Rekombinant Pichia pastoris ile örümcek ipeği proteininden blok polimer üretimi
Production of block polymers from spider silk protein with recombinant Pichia pastoris
- Tez No: 718490
- Danışmanlar: PROF. DR. GAYE ÖNGEN ÖZGEN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyomühendislik, Biyoteknoloji, Polimer Bilim ve Teknolojisi, Bioengineering, Biotechnology, Polymer Science and Technology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2022
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ege Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Biyoteknoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 92
Özet
Blok kopolimer, içindeki kovalent bağlarla bir araya gelmiş iki veya daha fazla sayıdaki farklı blokların, doğrusal bir düzenlemesinin bulunduğu moleküller içeren bir polimerdir. Blok kopolimerler yapılarındaki kimyasal bağlar sayesinde yüksek şeffaflık ve dengeli mekanik özellikler kazanmaktadır. Biyobozunur bloklar içeren blok kopolimerler, ilaç dağıtma sistemleri, doku mühendisliği, protez implantlar dahil birçok alandaki potansiyel uygulamaları ile dikkat çekmektedir. İpek, yapısında blok kopolimerler ve hidrofobik bloklar bulunduran doğal bir polimerdir. Örümcekler ve ipek böceklerince üretilen ipek polimerleri, kolay modifikasyon olanağına sahip, hidroksiapatit gibi kompozit materyallerle de uyumludur. Örümcek ipeği proteini Spidroinler, kemik dokusu yenilenmesi sürecinde kullanılabilecek mekanik özelliklere sahip olmalarına rağmen doğada üretilen miktarların az olması ve üretimdeki zorluklar, bakteriler, mayalar, transgenik bitki ve hayvanlar kullanılarak rekombinant üretim çalışmalarının yapılmasını sağlamıştır. Metilotropik maya P. pastoris, ucuz tanımlanmış ortamlardaki hızlı büyüme ile yüksek hücre yoğunluklarına ulaşma, hücre dışı protein salgılama yeteneği ve post-translasyonel modifikasyonlar ile doğru katlanan rekombinant ökaryotik proteinlerin üretimini sağlaması sayesinde popüler konak sistemlerinden biri haline gelmiştir. Tez çalışmasında, kemik iyileşmesine yardımcı apatit bağlama bölgesi dizisi ile zenginleştirilmiş spidroinin, üretimini gerçekleştirmek üzere gen aktarılan Pichia pastoris (X33) mayasının çalışmada 25, 27 ve 30 °C sıcaklık değerleri ve 4, 5.5 ve 7 pH değerlerinde 2 L biyoreaktör üretimleri gerçekleştirilmiştir. C1 suşunda 27 °C'de 7 pH değerinde 181.72 g/L; A2 suşunda 27 °C'de 5.5 pH değerinde 130 g/ L yaş hücre ağırlığına ulaşılmıştır. İlgili saflaştırma basamakları sonunda yapılan SDS-PAGE analizlerinde 36 kDa boyutundaki protein gözlemlenmiştir.
Özet (Çeviri)
A block copolymer is polymer containing molecules in which there is a linear arrangement of two or more different blocks joined together by covalent bonds that give high transparency, stable mechanical properties. They containing biodegradable blocks have potential application fields including drug delivery systems, tissue engineering, prosthetic implants. Silk, natural polymer produced by spiders and silkworms, that contains block copolymers and hydrophobic blocks, compatible with composite materials such as hydroxyapatite, which have easy modification possibilities. Although spider silk protein, Spidroins, have mechanical properties that can be used for bone tissue regeneration, low natural production amounts and production difficulties have enabled recombinant production studies using bacteria, yeasts, transgenic plants and animals. The methylotropic yeast P. pastoris, is popular host system with its rapid growth in inexpensive defined media, reaching high cell densities, ability to secrete extracellular proteins, correctly folded recombinant eukaryotic protein production with post-translational modifications. In this thesis, 2 L bioreactors were produced with Pichia pastoris (X33) yeast, which was gene transferred to produce spidroin, which is enriched with apatite binding domain sequence that helps bone healing at 25, 27 and 30 °C temperature values and 4, 5.5 and 7 pH values. A wet cell weight of 181.72 g/L was reached in strain C1 at pH 7 at 27 °C, and 130 g/L at pH 5.5 30°C in strain A2. 36 kDa protein was observed in the SDS-PAGE analyzes performed at the end of the relevant purification steps.
Benzer Tezler
- Effect of pH on erythropoietin production by recombinant Pichia pastoris in fed-batch operation
Rekombinant Pichia pastoris ile eritropoietin üretiminde pH etkisinin yarı kesikli işletim ile araştırılması
ELİF ŞÜKRAN SOYASLAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2010
BiyomühendislikOrta Doğu Teknik ÜniversitesiKimya Mühendisliği Bölümü
PROF. DR. PINAR ÇALIK
- Defined and complex medium based feeding strategy development for recombinant human growth hormone production by P. pastoris under gap promoter
Pichia pastoris ile rekombinant insan büyüme hormonu üretimi için tanımlı ve kompleks ortam temelli besleme stratejisi geliştirilmesi
BEBETA HOXHA
Yüksek Lisans
İngilizce
2016
Kimya MühendisliğiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. PINAR ÇALIK
PROF. DR. TUNÇER H.ÖZDAMAR
- Feeding strategy development for human growth hormone production by Pichia pastoris
Pichia pastoris ile insan büyüme hormonu üretimi için besleme stratejilerinin geliştirilmesi
BAHAR BOZKURT
Yüksek Lisans
İngilizce
2012
BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. PINAR ÇALIK
PROF. DR. TUNÇER ÖZDAMAR
- Effect of signal sequences and promoters in recombinant extracellular protein production by Pichia pastoris
Sinyal dizinlerin ve promotorların Pichia pastoris ile hücre-dışı rekombinant protein üretimine etkisi
ASLAN MASSAHI
Doktora
İngilizce
2017
BiyolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. PINAR ÇALIK
DOÇ. DR. ÇAĞDAŞ D. SON
- Effects of carbon sources and feeding strategies on human growth hormone production by metabolically engineered Pichia pastoris
Karbon kaynaklarının ve besleme stratejilerinin rekombinant Pichia pastoris ile insan büyüme hormonu üretimine etkisi
EDA AÇIK
Yüksek Lisans
İngilizce
2009
BiyomühendislikOrta Doğu Teknik ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. PINAR ÇALIK
PROF. DR. TUNÇER ÖZDAMAR