The optimization of the high salt, low salt, equilibration, and elution buffers of the downstream process for the protein-a purification of cetuximab, a biosimilar, with phosphate and citrate buffer solutions
Bir biyobenzer olan cetuxımab molekülünün alt akım prosesinde, protein-a saflaştırılmasında kullanılacak olan yüksek tuz, düşük tuz, ekilibrasyon ve elüsyon tamponlarının fosfat ve sitrat tampon çözeltileri kullanılarak optimize edilmesi
- Tez No: 696291
- Danışmanlar: PROF. DR. AHMET AYDIN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2021
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Yeditepe Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Biyoteknoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 112
Özet
İnsanda oluşan en hasar verici kanser türlerinden ikisi baş ve boyun tümörleridir. Bu tümörler damar sistemleri geliştirerek kendilerini besler ve büyütürler. Cetuximab molekülü baş ve boyun tümör hücrelerinin Epidermal Büyüme Faktörü reseptörlerini inhibe eder. Bu sayede tümörlerin damar sistemi geliştirmesini engelleyen Cetuximab, erken evre tedavilerde yaşam süresinde uzama, yaşam kalitesinde artış gibi umut vadeden sonuçlar ortaya koymuştur. Cetuximab molekülünün biyobenzerini elde etmek için yola çıkan Nobel İlaç'ın, üretim miktarını 2000 litrelik ticari üretim boyutuna taşınabilmesi için bu kimyasal saflaştırma ve üretme sürecini optimize etmesi gerekmektedir. Bu tez alt akım sürecinin optimizasyonunun ilk aşamasının tampon çözelti seçimini ele almaktadır. Bu aşamada yer alan Protein-A afinite kromatografisi sitrat ve fosfat tampon çözeltilerinde gerçekleştirilmiş, yapılan deneyler analitik HPLC cihazlarıyla daha küçük ölçeklerde tekrar edilmiş ve doğrulanmış, titre ve verim hesaplamaları yapılmıştır. Daha sonra elusyon aşamasından ayrıştırılan proteinin orijinal molekülün asidik, bazik ve ana varyantına olan benzerlik yüzdeleri ölçülmüştür. Tüm yapılan deneylerin sonunda fosfat tamponu ile perçekleştirilen Protein-A kromatografisinin protein geri kazanımı açısından %95'lik verimlilik barajını aştığı, katyon değişim kromatografisi analizinde de asidik, ana ve bazik varyantların orjinal moleküle benzerliği açısından yüzdesel olarak en yakın olduğu görülmüştür.
Özet (Çeviri)
Two of the most vicious cancer types in humans are head and neck tumors. These tumors build vascular structures within to feed themselves and grow. The molecule Cetuximab inhibits the Epidermal Growth Factor receptors of these tumor cells. This way, with preventing them from building vascular structures, in the early stage treatments of these tumors, Cetuximab is promising hope with extended life expectancy and increased life quality. Nobel Pharmaceuticals, a company aiming to produce biosimilars of the Cetuximab molecule, needs to optimize the chemical process of purifying and producing the molecule to reach the 2000 liter production size for the market. This thesis has focused on the downstream process's first step, namely the buffer solution choice optimization. In this step, the Protein-A affinity chromatography has been performed in phosphate and citrate buffer solutions, the experiments have been repeated in analytical HPLC devices with smaller sizes and verified, and titer and yield calculations have been performed. Afterward, the protein, taken from the elution step, has been compared to the original molecule with its acidic, basic, and main variants. After all experiments and calculations, it has been found that the Protein-A chromatography performed with the phosphate buffer has performed above the 95% percent minimum expectancy of protein recovery. The proteins obtained from the phosphate buffer experiments have also scored highest in the cation exchange chromatography analysis, with the closest percentile values to the original molecule's acidic, basic and main variants.
Benzer Tezler
- Haloarkeal proteaz üretimi üzerine kültür koşullarının optimizasyonu ve enzim aktivitesinin karakterizasyonu
Optimization of culture conditions on the haloarchaeal protease production and characterization of enzyme activity
ÜMİT TOR
Yüksek Lisans
Türkçe
2015
BiyolojiMustafa Kemal ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. BİRGÜL ÖZCAN
- Elektrokimyasal yöntemle titanyum ve titanyum alaşımlarının borlanması ve karakterizasyonu
Electrochemical boronizing and characterization of titanium and titanium alloys
AYŞE AYPAR
Yüksek Lisans
Türkçe
2010
Metalurji Mühendisliğiİstanbul Teknik ÜniversitesiMetalurji ve Malzeme Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MUSTAFA ÜRGEN
PROF. DR. İ. SERVET TİMUR
- Yüksek bor ayırma kapasitesine sahip yeni nesil ince film nanokompozit membranlar
Novel thin film nanocomposite membranes with high boron removal capacity
SÜER KÜRKLÜ KOCAOĞLU
Doktora
Türkçe
2023
Kimya Mühendisliğiİstanbul Teknik ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ŞERİFE BİRGÜL ERSOLMAZ
- Valorization of functional protein from a plant based food waste: Sour cherry kernel, and its physicochemical characteristics
Bir bitkisel gıda atığı olarak vişne çekirdeğinden elde edilen proteinlerin fizikokimyasal ve fonksiyonel özelliklerinin belirlenmesi
HATİCE SAADİYE ERYILMAZ
Yüksek Lisans
İngilizce
2016
Gıda Mühendisliğiİstanbul Teknik ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BERAAT ÖZÇELİK
DR. ASLI CAN KARAÇA
- Gıda patojenleri için dijital PCR ile hızlı tespit yöntemlerinin geliştirilmesi
Development of rapid detection methods for food pathogens using digital PCR
YELİZ YÜCEL ÖZ
Doktora
Türkçe
2023
Biyolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AYTEN KARATAŞ