Kolon kanseri hücre hattında normoksi ve hipoksi koşullarında TGF-β sitokininin ADAMTS-5 gen ifadesine olan etkisinin belirlenmesi
Determination of the effect of TGF-β cytokine on ADAMTS-5 gene expression in colon cancer cell line under normoxic and hypoxic conditions
- Tez No: 663946
- Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ SÜMEYYE AYDOGAN TÜRKOĞLU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Moleküler Tıp, Onkoloji, Biology, Molecular Medicine, Oncology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2021
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Balıkesir Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 68
Özet
Kolorektal kanser (CRC), farklı genetik ve epigenetik değişikliklere sahip heterojen bir hastalıktır. CRC gelişimi, ilerlemesi ve nüksüne yol açan mekanizmalar karmaşıktır. Kolon kanseri ile ilişkili sinyal iletim yollarının moleküler mekanizmasının aydınlatılması ve tedavi edici ajanların geliştirilmesi hedeflenmektedir. TGF-β ailesi, tümör gelişimini kontrol eden büyük bir hücre dışı büyüme faktörü grubudur. Kolon karsinomunun farklı evrelerinde anormal TGF-β ekspresyonu gözlenmektedir. TGF-β sinyal yolu yeni tedaviler için ilginç bir hedef haline gelmiştir, bu nedenle TGF-β 'dan etkilenen genlerin tespiti ve bu genlerin ayrıntılı analizi çok önemlidir. ADAMTS (A Disintegrin and Metalloproteinase with Thrombospondin motifs) genleri matriks bozulması, kan pıhtılaşması ve anjiyogenez dahil olmak üzere çeşitli fonksiyonlara aracılık eden hücre dışı metaloproteinaz ailesidir. Çalışmamızda kolon kanserinde TGF-β sitokininin ve hipoksinin ADAMTS-5 gen ifadesi üzerindeki etkisi hem normal hem de hipoksik koşullarda araştırılmıştır. Çalışmamızda hipoksik ortamın oluşturulmasında CoCl2 ile indüklenmiş kimyasal hipoksik model tercih edilmiştir. Öncelikle kolon kanseri hücre hattı (HT-29) hücreleri %10 Fetal Buzağı Serumu ve 2 mM L-Glutamin eklenmiş DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) içinde kültürlenmiştir. Hücreler %5 CO2 içeren nemlendirilmiş bir inkübatörde 37°C'de kültürlenmiştir. Hücre canlılığı, tripan mavi boyaması ile belirlenmiştir. Çalışmamızda öncelikle hipoksik durumun ve sitokin muamelesinin hücreler üzerindeki etkisi MTT testi ile belirlenmiştir. Daha sonra TGF-β ve hipoksinin hem ayrı ayrı hem de birlikte ADAMTS-5 mRNA seviyesine etkisi Real Time PZR ile belirlenmiştir. 24 saatte 500U TGF-β uygulanan hücrelerde ADAMTS-5 mRNA ifadesinin baskılandığı tespit edilmiştir. Ayrıca etkinin protein seviyesinde tespiti için western blot çalışmaları yapılmıştır. 72 saat hipokside ise TGF-β uygulanan hücrelerde ADAMTS-5'in protein seviyesinde artış tespit edilmiştir.
Özet (Çeviri)
Colorectal cancer (CRC) is a heterogeneous disease with distinct genetic and epigenetic alterations. The mechanisms leading to CRC development, progression and recurrence are complex. The main focus of colon cancer research has been the elucidation of the molecular mechanism of signal transduction pathways and the development of therapeutic drugs for these key molecules. The TGF-β family constitutes a large group of extracellular growth factors that control tumor development. Abnormal TGF-β expression was observed in colon carcinoma. The TGF-β pathway has become an interesting target for novel therapies, and detailed analysis of TGF-β affected genes are very important. ADAMTS (A Disintegrin and Metalloproteinase with Thrombospondin motifs) genes are an extracellular family of metalloproteinases that mediate various functions, including matrix disruption, blood clotting, and angiogenesis. In our study, the effect of TGF-β cytokine and hypoxia on ADAMTS-5 gene expression in colon cancer was investigated. HT-29 cells were cultured in DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) supplemented with 10 % heat inactivated FCS (Fetal Calf Serum) and 2 mM L-glutamin. The cultures were maintained at 37 ̊C in a humidified incubator containing 5% (v/v) CO2 in air. Firstly, the effect of hypoxia and cytokine treatment on cells was determined by the MTT test. ADAMTS-5 mRNA level was determined by Real Time PZR in both normoxic and hypoxic cytokine treated groups. 500U TGF-β decreased the ADAMTS-5 mRNA level in normoxia. We analyzed the protein expression level of ADAMTS-5 by western blot. We found that ADAMTS-5 protein level was incerased by TGF-β in hypoxia at 72h.
Benzer Tezler
- Hepatosellüler kanserde önemli bir LncRNA olan MIR100HG'nin transkripsiyonel regülasyonu
Transcriptional regulation of MIR100HG, an important LncRNA, in hepatocellular cancer
AYLİN TÜRKOĞLU
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
Moleküler TıpBalıkesir ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FERAY KÖÇKAR
- Kolon kanseri hücre hattında Apigenin flavonoidinin apoptoz yolak gen ifade edilmesine olan etkilerinin araştırılması.
Evaluating the effects of flavonoid Apigenin on the apoptosis pathway gene expression on the colon cancer cell line.
MEHMET TÜRKTEKİN
Yüksek Lisans
Türkçe
2009
Moleküler TıpGazi ÜniversitesiTıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. ECE KONAÇ
- Kolon kanseri hücre hattında (Caco-2) irisinin antiproliferatif ve antikanser etkileri
Antiproliferative and anticancer effects of irisin in the colon cancer cell line (Caco-2)
ELİF ZEYNEP ÖZTÜRK
Doktora
Türkçe
2022
BiyokimyaAtatürk ÜniversitesiTıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. EBUBEKİR BAKAN
- Resveratrol'ün kolon kanser hücre hattında apoptoz üzerine etkisinin incelenmesi
The apoptotic effect of resveratrol in colon cancer cell line
CEYDA ÇÖREK
- Metforminin kolon kanseri hücre hattında tek başına, 5-florourasil ve oksaliplatin ile kombinasyonunun etkilerinin araştırılması
The determination of effects of metformin alone and in combination WİTH 5-fluorouracil and oxaliplatin on colon cancer cell line
EZGİ BOZKURT
Yüksek Lisans
Türkçe
2016
Eczacılık ve FarmakolojiAbant İzzet Baysal ÜniversitesiFarmakoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ÖZGE UZUN
YRD. DOÇ. DR. RECEP BAYRAM