildiği başarıyla gösterilmiştir. In vitro çalışmada umut verici sonuçlar gösteren TPL0027_01_F7 scFv, IgG'ye dönüştürülüp daha sonraki çalışmalar için CHO hücrelerinde eksprese edilmiştir. Gelecek çalışmalarda, karşılık gelen scFv'lerle eksprese edilen IgG'ler, CTx ile indüklenen lokal etkilerin nötralize edilmesinde farmakokinetiklerini değerlendirmek için in vivo olarak da test edilebileceklerdir. Bu çalışmanın amacı ve umudu, sadece kurbanların yaşamlarını değil, aynı zamanda uzuvlarının kesilmesinden kurtaran daha iyi güvenlik ve etkinlikteki profile sahip yeni nesil rekombinant antivenomların geliştirilmesine bir adım daha yaklaşmaktır.
Özet (Çeviri)
In this study, venoms from Naja nigricollis, N. mossambica, and N. melanoleuca were fractionated using RP-HPLC. Cytotoxin (CTx)-containing fractions were collected and analyzed using LC-MS/MS. A cross-panning phage display strategy was developed to select phages expressing human single chain variable fragments (scFv) capable of binding to two different target fractions from N. nigricollis. ScFv genes of the selected phages were sub-cloned into E. coli, which was used as an scFv-expression system. The binding characteristics of the expressed scFvs were assessed in direct ELISA, and the genes of the top cross-binding scFvs were DNA sequenced. The unique scFv clones were determined and further tested for cross- binding against a broader range of CTx-containing venom fractions from other snakes. Seven of the unique scFvs demonstrated broadly-binding ability to the venom fractions of three different snakes. The most promising cross-binding scFv-expressing clone, TPL0027_01_F7, was expressed, purified, and used to assess whether (cross-)binding would translate (cross- )neutralization. Using human keratinocytes, a novel assay was developed that mimicked the human epidermis in vitro. In this in vitro assay, it was successfully demonstrated that TPL0027_01_F7 scFv is capable of neutralizing the cytolytic effect of the venom fractions of different cobra snakes on human keratinocytes. Finally, TPL0027_01_F7 scFv that shown promising results in in vitro neutralization assay was converted to IgG and expressed in CHO cells for future experiments. In the future, the expressed IgGs, together with the corresponding scFvs, will be tested in vivo to assess and compare their pharmacokinetics in neutralizing CTx- induced local effects. The aim and hope of this study is to get a step closer to developing next generation recombinant antivenoms with better safety and efficacy profiles, which save not only the victims' lives but also their limbs from being amputated.
Benzer Tezler
- Seyyid Burhan divanı ve incelenmesi
Seyyid Burhan divani ve incelenmesi
KOBRA BAKHT
Yüksek Lisans
Türkçe
2011
Türk Dili ve Edebiyatıİstanbul ÜniversitesiTürk Dili ve Edebiyatı Ana Bilim Dalı
PROF. DR. KEMAL YAVUZ
- İran'da bir Üniversite hastanesinde yatarak tedavi alan hastaların beslenme durumları ve hastane malnütrisyonun değerlendirilmesi
The nutrition status and malnutrition assessment of the hospitalised patients in a University- Hospital in İran
KOBRA SIMZARI
Doktora
Türkçe
2016
Beslenme ve DiyetetikHacettepe ÜniversitesiBeslenme ve Diyetetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. ZEHRA BÜYÜKTUNCER DEMİREL
- 18-30 Yaş arası İran kadınlarında beslenme durumu, kalsiyum ve kalsiyum emilimine yardımcı olan diğer besin öğeleri tüketiminin değerlendirmesine yönelik bir araştırma
Research about evaluating nutrition, calcium and the other nutrients which help calcium absorbtion of 18 - 30 years old İran women.
KOBRA SİMZARİ
Yüksek Lisans
Türkçe
2009
Beslenme ve DiyetetikHacettepe ÜniversitesiBeslenme ve Diyetetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. H. TANJU BESLER
- Rey şehrinin tarihsel coğrafyası ve siyasî tarihî (Fethinden Selçuklular'ın sonuna kadar)
Historical geography and political history of the city of Rey (From his conquest to the end of the Seljuks)
KOBRA ESMAEILI
Doktora
Türkçe
2019
TarihAtatürk Üniversitesiİslam Tarihi ve Sanatları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MUSTAFA AGIRMAN
- Atık suyun Triticum aestivum L. (POACEAE) üzerindeki ekolojik ve biyolojik etkilerinin giderilmesinde termik santral külü kullanımının veriminin araştırılması
Investigation of the efficiency of using thermal power plant ash in eliminating the ecologicaland biological effects of wastewater on Triticum aestivum L. (POACEAE)
MERVENUR SAGİT
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
BotanikEskişehir Teknik ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. GÜLÇİN IŞIK