Herstellung und charakterisierung des fusionsproteins cd95-ig zur untersuchung der rolle der cd95/cd95l vermittelten apoptose bei 'transplantat-gegen-wirt' erkrankungen
Graft versus host' hastalığında cd95/cd95l iletilen apoptoz araştırmasında cd95-ıg füzyon proteinin üretimi ve karakterizasyonu
- Tez No: 745916
- Danışmanlar: PROF. DR. GÜNTER DERİGS
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Allerji ve İmmünoloji, Allergy and Immunology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 1999
- Dil: Almanca
- Üniversite: Johannes Gutenberg-Universität Mainz
- Enstitü: Yurtdışı Enstitü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 103
Özet
Allojenik kök hücresi naklinden dolayı çoğunlukla ve ciddi komplikasyon ile CD95/CD95L - Reseptör çifti -“Graft Versus Host”hastalığın (GvHD) ortaya çıkmasında önemli ölçüde iştirak etmektedir. Graft Versus Host hastalığın azalmasını hedeflemek için önemli ve geleceği parlak olan reseptör inhibisyonu (CD95) - Ligant (CD95L) etkileşim metotlarıdır. Bu hedef için mevcut olan çalışmada iki rekombinan çözüle bilir CD9 5-Ig füzyon proteinler (Fas-Fc) tedavi edici etken olarak üretilmiştir. Bu iki füzyon proteinleri, CD9 5' in hücre dışı alanından ve G 1 hüman bağışık globünlerin (Fc-alan) değişmez alanlarından bir araya gelmektedir. Yüksek protein veriminden dolayı esktensor sistemi olarak Drosophila melanogaster hücre hatları (SC2) seçilmiştir. Baskıyla boşaltılan füzyon proteinleri afinite kromatografi üzerinden saflaştırılmıştır ve akabinde karakterize edilmiştir. Kimyasal protein araştırmasında ise proteinler, beklenen moleküller ağırlığını ve beklenen sabit Dimer yapısını nativ bir durumda kendilerini göstenniştir. Her iki füzyon protein türsel olarak a-CD95-Ak ve a-HA-Ak türe .zgüyle boyanmıştır. Uygulanan bileşim çalışmalarında CD95-Ig' nin, membrana bağlı CD95L' ye birleştirme yeterliliğini kanıtlamıştır. Son olarak CD95+ 20 hücre de Apoptozis ölçümleri uygulanmıştır ve CD95 L indükleme Apoptozis azalma ölçüsü̈ füzyon proteinlerin dahilinde araştırılmıştır. Bu vesileyle kendi üretmiş olduğu Fas-Fc ile Apoptozis tutukluluğu elde edilmemiştir. Tecimsel Fas-Fc (FF-RD) nin uygulamasıyla kontrol olarak ulaşılmıştır. Üretilen füzyon proteinleri memeli hayvanlarda fizyolojik CD95 göre sınırlı afinite üzerinden CD95L' ye karşı organize ettiği tahmin edilmektedir. CD95 ve CD95L arasındaki Apoptozis araştırmasındaki etkileşimi engelleyebilmek için kendi yüksek protein birleşiminde bile bu azalan afini te yetersiz kalmaktadır. Azalan bu afinite nedeniyle Glikozilasyonda SC2 - hücreden kazanılan füzyon protein ve fizyolojik CD95 daha doğrusu memeli hayvan hücrelerinden baskıyla boşaltılan Fas-Fc farkı hakkında müzakere edilmektedir. Bu hipotez Füzyon proteinin karbonhidrat yan zincirinin analizimi tarafından test edilmiştir. Bu hipotez kabul edildiği taktirde, o zaman CD95-Ig ekstensoru memeli hayvan ekstensor sistemine gereksinim duyulacaktır.
Özet (Çeviri)
The CD95/CD95L receptor pair is significantly involved in the occurrence of graft-versus-host disease (GvHD), a frequent and serious complication following allogeneic stem cell transplantation. A promising approach to achieve a reduction in GvHD is the inhibition of the receptor (CD95) - ligand (CD95L) interaction. For this purpose, two recombinant soluble CD95-Ig fusion proteins (Fas-FC) were produced as therapeutic agents in the present work. The two fusion proteins are composed of the extracellular domain of CD95 and the constant region of human immunoglobulin G1 (FC domain). Due to its high protein yield, a Drosophila melanogaster cell culture (SC2) was chosen as the expression system. The expressed fusion proteins were purified by affinity chromatography and then characterized. In the protein chemical analysis, the proteins showed the expected molecular weight and the expected stable dimer structure in the native state. Both fusion proteins could be stained specifically with -CD95-Ab and -HA-Ab. The binding studies carried out subsequently demonstrated the ability of CD95-Ig to bind specifically to membrane-bound CD95L. Finally, apoptosis measurements were performed on CD95+ A20 cells and the degree of inhibition of CD95L-induced apoptosis in the presence of the fusion protein was determined. However, no apoptosis inhibition could be achieved with the self-made Fas-FC, as could be achieved by using a commercial Fas-FC (FF-RD) as a control. It is therefore reasonable to assume that the fusion proteins produced have a lower affinity for CD95L than the physiological CD95 in mammals. This reduced affinity, even at high protein concentrations, is not sufficient to inhibit the interaction between CD95 and CD95L in apoptosis assays. A difference in the glycosylation of the fusion protein obtained from SC2 cells and the physiological CD95 or the Fas-FC expressed in mammalian cells is discussed as the cause of this reduced affinity. This hypothesis could be tested by analyzing the carbohydrate side chains of the fusion proteins. If this assumption is confirmed, the expression of the CD95-Ig construct in a mammalian expression system would be necessary.
Benzer Tezler
- New polysiloxane based salt-in-polymer electrolytes
Başlık çevirisi yok
YUNUS KARATAŞ
Doktora
İngilizce
2006
KimyaWestfälische Wilhelms-Universität MünsterKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HANS-DIETER WIEMHÖFER
- Yerel yönetimler için kent bilgisi sistemi tasarımı ve uygulaması
Entwergen-und implementierung eines urban-informations systems für die kommunalen verwaltungen
ZÜBEYDE ALKIŞ
- Bakır elektrolizinde paslanmaz çelik katot üzerinde toplanan bakıra yüzey aktifleştiricilerin etkisi
Başlık çevirisi yok
BORA ÇALIŞKAN
- Sıvı ham demirden Na2Co3 ilavesi ile kükürdün giderilme koşullarının incelenmesi
Untersuchung der verhöltnisse bei der entschwefelung von roheisenschmelzen mit Na2CO3 zusatz
ÖMER FARUK BAYHAN
