Geri Dön

Primer ve metastatik insan kolon kanseri hücre hatlarındaα-laktalbumin ve sulindac'ın mitokondriyal apoptotik yolaküzerinden etkisinin immünohistokimya ve elektronmikroskobik yöntemlerle değerlendirilmesi

Evaluation of effects of α-lactalbumin and sulindac on primaryand metastatic human colon cancer cell lines via mitochondrialapoptotic pathway by immunohistochemistry and electronmicroscopy assays

PDF İndir

  1. Tez No: 680120
  2. Yazar: IŞIL AYDEMİR
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. HAFİZE SEDA VATANSEVER
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Histoloji ve Embriyoloji, Histology and Embryology
  6. Anahtar Kelimeler: Kanser, Apoptozis, α-Laktalbumin, Sulindac, Cancer, Apoptosis, α-Lactalbumin, Sulindac
  7. Yıl: 2009
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Manisa Celal Bayar Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 70

Özet

Kanserin neden olduğu ölümlerde kolon kanseri ikinci sıradadır. Kolorektal kanser görülme sıklığı erkelerde üçüncü sırada iken kadınlarda dördüncü sırada yer almaktadır. Tedavisi için cerrahi yöntem yanında ilaç tedavileri uygulanmakta ve uygun protokoller oluşturulmaya çalışılmaktadır. HAMLET (human α-lactalbumin made lethal to tumor cells) ve Sulindac, bu amaçla kullanılan etken maddelerdendir. HAMLET insan anne sütünden elde edilen Ca+2 bağlayıcı protein α-laktalbumin ve yağ asidinden (oleik asit) oluşan bir maddedir. İn vivo ve in vitro ortamlardaki tümör hücrelerinin yüzeyine tutunarak hücre içersine girer ve nukleusta histon proteinleri ile kromatine bağlanır. Kromatini dönüşümsüz bir hasara uğratır, mitokondriyi hedef alarak kaspazları aktive eder ve böylece apoptozisi indükler. Sulindac ise non-steroidal anti-inflamatuar ilaçlar (NSAIDs) dandır. Büyüme inhibitörü olup pro-apoptotik etkiye sahiptir. Bazı kanser türlerinde (barsak, baş ve boyun) tümör hücrelerinin apoptozise yönelmelerini indükleyerek tedavilerini sağlamaktadır. Apoptozis, memeli hücrelerinde ölüm sinyalinin kaynağına bağlı olarak intrensek ve ekstrensek olmak üzere iki yolla gerçekleştirilir. Ekstrensek yol, apoptozu tetikleyen sinyal moleküllerinin hücre zarında bulunan ilgili reseptörlere bağlanması ile aktive edilirken, intrensek yol hücreden kaynaklanan çok çeşitli sinyaller tarafından (onkogen aktivasyonu, DNA hasarı gibi) tetiklenen bir yoldur ve merkezi rolü mitokondri oynamaktadır. Bu çalışmada COLO-320 Primer ve COLO-741 Metastatik insan kolon karsinomu hücre hatları RPMI-1640, %10 FBS, 2 mM L-glutamin ve %1 penisilinstreptomisin içeren kültür ortamında, 37o C ısı ve %5 CO2 sağlayan inkübatörde kültüre edildi. Hücreler 4' erli gruplara ayrıldı. Her bir hücre hattının 1. gruplarına hiçbir ilaç uygulanmadı ve kontrol grubu olarak kabul edildi. 2. gruplarına α-Laktalbumin, 3. gruplarına Sulindac ve 4. gruplarına α-Laktalbumin+ Sulindac kombinasyonu uygulandı. İlaç etkileri 24., 48. ve 72. saatlerde incelendi. Sitotoksite analizi için, MTT ve laktik dehidrogenaz düzeyi, ultrastrukturel inceleme için elektron mikroskobi tekniği, apoptotik hücre dağılımı için TUNEL yöntemi, kaspaz-3, kaspaz-9 ve sitokromC dağılımları için ise indirekt immunoperoksidaz yöntemi kullanıldı. Elektron mikroskobik inceleme sonrasında, her iki hücre hattının kontrol gruplarında hücre ve çekirdek konturlarının düzgün olduğu, tedavi alan tüm gruplarda apoptotik cisimciklerin gözlendiği, fakat kombine tedavi uygulanan COLO-320 grubundaki hücrelerde apoptotik cisimciklerin daha fazla olduğu saptandı. TUNEL pozitif hücre sayısının tedavi alan grupların hepsinde ve özellikle COLO-320 grubundaki hücrelerde daha fazla olduğu izlendi. Kaspaz-3, kaspaz-9 ve sitokrom-C dağılımlarının tedavi uygulanan gruplarda pozitif olduğu gözlenir iken, özellikle kombine ilaç uygulanan gruplarda her üç immunoreaktivitenin daha fazla olduğu saptandı. Çalışmamız sonucunda α-Laktalbumin ve Sulindac' ın primer ve metastatik insan kolon karsinoma hücre hatlarında apoptotik mekanizmaları tetiklendiği, primer insan kolon karsinoma hücre hattında metastatik hücre hattına oranla daha fazla olduğu tespit edildi. Çalışmanın in vivo çalışmalara öncülük edebileceğini düşünmekteyiz.

Özet (Çeviri)

Colon cancer is the second reason of death which is caused by cancer. Colorectal cancer prevalence is fourth order in women whereas it is third in men. Although surgery is applied to treatment the cancer drug treatments are applied and appropriate protocols are tried to build. HAMLET (human α-lactalbumin made lethal to tumor cells) and Sulindac are active ingredients which are used to treatment of cancers. HAMLET consists of Ca+2 binding protein α-lactalbumin, which is obtained from female human milk, and fatty acid (oleic acid). In in vivo and in vitro conditions, it attaches to surface of tumor cells and get in inside of the cells. It connects to the chromatin by histone proteins in nucleus. It damages the chromatin irreversibly, and activates the caspases by effecting the mitochondria and that induces apoptosis. Sulindac is one of nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs). It is inhibitor of growth and induces apoptosis. It cures some cancers (intestine, head and neck) by inducing apoptosis of tumor cells. Apoptosis is triggered by two ways in mammalian cells depending on the source of death signals: Intrinsic and extrinsic pathway. Intrinsic pathway is triggered by various signals (activation of oncogenes, DNA damages) which comes from cytosol and the mitochondria plays major role whereas extrinsic pathway is activated by binding the signal molecules to the receptors where are on cell membrane. In this study, COLO-320 Primary and COLO-741 Metastatic human colon carcinoma cell lines were cultured in RPMI-1640 medium containing 10% fetal bovine serum, 1% L-glutamine and 1% penicillin-streptomicin at 37°C and 5% CO2 in air condition. Each cell lines were divided in four groups. The first groups are control groups and there were not treated with any drugs. The second groups were treated with α-Lactalbumin, the thirds with Sulindac and the fourth groups were exposed to αLactalbumin and Sulindac. Effects of drugs were determined at 24., 48. and 72. hours of culture. For cytotoxic analyses MTT and level of lactic dehyrogenase, for ultrastructure of the cells electron microscopy technique, for distribution of apoptotic cells TUNEL and indirect immunuperoxidase assays for intensity of caspase-3, caspase-9 and cytochrom-c were analyzed. After electron microscopic analyses, it was observed that contours of cell and nucleus were normal in control groups of each cell lines, in treated groups apoptotic blebs were detected, but the number of apoptotic blebs were more in group which were treated with both drugs . The number of TUNEL positive cells were increased in all treated groups especially in COLO-320 cell line. Immunoreactivities of caspase-3, caspase-9 and cytocrom-C were detected in all treated groups, these immunoreactivities were increased in groups which were treated with both drugs. After our study, we suggest that α-Lactalbumin and Sulindac may be trigggered mechanisms of apoptosis in both primary and metastatic colon carcinoma cell lines and primary colon carcinoma cell line was affected much more than metastatic colon carcinoma cell line. We suppose that these results will lead the in vivo experiments.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    579587

    Potential regulatory effects of fluidic shear stress through C-met signalling on biological behaviours of hepatocellular carcinoma cells

    Sivi teğetsel gerilme stresinin hepatoselüler karsinoma hücrelerinin biyolojik davranişlarina C-met sinyal yolaği aracilikli etkilerinin araştirilmasi

    DEHAN ÇÖMEZ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2019

    Moleküler TıpDokuz Eylül Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. HATİCE GÜNEŞ ÖZHAN

    PROF. DR. SAFİYE NEŞE ATABEY

  2. Tez No

    745840

    Bazı doğal tirozinaz inhibitörlerinin melanoma hücreleri üzerindeki antiproliferatif, antimetastatik, apoptotik ve antienflamatuvar potansiyellerinin incelenmesi

    Investigation of antiproliferative, antimetastatic, apoptotic and anti-inflammatory potentials of some natural tyrosinase inhibitors on melanoma cells

    MUHAMMED İKBAL YİĞİT

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    BiyokimyaVan Yüzüncü Yıl Üniversitesi

    Temel Eczacılık Bilimleri Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ MEHMET BERKÖZ

  3. Tez No

    281415

    Kanserde damar endoteline yönelik gen tedavisi ajanları geliştirilmesi

    Designing gene therapy vectors targeting tumor cell endothelium

    PINAR BAYDIN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    Tıbbi BiyolojiAnkara Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. HAKAN AKBULUT

  4. Tez No

    518806

    Hepatosellüler karsinomada SIP1'in protein etkileşimlerinin ve ifadesini düzenlediği genlerin tanımlanması

    Defining the protein interactions of and regulation of target genes by SIP1 in hepatocellular carcinoma

    PELİN BALÇIK ERÇİN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    BiyolojiGebze Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. TAMER YAĞCI

  5. Tez No

    690035

    Proteazom inhibitörü ile flavonoid bileşiği kombinasyonunun kanser hücresi canlılığı ve ilaç yanıtı üzerindeki etkisinin incelenmesi

    Investigation of the effect of the proteasome inhibitor and flavonoid compound combination on cancer cell viability and drug response

    KÜBRA TOPRAK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    BiyokimyaGebze Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. TAMER YAĞCI

    PROF. DR. BETÜL YILMAZ

Geri Dön