Geri Dön

CRISPR-CAS9 gen düzenleme ile genetiği değiştirilmiş mezenkimal kök hücrelerinin üretimi ve karakterizasyonu

Generation and characterization of genetically modified mesenchymal stem cells by CRISPR-CAS9 gene editing

  1. Tez No: 707642
  2. Yazar: ESRA SEVDE EKİCİ
  3. Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ ÖZGÜR TATAROĞLU
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Moleküler Tıp, Molecular Medicine
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2022
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: İstinye Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kök Hücre ve Doku Mühendisliği Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 105

Özet

Mezenkimal kök hücreler (MKH) bölünerek kendini yenileme ve daha özelleşmiş hücrelere dönüşebilme kapasitesine sahip multipotent hücrelerdir. Wharton Jölesi (WJ) MKH bakımından zengin jölemsi bir bağ dokusu içerdiğinden WJ-MKH'ler rejeneratif tıp ve hücresel tedavide en çok kullanılan kök hücre türlerinden biridir. Ancak gen terapisi ile hastalıkların tedavisinde MKH kullanımı sınırlıdır. Bunun nedeni, genetiği değiştirilmiş MKH'ların yapımının zorluğundan kaynaklanmaktadır. Bu tez çalışması kapsamında; MKH tedavilerini bu alanda daha da iyileştirmek için CRISPR-Cas9 tekniği ile birden fazla kere genetiği değiştirilmiş MKH'lerin oluşturulması ve bu hücrelerin gen ifade seviyelerinin kantitatif gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (qRT-PZR) ile karşılaştırılması ve validasyonu amaçlanmıştır. Bu yönteme örnek olarak, ilk aşamada yeşil floresan proteinini (GFP) overekprese eden viral vektör transdüksiyonu ile GFP gen ifadesi sağlanan MKH'lerde, daha sonra ikinci bir lentivirüs transdüksiyonu ile GFP gen ifadesi nakavt edilmiştir. Floresan mikroskobu ile hücrelerin gerçek zamanlı takibi ve görüntülenmesi ile hücreler valide edilerek, MKH'lerde iki farklı transdüksiyon ile genetik modifikasyon taşıyan sağlıklı hücre hatları oluşturulmuştur. Bu hücre hatlarının kök hücre markerlerinin karakterizasyonunda yabanıl tip MKH ile iki kez transdüksiyon yapılmış MKH'lerin ekspresyon seviyelerinde anlamlı bir fark görülmemiştir. Bu çalışmanın sonucunda geliştirdiğimiz ve sunduğumuz optimizasyonlar ve yöntemler sayesinde ileride gen terapi alanında MKH'lerin kullanımına olanak sağlanacaktır.

Özet (Çeviri)

Mesenchymal stem cells (MSCs) are multipotent cells that have the ability to divide and proliferate into specialized cell types. Wharton's Jelly (WJ) contains a connective tissue that rich in MSCs. Although WJ-MSCs are one of the most widely used stem cell types in regenerative medicine and cellular therapy, their use in the treatment of diseases in gene therapy applications is limited. This is due to the difficulty of generating and producing genetically modified MSCs. Within the scope of this thesis; we aimed to create MSCs that harbor multiple genetic manipulations using CRISPR-Cas9 and other gene expression methods and compared and validated their stem cell marker gene expression levels using quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR). At proof-of-concept, we first overexpressed green fluorescent protein (GFP) using lentiviral vector transduction to induce GFP gene expression and then knocked-out GFP protein expression using CRISPR-CAS9 lentiviral transduction against GFP gene. We measured stem cell specific gene expression markers in these cell lines using real-time pcr and performed further validation via imaging of the cells with fluorescence microscopy. We found no significant difference in stem cell marker expression or the health of cells between wild-type MSCs and genetically modified MSCs even after dual transduction. We hope that in the future, the optimizations and methods we have developed and presented here will enable further studies and use of genetically enhanced MSCs, especially in gene therapy applications

Benzer Tezler

  1. Regulatory role of aplnr signaling in migration and differentiation of mesoderm tissue and mesenchymal stem cells

    Aplnr sinyalinin mesoderm doku ve mezenkimal kök hücre farklılaşmasındaki ve migrasyonundaki düzenleyici rolü

    HATİCE BURCU ŞİŞLİ

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    BiyomühendislikYeditepe Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AYŞEGÜL DOĞAN

  2. Improvement of germ stem cell pool by leptin supplementation and gene editing for male infertility

    Erkek infertilitesi için germ kök hücre havuzunun leptin ilavesi ve gen düzenleme ile iyileştirilmesi

    NİLGÜN YERSAL

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2020

    Histoloji ve EmbriyolojiHacettepe Üniversitesi

    Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. PETEK KORKUSUZ

  3. Development of whole blood stage vaccine for malaria treatment via CRISPR-gene editing technology

    CRISPR-gen düzenleme teknolojisi ile sıtma tedavisinde kullanılacak canlı zayıflatılmış kan evresi aşısı geliştirilmesi

    GÖZDE DEVECİ

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2022

    BiyoteknolojiBezm-i Alem Vakıf Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. BİNNUR TEMEL

    DOÇ. DR. AHMED S.I.ALY

  4. Development of broomrape (Orobanche spp., Phelipanche spp.) -resistant tomato (Solanum lycopersicum) using gene editingtechnology (CRISPR)

    Gen düzenleme teknolojisi (CRISPR) kullanılarak canavar otuna (Orobanche spp., Phelipanche spp.) karşı dayanıklı domates geliştirilmesi

    CANSU BÜLBÜL

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2021

    BiyoteknolojiAkdeniz Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NEDİM MUTLU

  5. Investigation of the role of neurotrophin receptor associated death domain protein in regulation of Wnt/β-catenin signaling using the embryonic and CRISPR/Cas9 knockout models of zebrafish

    Nörotrofin reseptörü ile ilişkili ölüm bölgesi proteininin Wnt/ β - katenın sinyal iletiminin düzenlenmesindeki rolünün zebrabalığı embriyonik modeli ve CRISPR/Cas9 knockout modeli ile araştırılması

    ÖZGE ÇARK

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2021

    BiyolojiDokuz Eylül Üniversitesi

    Moleküler Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. HATİCE GÜNEŞ ÖZHAN