Geri Dön

Chaetomium thermophilum format dehidrogenaz enzimi üzerine HIS-TAG uzantısının etkisinin araştırılması

Investigation of the effect of HIS-TAG extension on Chaetomium thermophilum format dehydrogenase enzyme

PDF İndir

  1. Tez No: 723923
  2. Yazar: HACER ESEN
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. BARIŞ BİNAY
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Biyomühendislik, Biyoteknoloji, Biochemistry, Bioengineering, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2022
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Gebze Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Kimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 51

Özet

Enzimleri istenen miktarlarda elde etmek ve fonksiyonlarını incelemek için çeşitli protein ifade sistemleri kullanılabilir. Polihistidin etiketi eklemek, endüstriyel uygulamalar için FDH'ler gibi çeşitli enzimleri elde etmenin yararlı bir yoludur. Chaetomium thermophilum'dan (CtFDH) elde edilmiş olan NAD+ bağımlı format dehidrogenaz, NAD+'nın NADH'ye indirgenmesiyle birlikte formatın ve karbondioksite dönüştürülmesi için kullanılır. Bu çalışma, N-terminal Histidin etiketli CtFDH (N-CtFDH) ve C-terminal Histidin etiketli CtFDH (C-CtFDH)'ın, Histidin etiketinin konumunun enzimin etkinliği ve kinetik parametreleri üzerindeki etkisini öğrenmek için yapılmıştır. İlgili proteinlerin çözünürlüğü, etiket konumundan etkilenmemiş, ancak N-terminal bölgesindeki Histidin etiketi, sipesifik aktivitede ve enzimin kinetik yeteneğinde bozulmaya neden olmuştur. Elde edilen sonuçlar, enzimin C terminalinin polihistidin etiketi için uygun bölge olduğunu göstermiştir. C-CtFDH yaklaşık olarak N-CtFDH'den üç kat daha büyük özgül aktivite ve iki kat daha yüksek katalitik verimliliğe sahiptir. Sonuçlar, CtFDH'nin N-terminal veya C-terminal ucuna bir Histidin etiketinin eklenmesinin protein üzerinde farklı etkilere sahip olduğunu proteinin amino ucunun CtFDH'nin fonksiyonu için çok önemli olduğunu göstermektedir.

Özet (Çeviri)

Several protein expression systems can be used to get enzymes in required quantities and study their functions. Incorporating a polyhistidine tag is a beneficial way of getting various enzymes such as FDHs for industrial applications. The NAD+ dependent formate dehydrogenase from Chaetomium thermophilum (CtFDH) can be utilized for interconversion of formate to carbon dioxide coupled with the conversion of NAD+ to NADH. In this study, N-terminal His tagged CtFDH (N-CtFDH) and C-terminal His tagged CtFDH (C-CtFDH) was constructed to learn the effect of His tag location on the activity and kinetic parameters of enzyme. The solubility of proteins was not affected by tag position, however, an interference on N-terminal region caused to a deterioration in specific activity and kinetic ability of enzyme. The obtained results indicated that the C-terminus of enzyme is appropriate region for tag engineering. The C-CtFDH has approx. three fold larger specific activity and two fold higher catalytic efficiency than N-CtFDH. The results suggest that insertion of a His-tag at the N-terminal or C-terminal end of CtFDH has different effects on the protein and the N-terminal fragment of protein is crucial for function of CtFDH.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    526619

    Effect of active site mutations in nad+ dependent chaetomium thermophilum format dehydrogenase on conversion of carbon dioxide to formate

    Nad+ bağımlı chaetomium thermophilum format dehidrogenazın aktif bölgesindeki mutasyonların karbondioksiti formata dönüştürmesindeki etkisi

    BERİN YELMAZER

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2018

    BiyokimyaGebze Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. BARIŞ BİNAY

  2. Tez No

    675062

    Effect of amino acid positions located on linked region on Chaetomium thermophilium formate dehydrogenase (CtFDH) activity

    Chaetomium thermophilium format dehidrogenaz (CtFDH) aktivitesine bağlanti bölgesindeki amino asit pozisyonlarinin etkisi

    ELİF GÜNAY

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2021

    BiyokimyaGebze Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. BARIŞ BİNAY

  3. Tez No

    674752

    CtFDH production in Pichia pastoris using a novel expression system

    Pichia pastoris ifade sistemi kullanılarak CtFDH üretimi

    BEDRİ BURAK DURAKSOY

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2020

    BiyolojiGebze Teknik Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. BARIŞ BİNAY

  4. Tez No

    674875

    Investigation the effect of Val310Asn on NAD+ dependent Chateomium thermophilum formate dehydrogenase enzyme by site-directed mutagenesis

    NAD+ bağımlı Chateomium thermophilum format dehidrojenaz enziminin üzerindeki sahaya yönelik mutajenez ile Val310Asn etkisinin araştırılması

    İLKE SELÇUK

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2021

    BiyolojiGebze Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. BARIŞ BİNAY

  5. Tez No

    639684

    Investigating the impact of histidine 312 active site residue mutation on CO2 reduction activity of Chaetomium thermophilium formate dehydrogenase

    Chaetomium thermophilium format dehidrogenazın aktif bölgesinde bulunan histidin 312 aminoasidinin alanin ile değiştirilerek CO2 indirgenmesindeki etkisinin sorgulanması

    MUSTAFA BAYRAM

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2020

    BiyokimyaGebze Teknik Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. BARIŞ BİNAY

Geri Dön